Este manuscrito descreve um protocolo para a imagem no vivo da retina do rato com a tomografia de coerência óptica de domínio espectral de alta resolução (SD-OCT). Centra-se em células ganglionares da retina (RGC) na região de peripapillary, com vários digitalização e quantificar as abordagens descritas.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Tomografia de coerência óptica: Imagens Mouse ganglionares da retina células In Vivo
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Mudanças estruturais na retina são manifestações comuns de doenças oftálmicas. Tomografia de coerência óptica (OCT) permite a sua identificação no vivo— rapidamente, repetidamente e em alta resolução. Este protocolo descreve imagens OCT na retina do rato como uma poderosa ferramenta para estudar a neuropatia óptica (OPN). O sistema OCT é uma alternativa não-invasiva, baseada em interferometria para comuns ensaios post-mortem histológica. Ele fornece uma avaliação rápida e precisa da espessura da retina, permitindo a possibilidade de controlar alterações, tais como afinamento da retina ou espessamento. Apresentamos o processo e a análise de imagem com o exemplo da linha de rato Opa1delTTAG . Propõem-se três tipos de exames, com dois métodos de quantificação: pinças padrão e caseiras. O último é melhor para uso na retina peripapillary durante as varreduras radiais; sendo mais preciso, é preferível para a análise de estruturas mais finas. Todas as abordagens descritas aqui são projetadas para células ganglionares da retina (RGC), mas são facilmente adaptáveis para outras populações de células. Em conclusão, OCT é eficiente na fenotipagem de modelo de rato e tem potencial para ser usado para a avaliação confiável de intervenções terapêuticas.
Introdução
OCT é uma ferramenta de diagnóstico que facilita a análise das estruturas da retina1, incluindo a cabeça do nervo ótico (HNO). Ao longo dos anos tornou-se um indicador confiável de progressão da doença em seres humanos2,3, assim como em roedores4,5. Ele usa interferometria para criar imagens transversais das camadas da retina em uma resolução axial de 2 µm. A camada mais interna é a retina da fibra do nervo camada (RNFL), contendo axônios RGC, que é seguida pela camada de células ganglionares (GCL), contendo principalmente RGC c....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
o protocolo experimental foi aprovado pela Institut national de la santé et de la recherche médicale (Inserm; Montpellier, França), é consistente com as directivas europeias e está em conformidade com a instrução de ARVO para o uso de animais na investigação oftalmológica. Foi realizado no âmbito do acordo do Languedoc Roussillon cortesia de ética em Experimentação Animal (CEEALR; nuCEEA-LR-12123).
1. instalação de equipamentos e preparação de pré-imagem
Nota: aqui, OCT realizou-se na retina do mouse usando o domínio espectral (SD) sistema de imagem oftálmica ( figura 1A). O aparelh....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
A tecnologia SD-OCT permite imaginar da retina e análise de espessura que é comparável à histologia, mas é mais rápido e mais detalhadas (Figura 3). Tal como apresentado com camundongos C57Bl/6 de sua, mesmo que a qualidade de uma varredura de SD-OCT (Figura 3A, direito) não é tão bom quanto o de uma imagem de uma secção da retina (Figura 3A, à esquerda), visualiza mais camadas (por exemplo,.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
O sistema OCT, um não-invasivo na vivo por imagens método, fornece scans de cross-section-como retina de alta resolução. Assim, sua principal vantagem é o seu potencial para análise detalhada, com a maravilhosa oportunidade de transpor protocolos rotineiramente aplicados aos seres humanos a modelos de rato.
No exemplo de Opa1delTTAG ratos mutantes, SD-OCT resultados mostraram um aumento de espessura de camada complexa de RNFL e GC, que permitiu maior exploração de .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo Inserm, Université Montpellier, França de Retina, National Union des Aveugles et Déficients Visuels (UNADEV), Associação Síndrome de Wolfram, Fondation pour la Recherche Médicale, Fondation de France e o laboratório de excelência Programa de EpiGenMed.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Ratos | |||
| Opa1delTTAG camundongo | Instituto de Neurociências em Montpellier, INSERM UMR 1051, | França-Opa1 camundongos knock-in carregando Mutação de c.2708_2711delTTAG OPA1 em C57Bl6/J background | |
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
| Equipamento | |||
| EnVisu R2200 SD-OCT Imaging System | Bioptigen, Leica Microsystems, Alemanha | - | Sistema de tomografia de coerência óptica de domínio espectral |
| EnVisu R2200 SD-OCT Imaging System Software | Bioptigen, Leica Microsystems, | Alemanha-Software | para aquisição e análise de OCT |
| ImageJ 1.48v | Wayne Rasband, National Institutes of Health, EUA-O | software para análise, requer o download e a instalação de duas macros hommade: http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Retina_Tool | |
| Placa de aquecimento autorregulável | Bioseb, França | BIO-062 | Proteção contra hipotermia |
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
| Suprimentos | |||
| Faixa nasal | - | - | Elástico |
| Almofadas de gaze 3" x 3" | Curad, EUA | CUR20434ERB | Proteção contra hipotermia |
| Aplicador de ponta de algodão de ponta dupla | Essence of Beauty, CVS Health Corporation, EUA-Aplicação | de | gel |
| Cotton Twists | CentraVet, França | T.7979C.CS | Posicionamento do mouse |
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
| Reagentes e Medicamentos | |||
| Né osyné phrine Faure 10% | Laboratoires Europhtha, | Monaco-Dilatation | |
| Mydriaticum 0,5% | Laboratoires Thé a, França | 3397908 | Dilatação ocular |
| Cebesina 0,4% | Laboratoire Chauvin, Bausch& Lomb, França | 3192342 | Anestesia local |
| Imalgene 1000 | Merial, França/CentraVet, França | IMA004 | Anestesia geral |
| Rompun | Bayer Healthcare, Alemanha/CentraVet, França | ROM001 | Anestesia geral, analgesia, relaxamento muscular |
| NaCl 0,9% | Laboratoire Osalia, França | 103697114 | Soro fisiológico |
| Systene Ultra | Alcon, Novartis, | EUA-Hidratação | dos olhos |
| GenTeal'Alcon | , Novartis, EUA-Gel | oftálmico para minimizar a refração da luz e opacidades | |
| Aniospray Surf 29 | Laboratoires Anios, França | 59844 | Desinfectante |
Referências
- Drexler, W., Fujimoto, J. G. State-of-the-art retinal optical coherence tomography. Prog Retin Eye Res. 27 (1), 45-88 (2008).
- Grenier, J., et al. WFS1 in Optic Neuropathies: Mutation Findings in Nonsyndromic Optic Atrophy and Assessmen....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
