O desenvolvimento da glândula mamária no roedor tipicamente foi avaliado usando avaliações descritivas ou medindo atributos físicos básicos. A densidade de ramificação é um indicador de desenvolvimento mamário que é difícil de quantificar objetivamente. Este protocolo descreve um método confiável para a avaliação quantitativa das características de ramificação da glândula mamária.
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Artigo de método
Quantificando a densidade de ramificação em glândulas mamárias de ratos montadas inteiras usando o método de análise Sholl
Neste artigo
Resumo
Resumo
Um número crescente de estudos está utilizando a glândula mamária do roedor como um ponto final para avaliar a toxicidade do desenvolvimento de uma exposição química. Os efeitos dessas exposições no desenvolvimento da glândula mamária são tipicamente avaliados usando medidas dimensionais básicas ou marcando características morfológicas. No entanto, a ampla gama de métodos para interpretar mudanças de desenvolvimento pode levar a traduções inconsistentes em todos os laboratórios. É necessário um método comum de avaliação para que as interpretações apropriadas possam ser formadas a partir de dados comparados em todos os estudos. O presente estudo descreve a aplicação do método de análise Sholl para quantificar as características de ramificação da glândula mamária. O método Sholl foi originalmente desenvolvido para uso na quantificação de padrões dendríticos neuronais. Usando o ImageJ, um pacote de software de análise de imagens de código aberto e um plugin desenvolvido para esta análise, a densidade de ramificação da glândula mamária e a complexidade de amA glândula amariária de uma fêmea feminina peripúbera foi determinada. Os métodos aqui descritos permitirão o uso da análise Sholl como uma ferramenta eficaz para quantificar uma característica importante do desenvolvimento da glândula mamária.
Introdução
A ramificação das glândulas mamárias é uma característica comumente avaliada como um indicador do desenvolvimento das glândulas, mas é difícil quantificar objetivamente. Em 1953, Sholl 1 descreveu um método para medir a arborização dendrítica neuronal nos cortis visual e motor do gato, e um complemento para esta técnica foi desenvolvido por Ferriera et al . 2 . Uma vez que tanto os neurônios como as glândulas mamárias exibem uma estrutura semelhantes a uma árvore similar, o complemento foi empregado para quantificar as densidades de ramificação epitelial mamária em imagens 2D da glândula mamária do rato peripúb....
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Protocolo
Todos os animais utilizados e procedimentos para este estudo foram aprovados pelo NIEHS Laboratory Animal Care and Use Committee e conduzido em uma Associação para Avaliação e Credenciamento de Laboratório Animal Care-acreditada facilidade.
1. Glândulas mamárias de consumo excessivo
- Pre-rotular todos os slides usando um método à prova de xileno (o lápis funciona melhor). Cubra-os com solução de montagem no final para preservar o rótulo.
- Eutanizar o animal por meio de um método institucional de cuidados com animais e uso aprovado pelo comitê.
- Após a eutanásia, coloque o animal nas costas sobre uma placa de di....
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Resultados
Os valores para o raio fechado medido, MEA, N, k e densidade de ramificação calculada para a glândula mamária analisada neste protocolo são relatados na Tabela 1 . A análise Sholl gera parcelas lineares e semi-logs do número de interseções em cada raio ( Figura 9 ) e, se selecionado, um mapa de calor das interseções ( Figura 10 ). As glândulas menos desenvolvidas exibem menos intersecções dentro do mesm.......
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Discussão
Do nascimento até a puberdade, o crescimento da glândula mamária é alométrico. Após a puberdade, a glândula mamária se desenvolve através de extensas derivações ductais e alongamento, que continuam até o epitélio mamário ocupar toda a almofada de gordura. As características de ramificação são um aspecto importante do desenvolvimento da glândula mamária e a capacidade de quantificar objetivamente essas características pode ser altamente útil para avaliar o desenvolvimento mamário normal e para identificar o desenvolvimen.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Os autores gostariam de reconhecer o Dr. Michael Easterling (Social and Scientific Systems, Inc., Durham, Carolina do Norte) por sua assistência na validação deste método e Dr. Tiago Ferreira (Universidade McGill, Montreal, Quebec, Canadá) por sua contínua Assistência com o aplicativo Sholl.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Placa de dissecação | NA | NA | Um pedaço de isopor de aproximadamente 10 "x12" é adequado. |
| Dissecando o frasco de | Daigger | EF7419A | |
| com etanol | NA | NA | 70% de etanol é adequado. |
| Tesoura de dissecação curva | Fine Science Tools | 14569-09 | |
| Tesoura de dissecação reta | Fine Science Tools | 14568-09 | |
| Pinça curva | Fine Science Tools | 11003-12 | |
| Superfrost Plus 24 x 75 x 1 mm lâminas de microscópio | ThermoFisher Scientific | 4951PLUS-001 | Thermo Scientific Superfrost Plus & As lâminas Colorfrost Plus mantêm as seções de tecido permanentemente sem a necessidade de revestimentos caros em aplicações de IHC e Anatomia Patológica. Este tratamento reduz a perda de tecido durante a coloração, bem como as horas de preparação da lâmina. As lâminas atraem eletrostaticamente cortes de tecido congelado e preparações citológicas e apresentam uma química semelhante ao silano, embora otimizadas para melhorar o desempenho da aplicação. https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/4951PLUS4. |
| Tampa de Vidro Premium Fisherfinest 24 x 60 x 1 mm | Fisher scientific | 12-548-5P | |
| Bemis Parafilm M Filme de Embalagem de Laboratório | Fisher scientific | 13-374-12 | |
| Clorofórmio | Sigma-Aldrich | C2432 | |
| Ácido acético glacial | Sigma-Aldrich | A9967 | |
| Etanol absoluto, ≥ 99,8% (GC) | Sigma-Aldrich | 24102 | |
| Xileno | Sigma-Aldrich | 214736 | |
| Carmine alum | Sigma-Aldrich | C1022 | |
| Sulfato de Alumínio e Potássio | Sigma-Aldrich | A6435 | |
| Mídia de montagem de montagem Fisher | Scientific | SP15 | |
| Macroscópio | Leica | Z16 APO | Este é o hardware e software de captura de imagem usados neste laboratório. Como existem muitas opções diferentes, os métodos e aplicações podem variar entre os laboratórios. |
| Câmera digital | Leica | DFC295 | |
| Software de câmera | Leica | Leica Application Suite v3.1 | |
| Software ImageJ | Análise | de código aberto http://imagej.net/Welcome | |
| Sholl | http://imagej.net/Sholl_Analysis | de código aberto |
Referências
- Sholl, D. A. Dendritic organization of the neurons in the visual and motor cortices of the cat. J Anat. 87 (4), 387-406 (1953).
- Ferreira, T. A., Iacono, L. L., Gross, C. T. Serotonin receptor 1A modulates actin dynamics and restricts dendri....
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Reimpressões e permissões
