Análise fenotípica de roedores malária parasita assexuada e estágios do sangue sexual e estágios do mosquito

Resumo

Devido às semelhanças marcantes do ciclo de vida e biologia de parasitas da malária de roedores para parasitas da malária humana, modelos de malária de roedores tornaram-se indispensáveis para a pesquisa da malária. Neste documento, padronizamos algumas das técnicas mais importantes utilizadas na análise fenotípica de espécies selvagens e transgênicas de malária por roedores.

Resumo

Recentes avanços em genética e tecnologias de biologia de sistemas têm promovido a nossa compreensão da biologia dos parasitas da malária no nível molecular. Entretanto, os alvos eficazes do parasita da malária para o desenvolvimento da vacina e da quimioterapia são ainda limitados. Isso se deve, em grande parte, à indisponibilidade de modelos relevantes e práticos de infecção in vivo para espécies humanas de Plasmodium , principalmente para p. falciparum e p. vivax. Portanto, espécies de roedores de malária têm sido amplamente utilizadas como alternativa prática em modelos in vivo para a vacina contra a malária, direcionamento de drogas, resposta imune, e estudos de caracterização funcional de Plasmodiumspp. genes conservados. De fato, modelos de malária por roedores provaram ser inestimáveis, especialmente para explorar a transmissão de mosquitos e a biologia do estágio hepático, e foram indispensáveis para estudos imunológicos. No entanto, existem discrepâncias nos métodos utilizados para avaliar os fenótipos de parasitas transgênicos e selvagens do tipo assexuado e sexual. Exemplos dessas discrepâncias são a escolha de uma infecção intravenosa versus intraperitoneal de roedores com parasitas no estágio sangüíneo e a avaliação do exflagellation masculino do gameta. Neste documento, detalhamos métodos experimentais padronizados para avaliar os fenótipos de estágios de sangue assexuado e sexual em parasitas transgênicos expressando espécies de parasitas da malária do tipo repórter-gene ou de roedores selvagens. Também detalham os métodos para avaliar os fenótipos de estádios de mosquito parasita da malária (gametas, ookinetes, oocistos e esporozoites) dentro de vetores de mosquito Anopheles . Estes métodos são detalhados e simplificados aqui para as cepas letais e não letais de p. berghei e p. de , mas também podem ser aplicados com alguns ajustes para p. chabaudi e p. espécies de malária de roedores de vinckei .

Introdução

Os parasitas da malária causam centenas de milhões de infecções por malária em humanos em todo o mundo, com mais de 600.000 mortes todos os anos¹. As infecções humanas são causadas por cinco espécies de parasitas da malária, nomeadamente p. falciparum, p. vivax, p. ovale, p. malariaee p. knowlesi. A maioria das mortalidades clínicas da malária é causada por P. falciparum na África Subsaariana¹. Outra espécie de parasita da malária humana que causa grandes morbidades mundiais fora da África Subsaariana é P. vivax². As outras três espécies são mais restritas geogr....

Protocolo

Todos os experimentos animais aqui descritos foram conduzidos de acordo com os protocolos aprovados do Comitê institucional de cuidados e uso de animais (IACUC) da Universidade de Tulane e do Comitê de ética em animais da Universidade Bezmialem Vakif. Todos os outros protocolos experimentais e o uso de DNA recombinante foram conduzidos de acordo com os protocolos aprovados do Comitê de biossegurança institucional (IBC) da Universidade de Tulane.

1. infecção de camundongos com parasitas de fase sanguínea para análise de parasitemia e ensaios de infecção de mosquitos

1. Dia-3: injeção opcional de fenilhidrazina em camundongos b....

Resultados

O sucesso da aplicação de ferramentas e técnicas genéticas reversas para parasitas da malária revolucionou o campo da pesquisa em malária, com a capacidade de adicionar, excluir ou modificar segmentos genóricos específicos de várias espécies de Plasmodium ³⁹. Importante, os loci genomic dispensável foram identificados e usados com sucesso introduzir marcadores da proteína da fluorescência em parasita do roedor e da malária humana pela recombinação homous d.......

Discussão

Apesar da semelhança na Biologia geral de seus ciclos de vida com a de parasitas da malária humana, os modelos de malária por camundongo também têm muitas dessemelhanças com as espécies humanas de Plasmodium que limitariam seu uso como modelos confiáveis in vivo . Por exemplo, com exceção de parasitas vivos-atenuados como vacinas, todos os estudos vacinais com subunidade e DNA e outras vacinas deram excelentes resultados no modelo do camundongo, mas em seres humanos que viviam em áreas endêmicas, os res.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Heparina	Sigma	375095-100KU
Ácido xanturênico	Sigma	D120804-5G
Hipoxantina	Sigma	H9377-25G
Solução de Alsever	Sigma	A3551-500ML
Bicarbonato de Sódio	Sigma	S5761-500G
Fenilhidrazina	Sigma	P26252-5G
Glicerol	Sigma	G5516-500ML
Giemsa	Sigma	GS1L-1L
26 G x 3/8 Agulha de Precisão Deslizante,	Seringa Becton Dickinson	305110
1 mL TB, 26 G x 3/8	Seringa de Insulina Becton Dickinson	309625
1 cc, U-100 27 G	Becton Dickinson	329412
Isoflurano, USB	Piramal	2667- 46- 7
PBS, pH 7.4	Gibco	10010049
RPMI	Gibco	22400105
DMEM	Gibco	11995065
Pencillin/Streptomycin	Gibco	10378016
Soro Fetal Bovino	Gibco	10082147
Fibra de Vidro Lã	Corning	3950