人地幔细胞淋巴瘤移植小鼠模型中肿瘤植入的研究
Summary
地幔细胞淋巴瘤 (MCL) 是一种难以治疗 B 细胞紊乱的方法, 建立一只移植小鼠模型 MCL 的研究和开发治疗同样困难。在这里, 我们描述成功地建立了 MCL 移植在小鼠, 以帮助了解其基础生物学。
Abstract
B 淋巴细胞是免疫细胞循环的重要参与者, 它们主要栖息在淋巴器官中。当正常 b 细胞只在 T 淋巴细胞刺激下增殖时, 致癌 b 细胞在未定义的器官龛位中存活并自主扩张。地幔细胞淋巴瘤 (MCL) 是一种 B 细胞紊乱, 其中中位存活率为 4-5 岁。这就需要建立有效的机制, 使这些细胞的归巢和植入被阻断, 以增加患者的生存和长寿。因此, 开发一种异种移植小鼠模型来研究 MCL 疗法的效果, 通过阻断自导机制在体内是至关重要的。人类细胞异种移植动物受体在早期药物检测中的发展一直以来都在进行, 因为相关的前体小鼠模型对于筛查新的治疗剂至关重要。这种动物模型是为了避免人的移植排斥和建立人类疾病模型, 它可能是一个非常有用的工具来研究不同类型淋巴瘤的疾病进展, 并进行候选药物的临床前检查恶性血液病像 MCL 一样我们建立了一种移植小鼠模型, 作为研究和开发新的治疗方法的 MCL 的一个优秀的资源。
Introduction
淋巴细胞的性质在免疫监测中起着重要作用, 淋巴细胞贩运是增强抗原特异免疫的关键步骤1,2。这一过程包括从胸腺到血流的天真 T 淋巴细胞的迁移, 从那里到次生淋巴器官, 包括淋巴结, Peyer 的补丁, 或脾脏, 在那里他们满足同源抗原。B 淋巴细胞在骨髓中分化, 并作为天真细胞迁移到次级淋巴器官的卵泡中3。其中一些 B 细胞将抗原与受体结合, 并由特定的 T 细胞激活。这些 b 细胞的增殖和分化将非活化的、天真的 b 细胞推入卵泡的地幔区。激活细胞然后可以区分为记忆 B 细胞, 它巡逻的身体, 或成熟的免疫球蛋白分泌血浆细胞迁移到骨髓4。
当地幔区的天真 B 淋巴细胞转化为肿瘤时, MCL 发生。这些淋巴瘤细胞驻留在淋巴器官的微环境中, 并独立于特定的 T 淋巴细胞控制而增殖。然而, 在一定的密度阶段, 他们从这个利基和超量的血液中逃脱, 寻找其他器官的利基。考虑到粘附分子的复杂性和趋化因子及其受体的混杂性, 这种细胞贩运的机制在体内的作用不太清楚, 因此阻碍了治疗。为了防止淋巴瘤 B 细胞接触到新的微环境, 需要采用新的方法来有效阻断这一迁移过程。
MCL 是治疗 B 细胞恶性肿瘤最难的一种。MCL 肿瘤表型的发展是多步级联的结果, 其特点是获得独特的生物特性。在诊断时, 大多数患者 (70%) 已经出现了传播疾病, 大多数病例显示淋巴结外参与脾脏, 骨髓和/或胃肠道 5, 6.在治疗的患者中, 几年内抗肿瘤复发是常见的, 尽管常规化疗能在短期内诱发高缓解率7,8。在这里, 我们提出了一个新的疾病模型, 可以帮助了解 MCL 传播及其基础生物学: 我们建立了一个人 MCL 移植鼠模型, 起源于原发性肿瘤细胞的病人。我们希望这一模式将有助于制定抗 MCL 传播的治疗策略, 并可能为复发患者的最佳诊断和治疗提供新的临床前景。
Protocol
Representative Results
Discussion
临床试验是可能的药物, 处于晚期的发展阶段, 但不能用于药物发现。为了测试早期药物, 人们一直在努力为人类细胞移植开发动物受体。在这里, 我们提出了一个动物模型, 避免人移植排斥, 并可以建立一个模型, 人类疾病, 如 MCL。这是目前的一种状态的艺术移植模型研究的机制, 人类肿瘤植入和肿瘤的生长。在这里, 我们使用核供应的小鼠, 一个最免疫缺陷的老鼠模型迄今, 以取得更大的成功淋巴瘤…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作得到了 Genevoise 反癌症, Ferriere Dinu 李帕蒂, Oncosuisse 科索沃警察组织法团, OCS-02260-08-2008 和2914-02-2012 的支持, 瑞士国家科学基金会赠款31003A_156760 和310030-153456。
Materials
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
Referências
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