تقنيات المختبر تستخدم للحفاظ على والتمايز بيوتيبس<em> ضمة الكوليرا</em> العوازل السريرية والبيئية
Summary
وتصف هذه المخطوطة تقنيات صيانة الكوليرا فيبريو المناسبة بالإضافة إلى سلسلة من المقايسات الكيميائية الحيوية، وتستخدم بشكل جماعي للتمييز السريع والموثوق به بين السريرية والبيئية V. كوليراي، بيوتيبس، إلى داخل، أداة تعريف إنجليزية غير معروفة، المختبر، الإطار.
Abstract
البكتيريا السالبة الغرام المائية فيبريو الكوليرا هي العامل المسببة للكوليرا المعدية المعوية المرض. بسبب الانتشار العالمي وشدة هذا المرض، V. وقد تم دراسة الكوليرا على نطاق واسع في كل من البيئة والمختبرات البيئات، التي تتطلب الصيانة المناسبة وتقنيات زراعة. الكلاسيكية و إل تور نوعان بيولوجي رئيسيان يؤلفان V. الكوليرا O1 المصلية، كل منها عرض الخصائص الوراثية والمظهرية فريدة من نوعها التي توفر آليات موثوقة لتوصيف النمط البيولوجي، وتتطلب فوعة متميزة تحفز ظروف زراعة. وبغض النظر عن النمط الحيوي للسلالة المسببة لأي عدوى أو تفشي معين، فإن العلاج المعياري للمرض ينطوي على العلاج بالإماهة المكمل مع نظام من المضادات الحيوية. ومع ذلك، قد يكون تصنيف النمط البيولوجي ضروريا للدراسات المختبرية وقد يكون له تأثيرات أوسع في مجال الطب الحيوي.في أوائل عام 2000 تم التعرف على العزلات السريرية التي تظهر سمات النمط الوراثى والمظاهر الظاهرية من كل من البيوتيب الكلاسيكية و إل تور. وقد تسببت الهجينة التي تم تحديدها حديثا، والتي يطلق عليها اسم متغيرات إل تور، في عزل بيوئي سريري وبيئي ليصبح أكثر تعقيدا من البروتوكولات التقليدية السابقة لتحديد الهوية. بالإضافة إلى وصف V. ( كتكسب و تكبا ) الشاشات الوراثية المستندة إلى ير والفحوصات المظهرية (بوليميكسين B المقاومة، الأيض سترات، النشاط بروتين، النشاط الانحلالي، الحركة، واستقلاب الجلوكوز عبر Voges- بروسكاور مقايسة) تستخدم بشكل جماعي لتمييز و / أو التمييز بين النمط الكلاسيكي والتور بيوتيبس. معا، هذه المقايسات توفر نهجا منهجيا فعالا لاستخدامها كبديل، أو بالإضافة إلى ذلك، مكلفة، والتجارب كثيفة العمالة في تشاراكتريزاتيون أوف V. الكوليرا السريرية (والبيئية) العزلات.
Introduction
الكوليرا مرض في الأمعاء الدقيقة البعيدة الناجمة عن استهلاك المواد الغذائية الملوثة أو المياه التي تحتوي على بكتيريا سلبية الغرام المائية فيبريو الكوليرا . وتشمل أعراض الكوليرا القيء والإسهال المائي الذي لا يمكن السيطرة عليه، مما يؤدي إلى الجفاف الشديد، والذي إذا لم يعالج بشكل صحيح، سيؤدي إلى الوفاة. V. الكوليرا يمكن تقسيمها إلى أكثر من 200 المجموعات المصلية على أساس هيكل سطح الخلية عديد السكاريد O- المستضد. ومع ذلك، أظهرت فقط 2 المجموعات المصلية، O1 و O139، وباء أو جائحة المحتملة 1 ، 2 . وعلاوة على ذلك، كانت المجموعة المصلية O139 معزولة في المقام الأول إلى جنوب شرق آسيا 3 ، 4 ، في حين يتم توزيع المجموعة المصلية O1 في جميع أنحاء العالم. وعلاوة على ذلك، يمكن تقسيم المجموعة المصلية O1 إلى 2 بيوتيبس الرئيسية: الكلاسيكية و إل تور. وكان النمط البيولوجي الكلاسيكي مسؤولا عن أول وباء للكوليرا 6بين عامي 1817 و 1923. الجائحة السابعة الحالية هي نتيجة للنمط الحيوي إل تور، الذي نزح عالميا النمط البيولوجي الكلاسيكي في البيئة 5 ، 6 ، 7 . في الآونة الأخيرة، نشأت سلالات التي تحتوي على الخصائص المميزة لكل من البيوكاليب الكلاسيكية و إل تور 8 ، 9 ، 10 ، 11 ، 12 ، 13 ، 14 ، 15 ، 16 ، 17 ومنذ ذلك الحين كانت تسمى متغيرات الطور 13 ، 17 . وقد أظهرت بعض المتغيرات إل تور قدرات الفوعة مرتفعة مع تطور المرض السريع والحاد أكثر مما لوحظ سابقا، مؤكداوالحاجة إلى نهج أكثر شمولا لتحديد هوية الوكلاء والوقاية من الأمراض والعلاج 8 ، 9 ، 18 . في حين أن تحديد النمط الحيوي لا يملي على الفور العلاج، قد تستفيد المزيد من التقدم في تطوير اللقاحات وكلاء العلاجية في المستقبل من التمييز بيوتيب.
السلسلة الأولى من البروتوكولات المدرجة هنا سوف تمكن المحققين من الحفاظ على V بشكل صحيح. كوليراي، السلالات، إلى داخل، أداة تعريف إنجليزية غير معروفة، المختبر، الإطار. ويتطلب الاتساق والتحليل اللاحق إعداد المخزونات ونمو العزلات التي لا تعتمد على النمط الحيوي. ومع ذلك، على النحو الأمثل للحث على الفوعة التعبير الجيني، مطلوبة بيوتيب تقنيات زراعة مستقلة مستقلة 19 . بالإضافة إلى ذلك، تم إعداد التحضير لمختلف المقايسات الوراثية والبيوكيميائية في هذه المخطوطة.
سرطان الكوليرا (كت) والسمية المشتركة(تكب) هما نوعان من عوامل الفوعة الرئيسية التي يسيطر عليها المنظم الرئيسي توكست في كلا النوعين من V. الكوليرا O1 سيروغروب 20 . كت هو ثنائي السموم يتكون من خمسة كتكس الوحدات الفرعية المحيطة وحدة واحدة كتكسا، وهي المسؤولة عن فقدان بالكهرباء السريع المرتبطة الكوليرا. تكب هو نوع من الطفرة إيف المشفرة من قبل تكب أوبيرون ( تكبابكردستف )، وتشارك في مرفق واستعمار الأمعاء الدقيقة البعيدة. تكبا هو الجين الأول من تكب أوبيرون الذي ترميز وحدات البيلين الفردية الضرورية لبناء بيلوس 8 . يتم حفظ تسلسل الجينات ل كتكسا تماما بين النمط الكلاسيكي و إل تور بيوتيبس ، في حين أن كتسب و تكبا تختلف عبر اثنين من بيوتيبس ولكن يتم حفظها داخل كل النمط الحيوي 8 . يتم حفظ كتكس تماما بين الأنواع الحيوية إلا في اثنين بوسي قاعدة(115 و 203). في النمط الحيوي إل تور، ثيمين يقيم في المواقف الأساسية 115 و 203، في حين أن النمط الحيوي الكلاسيكي يحتوي على السيتوزين في هذه القواعد. يتم حفظ تكبا تماما داخل كل نوع بيوتيب، ولكن تختلف في قواعد متعددة بين الأنماط الحيوية. هذه التمايز الجيني بمثابة علامات تحديد النمط الحيوي الأولي، وبعد تسلسل المنتج تضخيم البوليميراز (ير) المنتج بما في ذلك هذه المواقع، ويمكن مقارنة تسلسل عزل البرية نوع (وت) الكلاسيكية O395 أو وت إل تور N16961 لتحديد الخلفية النمط الحيوي من كت و تكب، على التوالي، في عزل V الكوليرا .
وقد وضعت العديد من البروتوكولات لتمييز الفوارق المظهري بين الكلاسيكية و إل تور بيوتيبس 21 ، 22 ، 23 . بوليميكسين B هو مضاد حيوي الببتيد الذي يضر بسلامة غشاء الخلية الخارجية في البكتيريا سلبية الغرامتيريا، ومقاومة بوليميكسين B يمكن تصور من خلال فحص البوليمكسين B المقاومة 21 . السيترات هو الركيزة الأساسية لدورة كريب، والقدرة على استقلاب سترات كمصدر وحيد الكربون يمكن تحديدها باستخدام فحص الأيض سترات 22 . هابر ترميز منظم عالمي والمنظم النصاب النصاب في V. الكوليرا، هابر، الذي يرتبط إلى مختلف المناطق المروج وينظم الجينات والتعبير أوبيرون 24 . بعض السلالات المسببة للأمراض من ضمة الكوليرا لها طفرة تحول الإطار بشكل طبيعي في الجين هابر التي تسببت في هذا التنظيم تعتمد على الكثافة من الفوعة التعبير الجيني إلى أن تفقد 24 ، 25 . قياس النشاط البروتيني هابر باستخدام وسائل الإعلام آغار الحليب يسمح للباحث لتحديد ما إذا كان عزل معين يحتوي على هابر وظيفية 23 . الانحلال الدم اختبارات الفحص لقدرة سلالة لإفراز الإنزيمات الانحلالية التي تحلل خلايا الدم الحمراء. يمكن أن تصور درجة انحلال الدم على لوحات أجار الدم 23 . وغالبا ما ترتبط الحركة مع الفوعة في ضمة الكوليرا ويمكن تحليلها باستخدام لوحات أجار الحركة 23 . اختبارات فوجيس-بروسكور فحص لقدرة سلالة لتخمر الجلوكوز كمصدر وحيد الكربون وإنتاج أسيتوين ثانوي 21 . مع ظهور المتغيرات إل تور، فمن الصعب التنبؤ نتائج أي فحص المظهري معين دون فحص وراثي واسع، وقبل استنتاج الخلفية بيوتيب من V. العزلات الكوليرا ، فمن المستحسن لأداء هذا التجمع من المقايسات 23 ومقارنة النتائج لسلالات مرجعية كما هو موضح في الجدول 2 .
هنا، قدمنا سلسلة من البروتوكولات، والاستفادة بشكل جماعي من أفوريمنتيونيد وراثي والمظاهر الظاهرية لنهج أكثر شمولا لوصف V. الكوليرا . وعلاوة على ذلك، فقد وصفنا التمايز الجيني والمظاهر الظاهرية من V المعروفة. الكوليرا المتغيرات إل (MQ1795 و با-2163)، بالمقارنة مع السلالات المرجعية النمط البيولوجي تستخدم عادة (وت الكلاسيكية O395، وت إل تور C6706، و وت إل تور N16961؛ الجدول 1 ). وقد ظهرت ظهور المتغيرات إل تور تحديات لموثوقية من قبل واحد فحص بروتوكولات التوصيف النمط البيولوجي مقايسة؛ ومع ذلك، فإن هذا نظام تحديد مقايسة متعددة تسمح لتوصيف أكثر موثوقية من الخامس والبيئية السريرية. عزلة الكوليرا .
Protocol
Representative Results
Discussion
من أكثر من 200 حددت V. مجموعات كوليراي، O1 فقط و O139 لديها إمكانات وبائية. يمكن تقسيم المجموعة المصلية O1 إلى نوعين بيوتيبس: الكلاسيكي و إل تور. ومع ذلك، ظهرت سلالات هجين، وصفت المتغيرات إل تور 13 ، 17 ، التي تمتلك الخلفية النور إل تور، وخص?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
البحوث التي تدعمها نيو هامبشاير-إنبري من خلال جائزة التنمية المؤسسية (إيديا)، P20GM103506، من المعهد الوطني للعلوم الطبية العامة للمعاهد الوطنية للصحة.
Materials
| 1 kb DNA Ladder | New England Biolabs | N3232S | https://www.neb.com/products/n3232-1-kb-dna-ladder |
| 60% Glycerol | Calbiochem | 356352 | http://www.emdmillipore.com/US/en/product/Glycerol%2C-Molecular-Biology-Grade—CAS-56-81-5—Calbiochem,EMD_BIO-356352 |
| Agar | Becto, Dickinson and Co. | 214030 | http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch |
| Agar with brain-heart infusion | Becto, Dickinson and Co. | 237500 | http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=237500&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D237500%26typeOfSearch%3DproductSearch |
| Agarose | Peqlab | 732-2789 | https://de.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=732-2789&_DARGS=/store/cms/de.vwr.com/de_DE/header_2016111711383215.jsp_AF&_dynSessConf=1766917479792147141&targetURL=/store/catalog/product.jsp%3Fcatalog_number%3D732-2789&lastLanguage=en&/vwr/userprofiling/EditPersonalInfoFormHandler.updateLocale=&_D%3AcurrentLanguage=+¤tLanguage=en&_D%3AlastLanguage=+&_D%3A/vwr/userprofiling/EditPersonalInfoFormHandler.updateLocale=+ |
| Anhydrous K2HPO4 | Fisher Scientific | P288-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-phosphate-dibasic-anhydrous-crystalline-powder-certified-acs-fisher-chemical-5/p288500?searchHijack=true&searchTerm=P288500&searchType=RAPID |
| Blood Agar Plates | Remel | R01200 | Store at 4 °C; http://www.remel.com/Catalog/Item.aspx?name=Blood+Agar |
| Boric Acid | Fisher Scientific | A73-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/boric-acid-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-6/a73500?searchHijack=true&searchTerm=A73500&searchType=RAPID |
| Bromothymol Blue | Fisher Scientific | B388-10 | https://www.fishersci.com/shop/products/bromothymol-blue-certified-acs-fisher-chemical/b38810?searchHijack=true&searchTerm=B38810&searchType=RAPID |
| Cirtric acid ·H2O | Fisher Scientific | S72836-3 | https://www.fishersci.com/shop/products/citric-acid-monohydrate-4/s728363#?keyword=s728363 |
| Deoxynucleotide (dNTP) Solution Kit | New England Biolabs | N0446S | Store at -20 °C; https://www.neb.com/products/n0446-deoxynucleotide-solutionset |
| Disodium EDTA | Fisher Scientific | S311-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/ethylenediaminetetraacetic-acid-disodium-salt-dihydrate-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-7/s311500?searchHijack=true&searchTerm=S311500&searchType=RAPID |
| DNA Clean & Concentrator™ -25 Kit | Zymo Research | D4007 | http://www.zymoresearch.com/dna/dna-clean-up/zymoclean-gel-dna-recovery-kit |
| GelGreen Nucleic Acid Stain | Biotium | 41005 | https://biotium.com/product/gelgreentm-nucleic-acid-gel-stain-10000x-in-water/ |
| Genesys 10SUV-VIS Spectrophotometer | Thermo Scientific | 840-208100 | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/840-208100?ICID=search-840-208100 |
| Gentra Puregene Yeast/Bact. Kit | Qiagen | 158567 | https://www.qiagen.com/us/shop/sample-technologies/dna/dna-preparation/gentra-puregene-yeastbact-kit/#orderinginformation |
| HCl | Fisher Scientific | A144-212 | Corrosive; https://www.fishersci.com/shop/products/hydrochloric-acid-certified-acs-plus-fisher-chemical-10/a144212?searchHijack=true&searchTerm=A144212&searchType=RAPID |
| KCl | Fisher Scientific | P217-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-chloride-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-4/p217500?searchHijack=true&searchTerm=P217500&searchType=RAPID |
| KH2PO4 | Fisher Scientific | P285-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-phosphate-monobasic-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-5/p285500?searchHijack=true&searchTerm=P285500&searchType=RAPID |
| KOH | Fisher Scientific | P250-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-hydroxide-pellets-certified-acs-fisher-chemical-5/p250500?searchHijack=true&searchTerm=P250500&searchType=RAPID |
| Le Loop | Decon Labs Inc. | MP190-25 | http://deconlabs.com/products/leloop/ |
| Le Stab | Decon Labs Inc. | MP186-5 | http://deconlabs.com/products/lestab/ |
| MgSO4·7H2O | Fisher Scientific | M63-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/magnesium-sulfate-heptahydrate-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-3/m63500?searchHijack=true&searchTerm=M63500&searchType=RAPID |
| Mini-Sub Cell GT Horizontal Electrophoresis System | Bio Rad Labs | 1704406 | http://www.bio-rad.com/en-us/product/mini-sub-cell-gt-cell?WT.srch=1&WT.mc_id=aw-cbb-NA-sub_cell_systems_brand_gold&WT.knsh_id=7eb1981f-a011-42a3-aece-1236ff453373 |
| MR-VP Broth | Difco | 216300 | http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=216300&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3Dmr-vp%2Bmedium%26typeOfSearch%3DproductSearch |
| Na2HPO4 | Fisher Scientific | S374-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-phosphate-dibasic-anhydrous-granular-powder-certified-acs-fisher-chemical-5/s374500?searchHijack=true&searchTerm=S374500&searchType=RAPID |
| NaCl | Fisher Scientific | S271-10 | https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-chloride-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-6/s27110?searchHijack=true&searchTerm=S27110&searchType=RAPID |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | S233-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-bicarbonate-powder-certified-acs-fisher-chemical-5/s233500?searchHijack=true&searchTerm=S233500&searchType=RAPID |
| NaNH4HPO4·4H2O | Fisher Scientific | S218-500 | https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-ammonium-phosphate-tetrahydrate-crystalline-certified-fisher-chemical/s218500?searchHijack=true&searchTerm=S218500&searchType=RAPID |
| NanoDrop Lite Spectrophtometer | Thermo Scientific | ND-LITE-PR | https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/ND-LITE-PR?ICID=search-ND-LITE-PR |
| Nonfat dry milk | Nestle Carnation | N/A | N/A |
| Peptone | Becto, Dickinson and Co. | 211677 | http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=211677&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D211677%26typeOfSearch%3DproductSearch |
| Petri Dishes (100 mm x 15 mm) | Fisher Scientific | FB0875712 | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875712#?keyword=FB0875712 |
| Petri Dishes (150 mm x 15 mm) | Fisher Scientific | FB0875714 | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875714?searchHijack=true&searchTerm=FB0875714&searchType=RAPID |
| Polymyxin B sulfate salt | Sigma-Aldrich | P1004-10MU | Store at 2-4 °C; http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/p1004?lang=en®ion=US |
| Taq DNA Polymerase | New England Biolabs | M0273S | Store at -20 °C; https://www.neb.com/products/m0273-taq-dna-polymerase-with-standard-taq-buffer |
| Taq Reaction Buffer | New England Biolabs | M0273S | Store at -20 °C; https://www.neb.com/products/m0273-taq-dna-polymerase-with-standard-taq-buffer |
| Thermal Cycler Bio-Rad C1000 Touch™ | Bio Rad Labs | 1840148 | http://www.bio-rad.com/evportal/evolutionPortal.portal?_nfpb=true&_pageLabel=search_page&sfMode=search&sfStartNumber=1&clearQR=true&js=1&searchString=1840148&database=productskus+productcategories+productdetails+abdProductDetails+msds+literatures+inserts+faqs+downloads+webpages+assays+genes+pathways+plates+promotions&tabName=DIVISIONNAME |
| Triphenyltetrazolium chloride | Alfa Aesar | A10870 | https://www.alfa.com/en/catalog/A10870/ |
| Tris Base | Fisher Scientific | BP152-1 | https://www.fishersci.com/shop/products/tris-base-white-crystals-crystalline-powder-molecular-biology-fisher-bioreagents-7/bp1521?searchHijack=true&searchTerm=BP1521&searchType=RAPID |
| Tris∙HCl | Calbiochem | 9310 | http://www.emdmillipore.com/US/en/product/OmniPur-TRIS-Hydrochloride—CAS-1185-53-1—Calbiochem,EMD_BIO-9310-OP |
| Tryptone | Becto, Dickinson and Co. | 211705 | http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=211705&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D211705%26typeOfSearch%3DproductSearch |
| Yeast Extract | Becto, Dickinson and Co. | 212750 | http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=212750&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D212750%26typeOfSearch%3DproductSearch |
| α-napthol | MP Biomedicals | 204189 | http://www.mpbio.com/product.php?pid=05204189 |
Referências
- Shimada, T., et al. Extended serotyping scheme for Vibrio cholerae. Curr. Microbiol. 28 (3), 175-178 (1994).
- Yamai, S., Tadayuki, O., Toshio, S., Yasuji, K. Distribution of serogroups of Vibrio cholerae non-O1 non-O139 with specific reference to their ability to produce cholera toxin, and addition of novel serogroups. Jpn. J. Infect. Dis. 71 (10), 1037-1045 (1997).
- Karaolis, D. K., Lan, R., Reeves, P. R. The sixth and seventh cholera pandemics are due to independent clones separately derived from environmental, nontoxigenic, non-O1 Vibrio cholerae. J. Bacteriol. 177 (11), 3191-3198 (1995).
- Albert, M. J., et al. Large epidemic of cholera-like disease in Bangladesh caused by Vibrio cholerae O139 synonym Bengal. Lancet. 342 (8868), 387 (1993).
- Barua, D., Barua, D., Greenough III, W. B. History of Cholera. Cholera. , 1-36 (1992).
- Morales, R., Delgado, G., Cravioto, A., Faruque, S. M., Nair, G. B. Population Genetics of Vibrio cholerae. Vibrio cholerae-Genomics and Molecular Biology. , 29-47 (2008).
- Samadi, A. R., Chowdhury, M. K., Huq, M. K., Khan, M. U. Seasonality of classical and El Tor cholera in Dhaka, Bangladesh: 17-year trends. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 77 (6), 853-856 (1983).
- Son, M. S., Megli, C. J., Kovacikova, G., Qadri, F., Taylor, R. K. Characterization of Vibrio cholerae O1 El Tor biotype variant clinical isolates from Bangladesh and Haiti, including a molecular genetic analysis of virulence genes. J. Clin. Microbiol. 49 (11), 3739-3749 (2011).
- Ghosh-Banerjee, J., et al. Cholera toxin production by the El Tor variant of Vibrio cholerae O1 compared to prototype El Tor and classical biotypes. J. Clin. Microbiol. 48 (11), 4283-4286 (2010).
- Ansaruzzaman, M., et al. Cholera in Mozambique, variant of Vibrio cholerae. Emerg. Infect. Dis. 10 (11), 2057-2059 (2004).
- Ansaruzzaman, M., et al. Genetic diversity of El Tor strains of Vibrio cholerae O1 with hybrid traits isolated from Bangladesh and Mozambique. Int. J. Med. Microbiol. 297 (6), 443-449 (2007).
- Lan, R., Reeves, P. R. Pandemic spread of cholera: genetic diversity and relationships within the seventh pandemic clone of Vibrio cholerae determined by amplified fragment length polymorphism. J. Clin. Microbiol. 40 (1), 172-181 (2002).
- Nair, G. B., Faruque, S. M., Bhuiyan, N. A., Kamruzzaman, M., Siddique, A. K., Sack, D. A. New variants of Vibrio cholerae O1 biotype El Tor with attributes of the classical biotype from hospitalized patients with acute diarrhea in Bangladesh. J. Clin. Microbiol. 40 (9), 3296-3299 (2002).
- Nair, G. B., et al. Isolation of Vibrio cholerae O1 strains similar to pre-seventh pandemic El Tor strains during an outbreak of gastrointestinal disease in an island resort in Fiji. J. Med. Microbiol. 55 (11), 1559-1562 (2006).
- Nair, G. B., Mukhopadhyay, A. K., Safa, A., Takeda, Y., Faruque, S. M., Nair, G. B. Emerging hybrid variants of Vibrio cholerae O1. Vibrio cholerae—Genomics and Molecular Biology. , 179-190 (2008).
- Safa, A., et al. Genetic characteristics of Matlab variants of Vibrio cholerae O1 that are hybrids between classical and El Tor biotypes. J. Med. Microbiol. 55 (11), 1563-1569 (2006).
- Nusrin, S., et al. Diverse CTX phages among toxigenic Vibrio cholerae O1 and O139 strains isolated between 1994 and 2002 in an area where cholera is endemic. J. Clin. Microbiol. 42 (12), 5854-5856 (2004).
- Carignan, B. M., Brumfield, K. D., Son, M. S. Single nucleotide polymorphisms in regulator-encoding genes have an additive effect on virulence gene expression in a Vibrio cholerae clinical isolate. mSphere. 1 (5), e00253 (2016).
- Iwanaga, M., Yamamoto, K., Higa, N., Ichinose, Y., Nakasone, N., Tanabe, M. Culture conditions for stimulating cholera toxin production by Vibrio cholerae O1 El Tor. Microbiol. Immunol. 30 (11), 1075-1083 (1986).
- DiRita, V. J., Claude, P., Georg, J., Mekalanos, J. J. Regulatory cascade controls virulence in Vibrio cholerae. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88 (12), 5403-5407 (1991).
- Kovacikova, G., Lin, W., Skorupski, K. Duel regulation of genes involved in acetoin biosynthesis and motility/biofilm formation by the virulence activator AphA and the acetate-responsive Lys-R type regulator AlsR in Vibrio cholerae. Mol. Microbiol. 57 (2), 420-433 (2005).
- Vogel, H. J., Bonner, D. M. Acetylornithinase of Escherechia coli: partial purification and some properties. J. Biol. Chem. 218 (1), 97-106 (1956).
- Son, M. S., Taylor, R. K. Genetic screens and biochemical assays to characterize Vibrio cholerae O1 biotypes: classical and El Tor. Curr. Protoc. Microbiol. , 6A.2.1-6A.2.17 (2011).
- Kovacikova, G., Skorupski, K. Regulation of virulence gene expression in Vibrio cholerae by quorum sensing: HapR functions at the aphA promoter. Mol. Microbiol. 46 (4), 1135-1147 (2002).
- Wang, Y., et al. The prevalence of functional quorum-sensing systems in recently emerged Vibrio cholerae toxigenic strains. Environ. Microbiol. Rep. 3 (2), 218-222 (2011).
- Sanders, E. R. Aseptic laboratory techniques. J. Vis. Exp. (63), e3064 (2012).
- Martinez, R. M., Megli, C. J., Taylor, R. K. Growth and laboratory maintenance of Vibrio cholerae. Curr. Protoc. , 6A.1.1-6A.1.6 (2010).
