Enxertia de tumor em um modelo do rato de enxerto heterólogo de linfoma de células do manto humano
Summary
Linfoma de células do manto (MCL) é um difícil de tratar a doença associada a células B e é igualmente difícil estabelecer um modelo de rato de enxerto heterólogo do MCL primário para estudar e desenvolver a terapêutica. Aqui, descrevemos a criação bem sucedida de xenografts MCL em camundongos para ajudar a compreender a sua biologia subjacente.
Abstract
Linfócitos B são jogadores-chave na circulação de células imunes e eles principalmente para casa e residam em órgãos linfoides. Enquanto as células B normais só proliferam quando estimulados por linfócitos T, oncogênicas células B sobrevivem e expandir-se autonomamente em nichos de órgão indefinido. Linfoma de células do manto (MCL) é uma tal distúrbio de células B, onde a taxa de sobrevida mediana dos pacientes é de 4-5 anos. Isso exige a necessidade de mecanismos eficazes, pelos quais o homing e enxertia dessas células são bloqueados a fim de aumentar a sobrevivência e longevidade dos pacientes. Portanto, o esforço para desenvolver um modelo do rato de enxerto para estudar a eficácia da terapêutica MCL, bloqueando o localizador mecanismo na vivo é de extrema importância. Desenvolvimento de animais destinatários para xenotransplante de células humanas para testar drogas cedo do palco há muito ter sido exercida, como modelos de rato pré-clínicos relevantes são cruciais para novos agentes terapêuticos de tela. Este modelo animal é desenvolvido para evitar a rejeição do enxerto humano e estabelecer um modelo para doenças humanas, e pode ser uma ferramenta extremamente útil para estudar a progressão da doença de tipos diferentes de linfoma e executar testes pré-clínicos de drogas de candidato para malignidades hematológicas, como MCL. Estabelecemos um modelo do rato de enxerto heterólogo que irá servir como um excelente recurso para estudar e desenvolver novas abordagens terapêuticas para MCL.
Introduction
Linfócitos por natureza desempenham um papel importante na vigilância imune, e tráfico de linfócitos é um passo fundamental na montagem do antígeno imunidade específica1,2. Este processo inclui a migração de ingênuo T linfócitos do timo para o fluxo de sangue e de lá para os órgãos linfoides secundários, incluindo os gânglios linfáticos, de Peyer ou baço, onde se encontram os antígenos cognatos. Os linfócitos B diferenciam na medula óssea e migram como ingênuo células em folículos de órgãos linfoides secundários3. Algumas dessas células B vincular o antígeno com o receptor e são ativadas por células T específicas. Proliferação e diferenciação dessas células B empurra as células ingênua B não está ativado, para a zona do manto do folículo. Células ativadas podem diferenciar na memória B células, que patrulham o corpo, ou maduro em imunoglobulinas secretoras células plasmáticas que migram para a medula óssea4.
MCL ocorre quando linfócitos ingênua B na zona de manto transformam em um tumor. Estas células do linfoma residem no microambiente dos órgãos linfoides e proliferaram independentemente do controle específico dos linfócitos T. No entanto, em uma determinada fase de densidade escapar deste nicho e recircular na corrente sanguínea em busca de nichos em outros órgãos. Considerando a complexidade das moléculas de adesão e a promiscuidade de quimiocinas e seus receptores, o mecanismo desse celular de tráfico na vivo é mal compreendido e, portanto, dificulta a terapia. Novos métodos são necessários para efetivamente bloquear este processo de migração para impedir que as células do linfoma B atingindo novos microambiente.
MCL é uma das mais difíceis de tratar tumores malignos de células B. O desenvolvimento de um fenótipo neoplásico de MCL é o resultado de uma cascata de várias etapas, caracterizada pela aquisição de propriedades biológicas únicas. No momento do diagnóstico, a maioria dos pacientes (70%) já está presente com uma doença disseminada, com a maioria dos casos, exibindo o envolvimento extranodal no baço, medula óssea e/ou o trato gastrointestinal5,6. Em pacientes tratados, recaída por tumores resistentes dentro de alguns anos é comum, mesmo que a quimioterapia convencional induz a taxas de remissão de alta no curto prazo7,8. Aqui nós apresentamos um novo modelo de doença que pode ajudar a entender a divulgação MCL e sua biologia subjacente: estabelecemos um humano MCL xenoenxertos rato modelo que originou as células do tumor primário dos pacientes. Esperamos que este modelo vai ajudar a desenvolver estratégias terapêuticas contra divulgação de MCL e possivelmente proporcionar novas perspectivas clínicas para melhor diagnóstico e tratamento dos pacientes recaíram.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ensaios clínicos são possíveis para drogas que estão em um estágio avançado de desenvolvimento, mas não podem ser usadas para a descoberta de medicamentos. Os esforços para desenvolver animais destinatários para xenotransplante de células humanas para testar drogas cedo do palco há muito tem sido exercidos. Aqui nós apresentamos um modelo animal que evita a rejeição do enxerto humano e pode estabelecer um modelo para doenças humanas, tais como MCL. Este é actualmente um modelo de transplante do estado da …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi apoiado pela Ligue Genevoise contre le Cancer, Fondation Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 e 2914-02-2012 e o suíço nacional Science Foundation Grant 31003A_156760 e o 310030-153456.
Materials
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
Referências
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