ההשפעות של טסיות דם עשיר Allogeneic פלזמה (PRP) על תהליך ריפוי של אכילס משרטוטי הגידים של חולדות: תיאור מתודולוגיים
Summary
פרוטוקול זה מתאר את תהליך ההערכה של ריפוי גידים אצל חולדות זה מוזרק עם טסיות allogeneic פלזמה עשיר (PRP) או תמיסת מלח לאחר הסרת חלק גיד אכילס. ההתקדמות של גיד ריפוי מוערך במספר נקודות זמן באמצעות סוגים שונים של ניתוחים.
Abstract
מאמר זה מתאר את ההליכים ניסיוני המשמש כדי לבחון אם PRP יכול בהחלט להשפיע על גיד ריפוי. ישנם 4 שלבים עיקריים לעקוב: לגרום פגיעה בגיד אכילס; להכין PRP ולהזריק אותו (או תמיסת מלח); להסיר את הגיד; ולבצע הערכות biomechanical מולקולרית, היסטולוגית. בכל שלב, כל הנהלים והשיטות מתוארים בפירוט, אז הם יכולים להיות מועתק בקלות.
אכילס הגידים כבר בניתוח משרטוטי (הסרת קטע ארוך 5 מ מ). לאחר מכן, PRP או תמיסת הוזרק ללמוד אם PRP יש השפעה חיובית על הריפוי של הגיד. שלוש קבוצות של בעלי חיים 40 (סה”כ 120 חולדות השתמשו במחקר זה) היו מחולק 2 קבוצות: קבוצה קבוצה הזרקת PRP ובקרת זריקה מלוחים. חולדות הוקרבו בהגברת נקודות זמן (קבוצה א’: 5 ימים; קבוצה ב’: 15 ימים; קבוצה ג’: 30 ימים), גידים הוסרו. הגידים 90 עברה בדיקות ביו-מכני לפני ביצוע ניתוח transcriptomic, הגידים הנותרים 30 הוגשו ניתוח היסטולוגית.
Introduction
קרישה, תהליכים דלקתיים התפקידים אפנון חסינות של טסיות הינם ידועים1. לאחרונה, זה הוכח שיש להם גם מאפיינים מבריא2,3. אכן, ציטוקינים וצמיחה גורמים שונים (VEGF, PDGF, TGF-B, IGF-שאני, דבורה שחר) שפורסמו על ידי טסיות בתקופת degranulation. אלה גורמי גדילה לקדם אנגיוגנזה, רקמות ו פצע ריפוי (עצם, עור, שריר, גיד)2. צריך שתוציאו דם עצמיים מייצרת טסית דם עשיר פלזמה (PRP אשר מכיל ריכוזים טסיות גבוהה בהתאם לשיטת הבידוד) (בין 3 10 פעמים דם ריכוזים בסיסית). אכן, טכניקות שונות של הכנת PRP אינו יכול לספק מוצר סופי זהים. עד עכשיו, כבר אין הסכמה כללית הבינלאומי בנושא זה. בסך הכל, PRP יכול להיות אופציה טיפולית אטרקטיבי לטיפול בבעיות כרוניות השלד והשרירים, כגון tendinopathy, מחלת החיתולית הכפית, דלקת מפרקים ניוונית, התביעה4. הוא שימש בפעם הראשונה תוך ניתוח אוראלי implantology4 כדי לשפר ולהאיץ את עצם ריפוי לאחר הצבת שתל דנטלי. במחקר זה, אנו מתארים שיטה ישימה המאפשר רכישת PRP עבור ניסויים בבעלי חיים4.
מאז נגעים של הגידים הם נצפו לעתים קרובות ספורטאים ועובדי גופנית, שיפור את תהליך הריפוי, ובכך להקטין את זמן ההחלמה הם עניין רב5. שיטות טיפול חדשות זה מפתחים לעיתים קרובות כרוך השימוש של גורמי גדילה, הממשל של PRP דרך פשוטה ולא פולשנית לספק שילוב של גורמי גדילה אנדוגני4.
מספר מחקרים במבחנה או בעל חיים הראו כי המינהל של פלסמה המכילים רמה גבוהה של טסיות דם, על ידי שחרור מתווכים ביולוגי, יכול לעורר תיקון גיד, רצועה על ידי שחרור מתווכים ביולוגי6 ,7,8,9. יתר על כן, מחקרים אחרים הראו כי PRP יכול לעורר סוג III סינתזה קולגן גיד ואני תאים9,10,11. גם הוצע כי PRP יכול להקטין את ההפעלה של מטריקס metalloproteinases (MMPs), לכן להפחית את ההשפלה של המטריקס. התאים המעורבים בתהליך דלקת יכול לייצר MMP-9, אשר ממלא תפקיד רקמות (הפיזיולוגיות, פיפטות) הנגרמת על ידי דלקת12.
על סמך מידע זה, שיערנו זריקה אחת PRP לתוך הגידים אכילס המחולקת למקטעים של חולדות יכול לשפר את תהליך ההחלמה, חוזק מכני רב, הרקמה לתיקון. זה נבדק על ידי מדידת המאפיינים ביו-מכני של הגידים הריפוי במהלך תהליך ההחלמה, על ידי ביצוע ניתוחים היסטולוגית ומולקולרית להעריך קולגן שיפוץ בתוך הרקמה החדשה. מטרת המחקר הייתה לבחון אם זריקה אחת של allogeneic PRP להשפיע ריפוי של הגידים אכילס המחולקת למקטעים.
Protocol
Representative Results
Discussion
טסיות דם חיוניים דלקתית בשלב מוקדם הגיד תהליך הריפוי. כאשר אלה טסיות נחשפים מחייב רקמות או גורמים זירוז קרישת הדם, הם ישחררו את גורמי גדילה שמוחזקים במלאי בα גרגירים. עקב אינטראקציה זו, מטריצה חוץ-תאית מקרומולקולות synthetized, להתרבות תאים mesenchymal. טסיות הדם יש גם פעילות chemotactic ובתאים בזרם הדם, ש?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
מחקר זה נתמך על ידי תקן דה Liège ומענקים לז’ן – Lechien את הכספים Frédéricq ליאון.
Materials
| Xylazine (Xyl-M) | VMD | none | anesthetic |
| Ketamin (Jétamine 1000 CEVA) | CEVA Santé Animale | none | anesthetic |
| Buprenorphin (Vetergésic Multidosis) | ALSTOE | none | Painkiller |
| iso-Betadine | MEDA-Pharma | none | Desinfectant |
| resorbable yarn Vicryl 6/0 | Johnson & Johnson | ||
| Nembutal | CEVA Santé Animale | none | Anesthetic |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | Preserves structure of the tissue |
| Isopropanol 100% | VWR | 20,922,364 | |
| Ethanol 95% | VWR | 20,823,362 | |
| Xylene | VWR | 28973.363 | |
| Paraffin | VWR | LEIC3950.1006 | |
| Hematoxylin | Millipore | 1.15938.0025 | Colorant |
| Eosin | Millipore | 1.15935.0100 | Colorant |
| Eukitt | Sigma-Aldrich | 3989 | Mounting Medium |
| CaCl2 |
Referências
- Kaux, J., Degrave, N., Crielaard, J. Platelet rich plasma traitement des tendinopathies chroniques? Revue de la littérature. Platelet rich plasma treatment of chronic tendinopathies? Review of literature. J. Traumatol. du Sport. 24, 99-102 (2007).
- Anitua, E., et al. Autologous preparations rich in growth factors promote proliferation and induce VEGF and HGF production by human tendon cells in culture. J. Orthop. Res. 23, 281-286 (2005).
- Bosch, G., et al. Effects of platelet-rich plasma on the quality of repair of mechanically induced core lesions in equine superficial digital flexor tendons: A placebo-controlled experimental study. J. Orthop. Res. 28, 211-217 (2010).
- Kaux, J. F., Drion, P., Croisier, J. L., Crielaard, J. M. Tendinopathies and platelet-rich plasma (PRP): From pre-clinical experiments to therapeutic use. J. Stem Cells Regen. Med. 11, P7-P17 (2015).
- Maffulli, N., Wong, J., Almekinders, L. C. Types and epidemiology of tendinopathy. Clin. Sports Med. 22, 675-692 (2003).
- Molloy, T., Wang, Y., Murrell, G. The roles of growth factors in tendon and ligament healing. Sports Med. 33, 381-394 (2003).
- Lyras, D. N., et al. The effect of platelet-rich plasma gel in the early phase of patellar tendon healing. Arch. Orthop. Trauma Surg. 129, 1577-1582 (2009).
- Aspenberg, P., Virchenko, O. Platelet concentrate injection improves Achilles tendon repair in rats. Acta Orthop. Scand. 75, 93-99 (2004).
- Visser, L. C., et al. Growth Factor-Rich Plasma Increases Tendon Cell Proliferation and Matrix Synthesis on a Synthetic Scaffold: An In Vitro Study. Tissue Eng. Part A. 16, 1021-1029 (2010).
- Zhang, J., Wang, J. H. -. C. Platelet-Rich Plasma Releasate Promotes Differentiation of Tendon Stem Cells Into Active Tenocytes. Am. J. Sports Med. 38, 2477-2486 (2010).
- Kajikawa, Y., et al. Platelet-rich plasma enhances the initial mobilization of circulation-derived cells for tendon healing. J. Cell. Physiol. 215, 837-845 (2008).
- Pasternak, B., Aspenberg, P. Metalloproteinases and their inhibitors-diagnostic and therapeutic opportunities in orthopedics. Acta Orthop. 80, 693-703 (2009).
- Dell, R. B., Holleran, S., Ramakrishnan, R. Sample size determination. ILAR J. 43, 207-213 (2002).
- Mähler Convenor, M., et al. FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units. Lab. Anim. 48, 178-192 (2014).
- Kaux, J. -. F., et al. Étude comparative de cinq techniques de préparation plaquettaire (platelet-rich plasma). Pathol. Biol. 59, 157-160 (2011).
- Wieloch, P., Buchmann, G., Roth, W., Rickert, M. A cryo-jaw designed for in vitro tensile testing of the healing Achilles tendons in rats. J. Biomech. 37, 1719-1722 (2004).
- Kaux, J. -. F., et al. Vascular Endothelial Growth Factor-111 (VEGF-111) and tendon healing: preliminary results in a rat model of tendon injury. Muscles. Ligaments Tendons J. 4, 24-28 (2014).
- Docheva, D., Hunziker, E. B., Fässler, R., Brandau, O. Tenomodulin is necessary for tenocyte proliferation and tendon maturation. Mol. Cell. Biol. 25, 699-705 (2005).
- Lambert, C. A., Colige, A. C., Munaut, C., Lapière, C. M., Nusgens, B. V. Distinct pathways in the over-expression of matrix metalloproteinases in human fibroblasts by relaxation of mechanical tension. Matrix Biol. 20, 397-408 (2001).
- Nurden, A. T., Nurden, P., Sanchez, M., Andia, I., Anitua, E. Platelets and wound healing. Front. Biosci. 13, 3532-3548 (2008).
- Woodall, J., Tucci, M., Mishra, A., Benghuzzi, H. Cellular effects of platelet rich plasma: a study on HL-60 macrophage-like cells. Biomed. Sci. Instrum. 43, 266-271 (2007).
- Taylor, D. W., Petrera, M., Hendry, M., Theodoropoulos, J. S. A systematic review of the use of platelet-rich plasma in sports medicine as a new treatment for tendon and ligament injuries. Clin. J. Sport Med. 21, 344-352 (2011).
- Mazzocca, A. D., et al. The positive effects of different platelet-rich plasma methods on human muscle, bone, and tendon cells. Am. J. Sports Med. 40, 1742-1749 (2012).
- McCarrel, T. M., Minas, T., Fortier, L. A. Optimization of leukocyte concentration in platelet-rich plasma for the treatment of tendinopathy. J. Bone Joint Surg. Am. 94 (1-8), e143 (2012).
- Boswell, S. G., et al. Increasing platelet concentrations in leukocyte-reduced platelet-rich plasma decrease collagen gene synthesis in tendons. Am. J. Sports Med. 42, 42-49 (2014).
- Virchenko, O., Aspenberg, P. How can one platelet injection after tendon injury lead to a stronger tendon after 4 weeks?: Interplay between early regeneration and mechanical stimulation. Acta Orthop. 77, 806-812 (2006).
