Seção de mamíferos mamários completos para identificação de lesões

Resumo

Desenvolvemos um método para remover, processar, cortar e manchar com sucesso, para avaliação histopatológica, tecido mamário que inicialmente havia sido fixado em slides como montagens inteiras. Este método pode promover a coleta e avaliação de montantes inteiros de glândula mamária em estudos de diretrizes de testes reprodutivos e de desenvolvimento.

Resumo

O desenvolvimento normal da glândula mamária pode ser alterado pela exposição a substâncias tóxicas ambientais e produtos farmacêuticos, exposição excessiva a hormonas e alterações genéticas. As montagens inteiras da glândula mamária são um método barato para capturar a progressão das alterações morfológicas que podem surgir após a exposição. No entanto, na vida posterior, quando as anormalidades são mais propensas a desenvolver, a única dependência deste método pode nem sempre fornecer informações suficientes para fazer um diagnóstico adequado da anormalidade. Historicamente, em estudos de diretrizes de teste químico, uma única glândula mamária é removida na necropsia e preparada como uma seção mantida com hematoxilina e eosina (H & E). A incorporação de coleta e análise de mamíferos contralaterais inteiros diminui a probabilidade de uma avaliação falso-negativa. A avaliação de todo o suporte é limitada pela presença de uma ou duas glândulas mamárias inteiras em um slide e, em alguns casos, as anormalidades observadas em todo o suporte não sãoT uniformemente representado na seção H & E. O objetivo deste estudo foi desenvolver um protocolo para a conversão de montagens completas mamárias revestidas em seções manchadas de H & E para que as lesões que de outra forma tenham sido perdidas ou que sejam difíceis de diagnosticar possam ser identificadas. Aqui, detalhamos um método para produzir uma seção de H & E integrada em parafina de alta qualidade de uma glândula mamária que inicialmente foi preparada como uma montagem total. Em comparação com um tecido que foi intencionalmente preparado para seção de H & E, todo o suporte requer preparação adicional para remoção e processamento de tecido. No entanto, este método é considerado barato, uma vez que requer reagentes de laboratório comuns e pouco tempo adicional. Como resultado, este método pode fornecer informações inestimáveis ​​sobre como as exposições químicas e ambientais alteram o desenvolvimento mamário normal, bem como exibir mudanças que ocorrem devido a modificações genéticas.

Introdução

O mountis completo mamário é um método útil e barato implementado em muitos estudos de ratos e ratos para entender o desenvolvimento anormal e induzido quimicamente. Em geral, uma glândula mamária coletada em vários estágios durante o desenvolvimento de roedores ( ou seja, adolescência, puberdade, gestação média e tardia e fase de involução) mostrará mudanças morfológicas na arquitetura celular e celular influenciada por fatores paracrinos, endócrinos e autocrinos ¹ . No rato envelhecido, as porções epiteliais e estromadas da glândula tornam-se cada vez mais densas, o que dificulta a medição de parâmetros morfológicos em um monte inte....

Protocolo

Todos os animais utilizados e procedimentos para este estudo foram aprovados pelo NIEHS Laboratory Animal

Comitê de Atendimento e Uso e conduzido em uma Associação de Avaliação e Credenciamento de

Instalação especializada em laboratório veterinário.

1. Preparação Mammary Whole-mount ^{2 , 3 , 6 , 7}

1. Remova as glândulas mamárias inguinais de um lado de um mouse fêmea não gravida de CD-1, conforme descrito na referência ³ , e coloque-as em um slide eletrostático.
2. Cubra a glându....

Resultados

Este método é eficaz para auxiliar nos diagnósticos que, de outra forma, poderiam ter sido perdidos se a seção contralateral original de H & E da almofada mamária não apresentasse alterações histológicas. No entanto, o resultado só será útil se for tomado cuidado durante a preparação inicial inicial, bem como durante a preparação do tecido para a avaliação histológica. A incorporação de parafina proporcionará proteção e ajudará a preservar o tecido para futuras secções.

Discussão

A montagem completa da glândula mamária é uma ferramenta poderosa que pode ser usada para ilustrar o desenvolvimento mamário normal e as alterações morfológicas que podem surgir e persistir após a exposição a produtos químicos, incluindo os disruptores endócrinos. Quando uma montagem completa e a seção H & E do mesmo animal são avaliadas em conjunto, elas podem fornecer uma imagem instantânea precisa de alterações precoces, que podem avançar para um estado mais doente.

A capacidade de ob.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Xileno	Sigma-Aldrich	214736
Permount	Thermo Fisher Scientific	SP15-100	mídia de montagem para lamínula montagens inteiras e H& E seções
Processador automatizado Leica	Biosystems	Modelo # ST5020
HM 355S Micrótomo Automático	Thermo Fisher Scientific	905200
Parafina	Leica Biosystems	EM-400
Superfrost plus lâminas de microscópio	Thermo Fisher Scientific	4951PLUS-001	eletrostaticamente carregado
Fisher Finest 24x60x1	Thermo Fisher Scientific	12-548-5P	lamínulas
Varistain Gemini ES Coloração automática de lâminas	Thermo Fisher Scientific	A78000014
Sta-On	Leica Biosystems	3803107	adesivo líquido; usado em banho-maria no seccionamento
Hematoxilina Harris modificada 72711	Richard-Allan Scientific (parte da Thermo Scientific)	72711
Eosin	Leica Biosystems	3801600
Carbonato de lítio	SkyTech Laboratories	LCQ500
Ácido acético glacial	Thermo Fisher Scientific	A38-500	necessário no fixador de Carnoy
Clorofórmio	Macron Fine Chemicals	4440-04	necessário no fixador de Carnoy
100% Etanol	A Warner Graham Company	6505001050000	necessária no fixador e lâminas de lavagem de Carnoy
95% Etanol	The Warner Graham Company	6505011137320190
Carmine Alum	Sigma-Aldrich	C1022-25G
Sulfato de potássio de alumínio dodecahidratado, Sigma Ultra	Sigma-Aldrich	A7210-500G
Tampão de lavagem de automação, 20X	Biocare Medical	TWB945