Gli effetti del trapianto Allogeneic Plasma ricco di piastrine (PRP) sul processo di guarigione dei tendini di Achilles sezionato dei ratti: una descrizione metodologica
Summary
Questo protocollo descrive il processo di valutazione della guarigione tendini in ratti che sono stati iniettati con plasma ricco di piastrine allogeniche (PRP) o soluzione salina dopo la rimozione di parte del tendine di Achille. L’andamento del tendine che guarisce è valutato a diversi intervalli di tempo utilizzando diversi tipi di analisi.
Abstract
Questo articolo descrive le procedure sperimentali utilizzate per osservare se PRP può influenzare positivamente la guarigione del tendine. Ci sono 4 principali passi da seguire: indurre una lesione nel tendine di Achille; PRP di preparare ed iniettare (o soluzione salina); rimuovere il tendine; ed eseguire valutazioni biomeccaniche, molecolari ed istologiche. Ad ogni passo, tutte le procedure e i metodi sono descritti in dettaglio, quindi possono essere riprodotti facilmente.
Tendini di Achilles sono stati chirurgicamente sezionata (rimozione di una sezione di lunghezza di 5 mm). In seguito, PRP o soluzione salina è stata iniettata per studiare se PRP ha un effetto positivo sulla guarigione del tendine. Tre gruppi di 40 animali (un totale di 120 ratti sono stati utilizzati in questo studio) sono stati suddivisi in 2 sottogruppi: gruppo di controllo di gruppo di iniezione di PRP e un’iniezione salina. Ratti sono stati sacrificati ad aumentare i punti temporali (gruppo a: 5 giorni; Gruppo b: 15 giorni; Gruppo c: 30 giorni) e tendini sono stati rimossi. 90 tendini hanno subito la prova biomeccanica prima di eseguire analisi trascrittomica e 30 restanti tendini sono stati sottoposti ad analisi istologica.
Introduction
Coagulazione, processi infiammatori e i ruoli di modulazione di immunità delle piastrine sono ben noti1. Più recentemente, è stato dimostrato che hanno anche proprietà lenitive2,3. Infatti, diversi fattori di crescita e citochine (VEGF, PDGF, TGF-B, IGF-I e HGF) vengono rilasciati dalle piastrine durante la degranulazione. Questi fattori di crescita promuovono l’angiogenesi, rimodellamento tissutale e ferita guarigione (ossa, pelle, muscolo, tendine)2. Centrifugazione del sangue autologo produce plasma ricco di piastrine (PRP) che contiene concentrazioni piastrinica elevata a seconda del metodo di isolamento (tra 3 e 10 volte concentrazioni basali del sangue). Infatti, varie tecniche di preparazione del PRP non possono fornire un prodotto finale identico. Fino ad ora, c’ non è stato nessun accordo generale internazionale su questo tema. Nel complesso, PRP potrebbe essere un’interessante opzione terapeutica per il trattamento di patologie muscolo-scheletriche croniche, quali tendinopatia, fascite plantare, osteoartrite e non sindacale4. Esso è stato utilizzato per la prima volta in chirurgia orale e implantologia4 per migliorare e accelerare la guarigione dopo aver piazzato un impianto dentale ossea. In questo studio, descriviamo un metodo riproducibile che consente l’acquisizione di PRP per sperimentazione animale4.
Poiché le lesioni dei tendini sono osservate frequentemente in sportivi e fisica dei lavoratori, migliorare il processo di guarigione e riducendo così il tempo per il recupero sono di grande interesse5. Nuovi metodi di trattamento che sviluppano spesso implicano l’uso di fattori di crescita, e l’amministrazione di PRP è un modo semplice e come minimo dilagante per fornire una miscela di fattori di crescita endogeni4.
Parecchi studi in vitro o animale hanno dimostrato che la somministrazione di plasma, che contiene un alto livello di piastrine, attraverso il rilascio di mediatori biologici, può stimolare la riparazione del tendine e del legamento attraverso il rilascio di mediatori biologici6 ,7,8,9. Inoltre, altri studi hanno dimostrato che PRP può stimolare il tipo I e la sintesi del collagene III nel tendine celle9,10,11. È anche stato suggerito che PRP può diminuire l’attivazione di metalloproteinasi (MMPs) e di conseguenza ridurre la degradazione della matrice. Le cellule che sono coinvolte nel processo di infiammazione possono produrre MMP-9, che svolge un ruolo nel rimodellamento tissutale (fisiologiche e patologiche) indotta dall’infiammazione12.
Basato su queste informazioni, abbiamo supposto che una singola iniezione di PRP nei tendini di Achille sezionati dei ratti potrebbe migliorare il processo di recupero e la resistenza meccanica del tessuto riparato. Questo è testato misurando le proprietà biomeccaniche dei tendini guarigione durante il processo di recupero e attraverso un’analisi istologiche e molecolare per valutare collagene rimodellamento nel tessuto formato di recente. Lo scopo dello studio era di osservare se una singola iniezione di PRP allogeniche potrebbe influenzare la guarigione dei tendini di Achilles sezionati.
Protocol
Representative Results
Discussion
Le piastrine sono essenziali per la fase infiammatoria iniziale del tendine del processo di guarigione. Quando queste piastrine sono esposti all’associazione di tessuto o fattori che inducono la coagulazione, rilasciano fattori di crescita che sono immagazzinati nei granuli α. A causa di questa interazione, macromolecole della matrice extracellulare sono sintetizzati e cellule mesenchimali proliferano. Le piastrine hanno anche un’attività chemiotattica su cellule progenitrici nella circolazione sanguigna, migliorando l…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo studio è stato sostenuto da Standard de Liège e Lejeune – Lechien concede dei fondi Frédéricq Leon.
Materials
| Xylazine (Xyl-M) | VMD | none | anesthetic |
| Ketamin (Jétamine 1000 CEVA) | CEVA Santé Animale | none | anesthetic |
| Buprenorphin (Vetergésic Multidosis) | ALSTOE | none | Painkiller |
| iso-Betadine | MEDA-Pharma | none | Desinfectant |
| resorbable yarn Vicryl 6/0 | Johnson & Johnson | ||
| Nembutal | CEVA Santé Animale | none | Anesthetic |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | Preserves structure of the tissue |
| Isopropanol 100% | VWR | 20,922,364 | |
| Ethanol 95% | VWR | 20,823,362 | |
| Xylene | VWR | 28973.363 | |
| Paraffin | VWR | LEIC3950.1006 | |
| Hematoxylin | Millipore | 1.15938.0025 | Colorant |
| Eosin | Millipore | 1.15935.0100 | Colorant |
| Eukitt | Sigma-Aldrich | 3989 | Mounting Medium |
| CaCl2 |
Referências
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