Lezyon Tanımlaması için Meme Bandı Bütün Dağılımları
Summary
Başlangıçta slaytlar üzerinde sabitlenmiş olan meme dokusunu histopatolojik değerlendirme için başarıyla çıkarmak, işlemek, kesmek ve lekelenmek için bir yöntem geliştirdik. Bu yöntem, üreme ve gelişimsel test kılavuz çalışmalarında meme bezlerinin tümünün monte edilmesini ve değerlendirilmesini teşvik edebilir.
Abstract
Normal meme bezi gelişimi, çevresel toksik maddelere ve farmasötik ürünlere maruz kalma, hormonlara aşırı maruz kalma ve genetik değişikliklerle değiştirilebilir. Meme bezi tüm montajları maruz kaldıktan sonra ortaya çıkabilecek morfolojik değişikliklerin ilerlemesini yakalamak için ucuz bir yöntemdir. Bununla birlikte, sonraki yaşamda, anormalliklerin gelişme eğilimi daha fazla olduğunda, bu metot üzerindeki tek dayanak, anormalliği doğru bir şekilde teşhis etmek için her zaman yeterli bilgi sağlamayabilir. Tarihsel olarak, kimyasal test kılavuz çalışmalarında tek bir meme bezi otopside alınır ve hematoksilen ve eozin (H & E) boyalı kesit olarak hazırlanır. Karşı taraf meme tüm montajı toplama ve analizin dahil edilmesi yanlış-negatif bir değerlendirme olasılığını azaltır. Tüm desteğin değerlendirilmesi, bir slaytta bir veya iki tüm meme bezinin varlığı ile sınırlıdır ve bazı durumlarda, tüm yuvada gözlemlenen anormallikler hayırH & E bölümünde tek biçimli olarak temsil edilmiştir. Bu çalışmanın amacı, aksi halde kaçırılmış veya tanı koymak güç olan lezyonların tanımlanması için lamelleri örten meme tümörünün H & E lekeli bölümlerine dönüştürülmesi için bir protokol geliştirmektir. Burada, başlangıçta bütün olarak hazırlanan meme bezinden yüksek kaliteli, parafin gömülü bir H & E bölümü üretmek için bir yöntem ayrıntılı. H & E kesitlemesi için kasıtlı olarak hazırlanmış bir dokuya kıyasla, tüm gövde doku çıkartılması ve işlenmesi için ilave hazırlık gerektirir. Bununla birlikte, bu yöntem, ortak lab reaktifleri ve az ek süre gerektirdiği için ucuzdur. Sonuç olarak, bu metot, kimyasal ve çevresel maruziyetlerin normal meme gelişimini nasıl değiştireceği ve genetik değişiklikler nedeniyle oluşan değişiklikleri gösterdiği konusunda çok değerli bilgiler sağlayabilir.
Introduction
Meme bütünlüğü, normal ve kimyasal olarak uyarılan anormal gelişimin anlaşılması için birçok sıçan ve fare çalışmasında uygulanan yararlı ve ucuz bir yöntemdir. Genel olarak, kemirgen gelişimi sırasında ( yani ergenlik, ergenlik, orta-geç gebelik ve involüsyon evresi) çeşitli aşamalarında toplanan bir meme bezi, parakrin, endokrin ve otokrin faktörlerden etkilenen doku ve hücresel mimaride morfolojik değişiklikler gösterecektir 1 . Yaşlanmakta olan sıçanda, bezin epitelial ve stromal kısımları gittikçe yoğunlaşmakta ve bu da morfolojik parametrelerin ölçülmesini bütün montajda zorlaştırmaktadır. Bu nedenle mikroskobik seviyedeki değişiklikleri tanımlamak için histolojik değerlendirme için bir bez toplamak yaygın bir uygulamadır. Her iki proses özellikle kimyasal maruziyeti içeren ( yani çevresel veya farmasötik) çalışmaları veya genetik değişiklik eşliğinde morfolojik değişiklikleri incelemek için yararlıdırations.
Risk değerlendirmesinde meme bezini kullanma teknikleri ve yetenekleri gelişmeye devam etmektedir. Bütün montaj hazırlığı rutin ve standartlaştırılmış iken, kesitlemedeki değişiklikler 2 , 3'e devam eder. Bazı laboratuarlar hala deri 4 boyunca enine kesim bölümleri kullanırken çeşitli arka (yani, akademik, hükümet ve endüstri) gelen çok sayıda araştırma grupları, tercih edilen yöntem olarak meme dokusunda uzunlamasına / koronal kesitler adapte edilmiştir. İkinci yöntem, ilgili dokudan ziyade epidermisin (cilt) aşırı derecede temsil edilmesine neden olur: meme bezi epiteli 2 . Koronal veya uzunlamasına kesitler, normal dokuyu 5 karakterize etmek için daha kullanışlıdır ve artan yüzey alanı ve mevcut yapıların sayısı nedeniyle anormalliklerin ve lezyonların belirlenmesini büyük ölçüde iyileştirir. Genel olarak, bu bütün mo yaparMeme bezi 1 , 2 karşılaştırmalı histopatolojik değerlendirme için uygun bir yöntem. Kasık bezleri inci bir fare ya da bir fare, alma ve 4. korunmasını ve 5 kullanılarak yüksek tüm karşılaştırılması için önerilir olsun kontralateral H & E bölümüne monte edilir.
Bileşik olarak kullanıldığında, H & E bölümü ve tüm montaj, çevresel maruz kalmanın neden olduğu hücresel ve morfolojik değişikliklerin doğru bir şekilde hesaplanmasını sağlar. Bu, özellikle modelin tümör oluşumuna karşı düşük duyarlılığa sahip olduğu veya tümörün gözle görülemediği bazı kemirgen suşlarında özellikle geçerlidir. Bazı durumlarda, gerekli dokuyu elde etmek her zaman her iki yöntemi de ( ör. Yetersiz doku miktarı, kaynak veya beklenmedik deney sonuçları) kullanarak mümkün olmayabilir. Olgumuzda meme tümü anormallikleri görülürken histopatoKontralateral H & E bezindeki mantıklı bulgular çoğunlukla normaldi. Kontrlateral bezler arasındaki ezici tutarsızlık, tüm bağlardaki anormalliklerin saptanması için ekonomik ve etkili bir prosedür geliştirdi. Modifiye edilmiş bir işleme ve gömme işlemi uygulayarak, yüksek kaliteli H & E lekeli kesitler, parafin gömülü tüm montajlardan hazırlandı. Bu protokolün kimyasal maruz kalma etkileri için güçlü bir algılama aracı haline gelmesini ve laboratuvarlar arası karşılaştırmaları geliştirmesini düşünüyoruz.
Protocol
Representative Results
Discussion
Meme bezi tam montajı, endokrin bozucular da dahil olmak üzere kimyasallara maruz kaldıktan sonra ortaya çıkabilen ve devam edebilen normal meme gelişimini ve morfolojik değişiklikleri göstermek için kullanılabilecek güçlü bir araçtır. Aynı hayvandan bir bütün montaj ve H & E bölümü birlikte değerlendirildiğinde, erken hastalıkların daha hastalıklı bir duruma gelebilecekleri konusunda doğru görsel bir enstantane sağlayabilirler.
Bu yararlı bilgiyi edinme k…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar, bu projeyle ilgili teknik uzmanlıkları ve desteği için Pam Ovwigho, Tenette Jones ve Natasha Clayton, NIEHS'yi onaylamak istiyorlar.
Materials
| Xylene | Sigma-Aldrich | 214736 | |
| Permount | Thermo Fisher Scientific | SP15-100 | mounting media for coverslipping whole mounts and H&E sections |
| Leica automated processor | Leica Biosystems | Model # ST5020 | |
| HM 355S Automatic Microtome | Thermo Fisher Scientific | 905200 | |
| Paraffin | Leica Biosystems | EM-400 | |
| Superfrost plus microscope slides | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS-001 | electrostatically charged |
| Fisher Finest 24x60x1 | Thermo Fisher Scientific | 12-548-5P | coverslips |
| Varistain Gemini ES Automatic slide stainer | Thermo Fisher Scientific | A78000014 | |
| Sta-On | Leica Biosystems | 3803107 | liquid adhesive; used in water bath at sectioning |
| Modified Harris Hematoxylin 72711 | Richard-Allan Scientific (Part of Thermo Scientific) | 72711 | |
| Eosin | Leica Biosystems | 3801600 | |
| Lithium Carbonate | SkyTech Laboratories | LCQ500 | |
| Glacial Acetic Acid | Thermo Fisher Scientific | A38-500 | needed in Carnoy's fixative |
| Chloroform | Macron Fine Chemicals | 4440-04 | needed in Carnoy's fixative |
| 100% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505001050000 | needed in Carnoy's fixative and washing slides |
| 95% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505011137320190 | |
| Carmine Alum | Sigma-Aldrich | C1022-25G | |
| Aluminum potassium sulfate dodecahydrate, Sigma Ultra | Sigma-Aldrich | A7210-500G | |
| Automation wash buffer, 20X | Biocare Medical | TWB945 |
Referências
- Rudel, R. A., Fenton, S. E., Ackerman, J. M., Euling, S. Y., Makris, S. L. Environmental exposures and mammary gland development: State of the science, public health, implications, and research recommendations. Environ Health Perspect. 119 (8), 1053-1061 (2011).
- Keenan, K. P., Wallig, M. A., Hascheck, W. M. Nature via Nurture: Effect of Diet on Health, Obesity, and Safety Assessment. Toxicol Pathol. 41 (2), 190-209 (2013).
- Stanko, J. P., Fenton, S. E. Quantifying branching density in rat mammary gland whole mounts using the Sholl analysis method. J Vis Exp. , (2017).
- Filgo, A. J., et al. Mammary gland evaluation in juvenile toxicity studies: Temporal developmental patterns in the male and female Harlan Sprague Dawley Rat. Toxicol Pathol. 44 (7), 1034-1058 (2016).
- Tucker, D. K., Foley, J. K., Bouknight, S. A., Fenton, S. E. Preparation of high-quality hematoxylin and eosin-stained sections from rodent mammary gland whole mounts for histopathologic review. Toxicol Pathol. 44 (7), 1059-1064 (2016).
- Hvid, H., Thorup, O., Oleksiewicz, M. B., Sjogren, I., Jensen, H. E. An alternative method for preparation of tissue sections from the rat mammary gland. Exp Toxicol Path. 63 (4), 317-324 (2011).
- Munoz-de-Toro, M., et al. Perinatal exposure to bisphenol-A alters peripubertal mammary gland development in mice. Endocrinology. 146 (9), 4138-4147 (2005).
- Padilla-Banks, E., Jefferson, W. N., Newbold, R. Neonatal exposure to the phytoestrogen genistein alters mammary gland growth and developmental programming of hormone receptor levels. Endocrinology. 147 (10), 4871-4882 (2006).
- Nikaido, Y., et al. Effects of maternal xenotestrogen exposure on development of the reproductive tract and mammary gland in female CD-1 mouse offspring. Reprod Toxicol. 18 (6), 803-811 (2004).
