ورم انجرافتمينت في نموذج الفأر إكسينوجرافت من عباءة البشرية الخلية اللمفاوية
Summary
عباءة الخلية اللمفاوية (MCL) مهمة صعبة لعلاج اضطراب خلايا ب ويصعب وضع نموذج ماوس إكسينوجرافت من MCL الأولية دراسة وتطوير المداواة. هنا، يصف لنا النجاح في إقامة MCL تكثيفها في الفئران للمساعدة على فهم البيولوجيا الأساسية لها.
Abstract
من الفعاليات الرئيسية في التداول الخلايا المناعية وأنها موطن أساسا للخلايا الليمفاوية ب ويقيمون في الأجهزة اللمفاوية. بينما تتكاثر الخلايا العادية ب فقط عندما يحفزه لمفاوية T، النمطان ب الخلايا البقاء على قيد الحياة وتوسيع استقلالية في منافذ الجهاز غير معرف. عباءة الخلية اللمفاوية (MCL) أحد هذه الخلية باضطراب، وحيث معدل متوسط بقاء المرضى 4-5 سنوات. وهذا يدعو إلى حاجة الآليات الفعالة التي يتم حظرها بصاروخ موجه وانجرافتمينت من هذه الخلايا بغية زيادة البقاء على قيد الحياة وطول العمر للمرضى. ولذلك، بالجهود المبذولة لتطوير نموذج ماوس إكسينوجرافت لدراسة مدى فعالية العلاجات MCL بعرقلة صاروخ موجه إليه في فيفو أهمية قصوى. واتبعت طويلة التنمية الحيوانية المتلقين للسلالة البشرية الخلية لاختبار المخدرات المرحلة المبكرة، كنماذج الماوس السريرية ذات الصلة حاسمة بالنسبة للعوامل العلاجية الجديدة الشاشة. تم تطوير هذا النموذج الحيواني لتجنب رفض الابتزاز البشرية ووضع نموذج للأمراض التي تصيب الإنسان، وأنها قد تكون أداة مفيدة للغاية لدراسة تطور المرض لأنواع مختلفة من الأورام اللمفاوية، والقيام بالتجارب السريرية للمخدرات مرشح الأورام الخبيثة الدموية، مثل MCL. قمنا بإنشاء نموذج ماوس إكسينوجرافت التي ستكون بمثابة مصدرا ممتازا دراسة وتطوير نهج علاجية مبتكرة ل MCL.
Introduction
لمفاوية بالطبيعة تؤدي دوراً رئيسيا في منأى عن المراقبة، واللمفاويات الاتجار خطوة حاسمة في تركيب مستضد حصانة محددة1،2. وتشمل هذه العملية الهجرة من السذاجة تي لمفاوية من الغدة الصعترية إلى مجرى الدم، ومن هناك إلى الأجهزة اللمفاوية الثانوية، بما في ذلك الغدد الليمفاوية أو بقع بير في الطحال، حيث يلتقي المستضدات المشابهة. الخلايا الليمفاوية ب التفريق في نخاع العظام وتهاجر كخلايا ساذجة في المسام من الأجهزة اللمفاوية الثانوية3. بعض من هذه الخلايا ب ربط مستضد مع مستقبلات بهم ويتم تفعيلها من خلال خلايا T معينة. انتشار وتمايز هذه الخلايا ب يدفع الخلايا السذاجة ب عدم تفعيلها، إلى منطقة عباءة المسام. يمكن أن تفرق في الذاكرة ب تنشيط الخلايا ثم الخلايا التي دوريات الهيئة، أو تنضج في الغلوبولين المناعي إفراز خلايا البلازما التي تهاجر إلى نخاع العظم4.
MCL عند لمفاوية السذاجة ب في منطقة عباءة تحويل إلى ورم. هذه الخلايا اللمفاوية الموجودة في المكروية الأجهزة اللمفاوية وتتكاثر مستقلة عن مراقبة محددة تي اللمفاويات. بيد أنه في مرحلة معينة من كثافة الهروب من هذا مكانة واوافيكم في مجرى الدم في البحث عن منافذ في الأجهزة الأخرى. نظراً للطابع المعقد لجزيئات الالتصاق والانفلات من المستقطبات وعلى المستقبلات، إليه هذا الخلوية الاتجار في فيفو هو غير مفهومة ويعوق ذلك العلاج. أساليب الرواية ضرورية لفعالية حظر هذا عملية الهجرة لمنع الخلايا اللمفاوية ب من الوصول إلى ميكرونفيرونمينتس جديدة.
MCL واحد من الأكثر صعوبة في علاج الأورام الخبيثة الخلية ب. تطوير النمط الظاهري الورمية ل MCL هو نتيجة لسلسلة متعددة الخطوات، تتميز باكتساب الخصائص البيولوجية الفريدة. وقت التشخيص، يقدم معظم المرضى (70 في المائة) الفعل مع مرض نشرها، مع غالبية الحالات العارضة مشاركة اكسترانودال في الطحال ونخاع العظام، و/أو الجهاز الهضمي5،6. في معالجة المرضى، والانتكاس بمقاومة الأورام في غضون سنوات قليلة شائع، على الرغم من أن العلاج الكيميائي التقليدي يدفع معدلات عالية مغفرة في المدى القصير7،8. هنا نقدم نموذجا أمراض جديدة التي يمكن أن تساعد على فهم نشر MCL وعن البيولوجيا الأساسية: قمنا بإنشاء نموذج ماوس xenograft MCL بشرية التي نشأت من الخلايا السرطانية الأولية للمرضى. ونأمل أن يساعد هذا النموذج وضع استراتيجيات علاجية ضد نشر MCL، وربما توفر منظورات جديدة السريرية للأمثل التشخيص والعلاج للمرضى الذين انتكست.
Protocol
Representative Results
Discussion
التجارب السريرية ممكنة للمخدرات التي في مرحلة متقدمة من التنمية ولكن لا يمكن استخدامها لاكتشاف المخدرات. واتبعت منذ فترة طويلة الجهود الرامية إلى تطوير المستلمين الحيوان للسلالة البشرية الخلية من أجل اختبار المخدرات المرحلة المبكرة. هنا نقدم نموذجا حيوان أن يتجنب رفض الابتزاز البشرية و…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
هذا العمل كان يدعمها جنيه جنيف رابطة مكافحة السرطان، مؤسسة الدكتور دوبوا فيريير دينو–Lipatti، أونكوسويسي شرطة-مكتب الدعم الدستوري، مكتب الدعم الدستوري-02260-08-2008 و 2914-02-2012، و “منحة من مؤسسة العلوم الوطنية السويسرية” 31003A_156760 و 310030-153456.
Materials
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
Referências
- Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. Human chemokines: an update. Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).
- Baggiolini, M. Chemokines and leukocyte traffic. Nature. 392, 565-568 (1998).
- Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. . Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , (2001).
- De Silva, N. S., Klein, U. Dynamics of B cells in germinal centres. Nat Rev Immunol. 15 (3), 137-148 (2015).
- Cohen, P. L., Kurtin, P. J., Donovan, K. A., Hanson, C. A. Bone marrow and peripheral blood involvement in mantle cell lymphoma. Br. J. Haematol. 101, 302-310 (1998).
- Meusers, P., Hense, J., Brittinger, G. Mantle cell lymphoma: diagnostic criteria, clinical aspects and therapeutic problems. Leukemia (Baltimore). 11 (Suppl 2), S60-S64 (1997).
- Herrmann, A., et al. Improvement of overall survival in advanced stage mantle cell lymphoma. J Clin Oncol. 27 (4), 511-518 (2008).
- Martin, P., et al. Intensive treatment strategies may not provide superior outcomes in mantle cell lymphoma: overall survival exceeding 7 years with standard therapies. Ann Oncol. 19 (7), 1327-1330 (2008).
- Iyengar, S., et al. Characteristics of human primary mantle cell lymphoma engraftment in NSG mice. Br J Haematol. 173 (1), 165-169 (2016).
- Klco, J. M., et al. Functional heterogeneity of genetically defined subclones in acute myeloid leukemia. Cancer cell. 25 (3), 379-392 (2014).
- Kerbel, R. S. Human tumor xenografts as predictive preclinical models for anticancer drug activity in humans: better than commonly perceived-but they can be improved. Cancer Biol Ther. 2 (4 Suppl 1), S134-S139 (2003).
- Johnson, J. I., et al. Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials. Br. J. Cancer. 84, 1424-1431 (2001).
- Scholz, C. C., Berger, D. P., Winterhalter, B. R., Henss, H., Fiebig, H. H. Correlation of drug response in patients and in the clonogenic assay with solid human tumour xenografts. Eur. J. Cancer. 26, 901-905 (1990).
- Doñate, C., Vijaya Kumar, A., Imhof, B. A., Matthes, T. Frontline Science: Anti-JAM-C therapy eliminates tumor engraftment in a xenograft model of mantle cell lymphoma. J Leukoc Biol. 100 (5), 843-853 (2016).
