Greffe de la tumeur dans un modèle murin de xénogreffe de lymphome du manteau homme
Summary
Lymphome du manteau (MCL) est difficile à traiter la maladie de lymphocytes B et il est tout aussi difficile d’établir un modèle de souris de xénogreffe de MCL primaire pour étudier et développer des produits thérapeutiques. Nous décrivons ici la mise en place réussie des xénogreffes MCL chez les souris pour aider à comprendre sa biologie sous-jacente.
Abstract
Les lymphocytes B sont des acteurs essentiels dans la circulation de cellules immunitaires et ils abritent principalement et résident dans les organes lymphoïdes. Tandis que les cellules normales de B se multiplient uniquement quand ils sont stimulés par les lymphocytes T, oncogènes B cellules survivent et développez autonome dans des créneaux orgue indéfini. Lymphome du manteau (MCL) est un tel désordre de lymphocytes B, où le taux de survie médiane des patients est 4-5 ans. Cela nécessite le besoin de mécanismes efficaces par lesquels le homing et la prise de greffe de ces cellules sont bloqués afin d’augmenter la survie et la longévité des patients. Par conséquent, les efforts pour développer un modèle de xénogreffe de souris pour étudier l’efficacité de la thérapeutique de la MCL en bloquant l’autoguidage mécanisme in vivo sont primordial. Développement des bénéficiaires animales pour la xénotransplantation de cellules humaines pour tester des médicaments de stade précoce ont longtemps été poursuivies, comme modèles murins précliniques pertinentes sont cruciales pour nouveaux agents thérapeutiques écran. Ce modèle animal est développé afin d’éviter le rejet du greffon humain et d’établir un modèle pour les maladies humaines, et il peut être un outil extrêmement utile pour étudier la progression de la maladie de types différents de lymphomes et d’effectuer des essais précliniques de médicaments candidats pour malignités hématologiques, comme MCL. Nous avons établi un modèle de xénogreffe de souris qui service une excellente ressource pour étudier et développer de nouvelles approches thérapeutiques pour MCL.
Introduction
Lymphocytes par nature jouent un rôle majeur dans la surveillance du système immunitaire, et traite des lymphocytes est une étape essentielle dans le montage de l’immunité spécifique de l’antigène1,2. Ce processus comprend la migration des lymphocytes naïfs T du thymus dans le flux de sang et de là vers les organes lymphoïdes secondaires, y compris les ganglions lymphatiques, rate ou plaques de Peyer où ils rencontrent les antigènes apparentés. Les lymphocytes B se différencient dans la moelle osseuse et migrent comme cellules naïves dans les follicules des organes lymphoïdes secondaires3. Certaines de ces cellules B lient à l’antigène avec leurs récepteurs et sont activées par les cellules T spécifiques. Prolifération et la différenciation de ces cellules B pousse les cellules naïves B non-activé, dans la zone du manteau du follicule. Les lymphocytes activés peuvent alors se différencier en mémoire B cellules qui patrouillent le corps, ou deviennent des immunoglobulines sécrétant des plasmocytes qui migrent de la moelle osseuse4.
MCL se produit lorsque les lymphocytes naïfs B dans la zone du manteau se transforment en une tumeur. Ces cellules de lymphome résident dans le micro-environnement des organes lymphoïdes et prolifèrent indépendamment de contrôle spécifique des lymphocytes T. Cependant, à un certain stade de densité ils échappent à ce créneau et circuler dans le sang à la recherche de niches dans d’autres organes. Compte tenu de la complexité des molécules d’adhésion et la promiscuité des chimiokines et leurs récepteurs, le mécanisme de ce cellulaire traite in vivo est mal compris et par conséquent freine la thérapie. Méthodes novatrices sont nécessaires pour bloquer efficacement ce processus de migration pour empêcher les cellules de lymphome B d’atteindre des micro-environnements nouvelles.
MCL est l’un des plus difficiles à traiter les tumeurs malignes de cellules B. Le développement d’un phénotype néoplasique du MCL est le résultat d’une cascade de plusieurs étapes, que se caractérise par l’acquisition de propriétés biologiques uniques. Au moment du diagnostic, la plupart des patients (70 %) est déjà présent avec une maladie disséminée, avec une majorité de cas présentant extraganglionnaires implication dans la rate, la moelle osseuse, et/ou le tractus gastro-intestinal5,6. Chez les patients traités, rechute de tumeurs résistantes dans les prochaines années est commun, même si la chimiothérapie conventionnelle induit des taux de rémission élevé à court terme7,8. Nous présentons un nouveau modèle de la maladie qui peut aider à comprendre la diffusion de la MCL et sa biologie sous-jacente : nous avons établi un modèle de souris de xénogreffe MCL humain provenant des cellules de la tumeur primitive des patients. Nous espérons que ce modèle permettra de développer des stratégies thérapeutiques contre la diffusion de la MCL et éventuellement offrir de nouvelles perspectives cliniques pour diagnostic optimal et le traitement des patients récidivants.
Protocol
Representative Results
Discussion
Les essais cliniques sont possibles pour les médicaments qui sont à un stade avancé de développement, mais ne peut pas être utilisés pour la découverte de médicaments. Efforts visant à développer les animaux receveurs pour la xénotransplantation de cellules humaines afin de tester des médicaments de stade précoce ont longtemps été poursuivi. Nous présentons ici un modèle animal qui évite le rejet du greffon humain et peut établir un modèle pour les maladies humaines, comme le MCL. À l’heure actuell…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par la Ligue Genevoise contre le Cancer, Fondation Dr Dubois Ferrière Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 et 2914-02-2012 et Swiss National Science Foundation Grant 31003A_156760 et 310030-153456.
Materials
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
Referências
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