Svulst Engraftment i en Xenograft musemodell av menneskelig mantelen celle lymfomer
Summary
Det er like vanskelig å etablere en xenograft musemodell primære MCL å studere og utvikle therapeutics mantelen celle lymfomer (MCL) er en vanskelig å behandle B celle uorden. Her beskriver vi vellykket etablering av MCL xenografts i mus til å forstå sin underliggende biologi.
Abstract
B-lymfocytter er sentrale aktører i immunforsvaret celle sirkulasjon og de hovedsakelig hjem til og bor i lymfoide organer. Mens normale B celler sprer bare når stimulert av T-lymfocytter, kreftfremkallende B celler overleve og utvide selvstendig i udefinert orgel nisjer. Mantelen celle lymfomer (MCL) er en slik B celle lidelse, der median overlevelse av pasienter er 4-5 år. Dette krever behov for effektive mekanismer som homing og engraftment av disse cellene er blokkert for å øke overlevelse og lang levetid på pasienter. Derfor er arbeidet med å utvikle en xenograft musemodell for å studere effekten av MCL therapeutics blokkerer den homing mekanisme i vivo av største betydning. Utviklingen av dyr mottakere for human celle xenotransplantation å teste tidlig stadium narkotika har lenge vært forfulgt, relevante prekliniske musen modeller er avgjørende for skjermen nye terapeutiske agenter. Denne dyr modellen er utviklet til å unngå menneskelig pode avvisning og en modell for menneskelige sykdommer, og det kan være et svært nyttig verktøy å studere sykdomsprogresjon typer forskjellige lymfom og utføre prekliniske testing av kandidaten narkotika for Hematologic malignitet, som MCL. Vi etablert en xenograft musemodell som skal fungere som et utmerket ressurs å studere og utvikle romanen terapeutiske metoder for MCL.
Introduction
Lymfocytter av naturen spiller en viktig rolle i immun overvåking og lymfocytt menneskehandel er en avgjørende skritt i montering antigen bestemt immunitet1,2. Denne prosessen omfatter overføring av naiv T-lymfocytter fra thymus i blodet, og derfra til sekundære lymfoide organer, inkludert lymfeknuter, Peyers oppdateringer og milt, hvor de møter beslektet antigener. B-lymfocytter skille i benmargen og overføre som naiv celler til follicles av sekundære lymfoide organer3. Noen av disse B-cellene binder antigen med deres reseptoren og aktiveres av bestemte T-celler. Spredning og differensiering av disse B-cellene presser ingen-aktivert, naiv B celler i sonen mantelen av hårsekken. Aktivert celler kan deretter skille i minnet B celler som patruljerer kroppen eller modne i immunglobulin sekresjon plasma celler overføre til benmargen4.
MCL oppstår når naiv B-lymfocytter i sonen mantelen forvandle en svulst. Disse lymfom cellene ligge i microenvironment av lymfoide organer og sprer uavhengig av spesifikke T lymfocytt kontroll. Men på et visst stadium av de flykte fra denne nisje og recirculate i blodet i Søk etter nisjer i andre organer. Vurderer kompleksiteten i vedheft molekyler og promiskuitet chemokines og deres reseptorer, mekanismen av denne mobilnettet menneskehandel i vivo er dårlig forstått, og derfor hemmer terapi. Nye metoder for å effektivt blokkerer overføringsprosessen for å hindre lymfom B celler fra å nå nye microenvironments.
MCL er en av de vanskeligste å behandle B-cell malignancies. Utviklingen av en neoplastic fenotypen av MCL er et resultat av en må cascade, preget av oppkjøpet av unike biologiske egenskaper. På tiden av diagnose finnes de fleste pasienter (70%) allerede med en disseminert sykdom, med et flertall av tilfellene viser extranodal engasjement i milten, benmarg eller fordøyelsessystemet5,6. I behandlede pasienter er tilbakefall av resistente svulster innen få år vanlig, selv om konvensjonell kjemoterapi induserer høy remisjon priser på kort sikt7,8. Her presenterer vi en ny sykdom modell som kan hjelpe forstå MCL formidling og dens underliggende biologi: vi etablert en menneskelig MCL xenograft musemodell som stammer fra primære kreftceller av pasienter. Vi håper at denne modellen vil hjelpe utvikle strategier mot MCL formidling og muligens gi nye kliniske perspektiver for optimal diagnose og behandling av tilbakefall pasienter.
Protocol
Representative Results
Discussion
Kliniske studier er mulig for legemidler som er i et avansert stadium av utviklingen, men kan ikke brukes for medisiner. Innsatsen for å utvikle dyr mottakere for human celle xenotransplantation for å teste tidlig stadium narkotika har lenge vært forfulgt. Her presenterer vi en dyremodell som unngår menneskelige pode avvisning og kan etablere en modell for menneskelige sykdommer, for eksempel MCL. Dette er i dag en toppmoderne xenograft modell å studere mekanismer for menneskelig svulst engraftment og tumor vekst. H…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dette arbeidet ble støttet av Ligue Genevoise contre le kreft, Fondation Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 og 2914-02-2012, og sveitsiske National Science Foundation Grant 31003A_156760 og 310030-153456.
Materials
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
Referências
- Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. Human chemokines: an update. Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).
- Baggiolini, M. Chemokines and leukocyte traffic. Nature. 392, 565-568 (1998).
- Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. . Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , (2001).
- De Silva, N. S., Klein, U. Dynamics of B cells in germinal centres. Nat Rev Immunol. 15 (3), 137-148 (2015).
- Cohen, P. L., Kurtin, P. J., Donovan, K. A., Hanson, C. A. Bone marrow and peripheral blood involvement in mantle cell lymphoma. Br. J. Haematol. 101, 302-310 (1998).
- Meusers, P., Hense, J., Brittinger, G. Mantle cell lymphoma: diagnostic criteria, clinical aspects and therapeutic problems. Leukemia (Baltimore). 11 (Suppl 2), S60-S64 (1997).
- Herrmann, A., et al. Improvement of overall survival in advanced stage mantle cell lymphoma. J Clin Oncol. 27 (4), 511-518 (2008).
- Martin, P., et al. Intensive treatment strategies may not provide superior outcomes in mantle cell lymphoma: overall survival exceeding 7 years with standard therapies. Ann Oncol. 19 (7), 1327-1330 (2008).
- Iyengar, S., et al. Characteristics of human primary mantle cell lymphoma engraftment in NSG mice. Br J Haematol. 173 (1), 165-169 (2016).
- Klco, J. M., et al. Functional heterogeneity of genetically defined subclones in acute myeloid leukemia. Cancer cell. 25 (3), 379-392 (2014).
- Kerbel, R. S. Human tumor xenografts as predictive preclinical models for anticancer drug activity in humans: better than commonly perceived-but they can be improved. Cancer Biol Ther. 2 (4 Suppl 1), S134-S139 (2003).
- Johnson, J. I., et al. Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials. Br. J. Cancer. 84, 1424-1431 (2001).
- Scholz, C. C., Berger, D. P., Winterhalter, B. R., Henss, H., Fiebig, H. H. Correlation of drug response in patients and in the clonogenic assay with solid human tumour xenografts. Eur. J. Cancer. 26, 901-905 (1990).
- Doñate, C., Vijaya Kumar, A., Imhof, B. A., Matthes, T. Frontline Science: Anti-JAM-C therapy eliminates tumor engraftment in a xenograft model of mantle cell lymphoma. J Leukoc Biol. 100 (5), 843-853 (2016).
