Tumor Engraftment in einem Xenograft-Maus-Modell der menschlichen Mantel-Zell-Lymphom
Summary
Mantel-Zell-Lymphom (MCL) ist ein schwer zu B-Zell-Störung zu behandeln, und es ist ebenso schwierig, zur Einrichtung eines Xenograft-Maus-Modell der primären MCL zu studieren und Therapeutika zu entwickeln. Hier beschreiben wir die erfolgreiche Etablierung von MCL Xenotransplantate bei Mäusen zu helfen, die zugrunde liegende Biologie zu verstehen.
Abstract
B-Lymphozyten sind wichtige Akteure im Immunzelle Zirkulation und sie vor allem zu Hause und in den lymphatischen Organen befinden. Während normalen B-Zellen vermehren sich nur, wenn durch T-Lymphozyten stimuliert, Onkogene B-Zellen überleben und autonom in undefinierter Orgel Nischen zu erweitern. Mantel-Zell-Lymphom (MCL) ist eine solche B-Zell-Störung, wo die mediane Überlebenszeit der Patienten von 4-5 Jahren. Dies erfordert die Notwendigkeit wirksamer Mechanismen, durch die das Homing und Engraftment dieser Zellen blockiert werden, um das Überleben zu erhöhen, und Langlebigkeit des Patienten. Daher ist der Aufwand, ein Xenograft-Maus-Modell um die Wirksamkeit von MCL-Therapeutika zu studieren, durch die Blockierung der homing Mechanismus in Vivo zu entwickeln von größter Bedeutung. Entwicklung der tierischen Empfänger für menschliche Zelle Xenotransplantation, frühen Phase Medikamente zu testen haben seit langem verfolgt worden, wie relevanten präklinischen Mausmodelle für neue Therapeutika Bildschirm entscheidend sind. Dieses Tiermodell ist, menschliche Transplantat Ablehnung zu vermeiden und, ein Modell für menschliche Krankheiten entwickelt und es kann sein, dass ein extrem nützliches Werkzeug, Fortschreiten der Erkrankung von verschiedenen Lymphom-Arten zu studieren und Kandidat Drogen für präklinische Tests durchführen hämatologischen malignen Erkrankungen wie MCL. Wir etabliert ein Xenograft-Maus-Modell, die als eine hervorragende Ressource zu erforschen und entwickeln neue therapeutische Ansätze für MCL dienen wird.
Introduction
Lymphozyten von der Natur eine wichtige Rolle in Immunüberwachung und Lymphozyten Menschenhandel ist ein entscheidender Schritt bei der Montage von Antigen-spezifischen Immunantwort1,2. Dieser Prozess umfasst Migration von naiven T-Lymphozyten aus dem Thymus in den Blutkreislauf und von dort nach sekundären lymphatischen Organe, einschließlich Lymphknoten, Peyer Patches oder Milz, wo sie cognate Antigene treffen. Die B-Lymphozyten im Knochenmark differenzieren und Wandern als naive Zellen in Follikel der sekundären lymphatischen Organe3. Einige dieser B-Zellen Antigen mit ihrem Rezeptor binden und werden durch spezifische T-Zellen aktiviert. Proliferation und Differenzierung dieser B-Zellen schiebt die nicht aktivierte, naive B-Zellen in der Mantelzone des Follikels. Aktivierte Zellen können dann in den Speicher B Zellen, die Patrouille des Körpers, oder in Immunglobulin sezernierenden Plasmazellen, die Migration auf das Knochenmark4Reifen zu unterscheiden.
MCL tritt auf, wenn ein Tumor naive B-Lymphozyten in der Mantelzone verwandeln. Diese Lymphom-Zellen befinden sich in der Mikroumgebung der lymphatischen Organe und vermehren sich unabhängig von spezifischen T-Lymphozyten-Steuerung. Jedoch in einem bestimmten Stadium der Dichte Flucht aus dieser Nische und Umwälzen in die Blutbahn auf der Suche nach Nischen in anderen Organen. In Anbetracht der Komplexität der Adhäsionsmoleküle und die Promiskuität der Chemokine und ihre Rezeptoren der Mechanismus des zellulären Menschenhandel in Vivo kaum verstanden und daher behindert Therapie. Neuartige Methoden genügen, um dieses Migrationsprozesses um die Lymphomzellen B daran hindern, neue Mikroumgebungen effektiv zu blockieren.
MCL ist einer der am schwierigsten zu B-Zell-Tumoren zu behandeln. Die Entwicklung eines neoplastischen Phänotyps MCL ist das Ergebnis einer mehrstufigen Kaskade, zeichnet sich durch den Erwerb von einzigartigen biologischen Eigenschaften. Zum Zeitpunkt der Diagnose stellen die meisten Patienten (70 %) bereits verbreitet Krankheit, mit der Mehrheit der Fälle ausstellenden extranodal Beteiligung an Milz, dem Knochenmark und/oder Magen-Darm-Trakt5,6. Bei behandelten Patienten ist Rückfall von resistenten Tumoren innerhalb weniger Jahre weit verbreitet, obwohl konventioneller Chemotherapie hohe Remissionsraten bei kurzfristigen7,8 induziert. Hier präsentieren wir ein neues Krankheitsmodell, das helfen kann MCL Verbreitung und seine zugrunde liegende Biologie zu verstehen: wir etabliert ein menschliche MCL Xenograft-Maus-Modell aus der primären Tumorzellen des Patienten. Wir hoffen, dass dieses Modell hilft therapeutische Strategien gegen MCL Verbreitung zu entwickeln, und eventuell neue klinische Perspektiven für optimale Diagnose und Behandlung der refraktären Patienten geben.
Protocol
Representative Results
Discussion
Klinische Studien sind möglich für Medikamente, die in einem fortgeschrittenen Stadium der Entwicklung sind jedoch nicht für die Wirkstoffforschung verwendet werden. Bemühungen um tierische Empfänger für die menschliche Zelle Xenotransplantation zu entwickeln, um frühe Phase Medikamente zu testen haben lange verfolgt. Hier präsentieren wir ein Tiermodell, das menschliche Transplantat Ablehnung vermeidet und kann ein Modell für menschliche Krankheiten, wie MCL. Dies ist derzeit ein State-Of-The-Art-Xenograft-Mode…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde unterstützt durch die Ligue Genevoise Contre le Cancer, Fondation Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 und 2914-02-2012, und Swiss National Science Foundation Grant 31003A_156760 und 310030-153456.
Materials
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
Referências
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