मैरो-व्युत्पन्न प्रोजेक्टर सेल का हाइपोसिक प्रीकंडिशनिंग परिपक्व श्वन कोशिकाओं की उत्पत्ति के लिए एक स्रोत के रूप में
Summary
अस्थि मज्जा में मज्जा स्ट्रॉम्मल कोशिकाएं (एमएससी) तंत्रिका क्षमता के साथ मौजूद हैं हमारे प्रोटोकॉल हाइपोसिक पूर्व शर्त के माध्यम से कोशिकाओं की आबादी को समृद्ध करते हैं और उसके बाद उन्हें परिपक्व श्वन कोशिकाओं बनने का निर्देश देता है।
Abstract
यह पांडुलिपि मज्जा स्ट्रॉम्मल सेल (एमएससी) जनसंख्या से न्यूरल प्रजनन के लिए समृद्ध करने के एक साधन का वर्णन करता है और उसके बाद उन्हें परिपक्व श्वान सेल भाग्य के लिए निर्देशित करता है। हमने चूहा और मानव एमएससी को क्षणिक हाइपोक्सीक स्थितियों (16 घंटे के लिए 1% ऑक्सीजन) का पालन किया है, इसके बाद एपिडर्मल ग्रोथ फैक्टर (ईजीएफ) / मूल फाइब्रोब्लास्ट विकास कारक (बीएफजीएफ) पूरकता के साथ कम लगाव उपचरण पर न्यूरोस्फ़ेयर के रूप में विस्तार किया गया है। न्यूरोस्फेरस को पॉली-डी-लाइसिन / लेमीनिन-लेपित टिशू कल्चर प्लास्टिक पर वरीयता दी गई थी और श्वेन सेल-जैसे कोशिकाओं (एससीएलसी) उत्पन्न करने के लिए β-Heregulin, bFGF, और प्लेटलेट-व्युत्पन्न वृद्धि कारक (पीडीजीएफ) वाले ग्लिओजेनिक कॉकटेल में सुसंस्कृत थे। एससीएलसी को ई -14-15 गर्भवती स्प्रेग दाऊली चूहों से प्राप्त शुद्ध पृष्ठीय रूट गैन्ग्लिया (डीआरजी) न्यूरॉन्स के साथ 2 सप्ताह के लिए कोकल्चर के माध्यम से भाग्य की प्रतिबद्धता का निर्देश दिया गया था। परिपक्व स्क्वैन कोशिकाएं S100β / p75 अभिव्यक्ति में दृढ़ता का प्रदर्शन करती हैं और माइलेज खंड बना सकती हैं। इस तरीके से उत्पन्न कोशिकाओं में एक संभावित हैरीढ़ की हड्डी की चोट के बाद ऑटोलॉगस सेल प्रत्यारोपण में, और साथ ही रोग मॉडलिंग के रूप में भी शामिल है।
Introduction
तंत्रिका प्रजनन और उनके व्युत्पत्तियों के प्रत्यारोपण, दर्दनाक तंत्रिका चोट 1 , 2 और neurodegeneration 3 , 4 के बाद एक उपचार रणनीति के रूप में वादा को दर्शाता है। नैदानिक आवेदन से पहले, यह सुनिश्चित करना जरूरी है: i) स्टेम / पूर्वज कोशिकाओं के एक ऑटोलॉगस स्रोत पर पहुंचने और विस्तार करने के लिए एक विधि ii) उन्हें संबंधित, परिपक्व सेल प्रकार 3 में निर्देशित करने का एक साधन रीढ़ की हड्डी की चोट के लिए सेल थेरेपी में हमारी दिलचस्पी ने हमें प्रौढ़ ऊतकों से तंत्रिका प्रजनकों के एक मजबूत, ऑटोलॉगस सेल स्रोत तलाशने में मदद की।
एमएससी का एक उप-जनन तंत्रिका शिखा से निकलता है और मज्जा गुहा से आसानी से पहुंचा जा सकता है। ये कोशिकाएं न्यूरॉन्स और ग्लिया 5 उत्पन्न कर सकती हैं। सेरेब्रल इस्केमिया के पशु मॉडल दर्शाते हैं कि हाइपोक्सिया प्रोल को बढ़ावा देता है मस्तिष्क के भीतर मस्तिष्क पूर्वज के प्रजनन और बहुतायत 6 यह मज्जा-व्युत्पन्न तंत्रिका पूर्वजों पर विस्तार के साधन के रूप में हाइपोसिक पूर्वनिर्धारण के उपयोग के लिए आधार था।
घायल रीढ़ की हड्डी में श्वान कोशिकाओं के प्रत्यारोपण में पुनर्जीवित 2 को बढ़ावा देता है SCLCs को ग्लिोजेनिक कारकों ( यानी, बीए-हेरेगुलिन, बीएफजीएफ, और पीडीजीएफ-एए) के साथ पूरक के माध्यम से एमएससी से उत्पन्न किया जा सकता है लेकिन फ़िनोटीपिक अस्थिरता प्रदर्शित करता है। वृद्धि कारकों की वापसी पर, वे एक फाइब्रोब्लास्ट-जैसी फ़िनोटाइप 7 पर लौट आए। फेरियटिपिक अस्थिरता सेलर ट्रांसप्लांटेशन में अवांछनीय है, जो कि बेपरवाह भेदभाव और कार्सिनोजेनेसिस के जोखिम के कारण होता है। जैसा कि श्वान सेल के पूर्ववर्ती भ्रूण परिधीय तंत्रिका 8 के भीतर अक्षतंतु बंडलों के साथ जुड़े हैं, हमें शुद्ध भ्रूण डीआरजी न्यूरॉन्स 7 के साथ कोकल्चर एससीएलसी को ले जाया गया 7 ,Ass = "xref"> 9 परिणामस्वरूप परिपक्व श्वान कोशिकाएं भाग्य-प्रतिबद्ध हैं और विट्रो 7 , 9 और विवो 10 में फ़ंक्शन का प्रदर्शन करती हैं ।
एमएससी से न्यूरल प्रजनकों के संवर्धन के लिए हमारा प्रोटोकॉल सरल और कुशल है और इसके परिणामस्वरूप बाद के एसेस के लिए सेल नंबर में वृद्धि हुई है। कोकल्चर प्लेटफॉर्म के माध्यम से भाग्य द्वारा निर्मित श्वान कोशिकाओं का व्युत्पन्न glial भेदभाव के अध्ययन और संभावित नैदानिक आवेदन के लिए स्थिर और कार्यात्मक श्वन कोशिकाओं की पीढ़ी के लिए अनुमति देता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
हाइपोसिक पूर्वनिर्धारित और न्यूरोस्फीयर संस्कृति के माध्यम से तंत्रिका प्रजनन के संवर्धन से पहले एमएससी की "स्टेमनेस" को संरक्षित करने के लिए आवश्यक है। हमारे अनुभव से, बहु-स्तरीय एमएससी को उनके …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
तकनीकी सहायता के लिए हाइपोक्सिया चैम्बर उपकरण और सुश्री एलिस लुई को प्रदान करने के लिए लेखक डॉ। ना-सुम वोंग को स्वीकार करना चाहते हैं।
Materials
| αMEM | Sigmaaldrich | M4526 | |
| DMEM/F12 | Thermofisher scientific | 12400-024 | |
| Neurobasal medium | Thermofisher scientific | 21103-049 | |
| FBS | Biosera | FB-1280/500 | |
| B27 | Thermofisher scientific | 17504-001 | |
| Epidermal growth factor (EGF) | Thermofisher scientific | PHG0313 | |
| Basic fibroblast growth factor (bFGF) | Peprotech | 100-18B/100UG | |
| Nerve growth factor (NGF) | Millipore | NC011 | |
| Platelet-derived growth factor-AA (PDGF-AA) | Peprotech | 100-13A | |
| Heregulin beta-3, EGF domain (β-Her) | Millipore | 01-201 | |
| Uridine | Sigmaaldrich | U3003 | |
| 5-Fluro-2' – deoxyuridine (FDU) | Sigmaaldrich | F0503 | |
| Poly-D-lysine (PDL) | Sigmaaldrich | P7886-1G | |
| Laminin | Thermofisher scientific | 23017015 | |
| GlutaMAX | Thermofisher scientific | 35050061 | |
| Penicillin / streptomycin (P/S) | Thermofisher Scientific | 15140-122 | |
| TrypLE Express | Thermofisher Scientific | 12604-013 | |
| 10 cm plate for adherent culture | TPP | 93100 | Used for selection of MSCs by tissue culture adherence |
| 6-well plate for adherent culture | TPP | 92006 | Used for expansion of MSCs following passaging |
| UltraLow 6-well plate for non-adherent culture | Corning | 3471 | Used for neural progenitor enrichment |
| anti-human CD90(Thy-1) | BD Biosciences | 555593 | |
| anti-human CD73 | BD Biosciences | 550256 | |
| anti-human/rat STRO-1 | R&D Systems | MAB1038 | |
| anti-human nestin | R&D Systems | MAB1259 | |
| anti-human CD45 | BD Biosciences | 555480 | |
| anti-rat CD90(Thy-1) | BD Biosciences | 554895 | |
| anti-rat CD73 | BD Biosciences | 551123 | |
| anti-rat nestin | BD Biosciences | MAB1259 | |
| anti-rat CD45 | BD Biosciences | 554875 | |
| Anti-S100β | Dako | Z031101 | |
| Anti-p75 | Millipore | MAB5386 | |
| Anti-GFAP | Sigmaaldrich | G3893 | |
| Anti-Class III-beta tubulin (Tuj-1) | Covance | MMS-435P | |
| Anti-Human nuclei | Millipore | MAB1281 | |
| Hypoxia chamber | Billups-Rothenberg | MIC-101 | |
| HEPES buffer | Sigmaaldrich | H4034-100G |
Referências
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