Questo studio descrive la generazione di successo di un nuovo modello animale di malattia polmonare ostruttiva cronica (COPD) esponendo ripetutamente topi ad alte concentrazioni di ozono.
La broncopneumopatia cronica ostruttiva (BPCO) è caratterizzata da distruzione parenchimale di flusso d’aria persistente limitazione e del polmone. Ha un’incidenza molto alta nelle popolazioni di invecchiamento. Le attuali terapie convenzionali per BPCO concentrarsi principalmente su sintomo-modificanti; Pertanto, è urgente lo sviluppo di nuove terapie. Modelli animali qualificati della BPCO potrebbero contribuire a caratterizzare i meccanismi di fondo e possono essere utilizzati per lo screening di stupefacenti nuovi. Modelli attuali di COPD, come il lipopolisaccaride (LPS) o l’elastasi pancreatica porcina (PPE)-modello di enfisema indotto, generare COPD-come le lesioni nei polmoni e vie respiratorie ma altrimenti non assomigliano alla patogenesi della BPCO umano. Un fumo di sigaretta (CS)-modello indotto rimane uno dei più popolari perché non solo simula la BPCO-come le lesioni dell’apparato respiratorio, ma si basa anche su uno dei principali materiali pericolosi che le cause della BPCO in esseri umani. Tuttavia, gli aspetti molto tempo e laboriosi del modello indotto da CS drammaticamente limitano l’applicazione in screening di nuovi farmaci. In questo studio, abbiamo generato con successo un nuovo modello di BPCO esponendo topi ad alti livelli di ozono. Questo modello ha dimostrato quanto segue: 1) è diminuito di volume espiratorio forzato di 25, 50 e 75/forzata di capacità vitale (FEV25/FVC, FEV50/FVC e FEV75/FVC), che indica il deterioramento della funzione polmonare; 2) gli alveoli del polmone allargata, con distruzione parenchimale del polmone; 3) ridotto affaticamento tempo e distanza; e 4) ha aumentato l’infiammazione. Presi insieme, questi dati dimostrano che il modello di esposizione (OE) l’ozono è un affidabile modello animale che è simile agli esseri umani perché sovraesposizione di ozono è uno dei fattori eziologici della BPCO. Inoltre, ci sono voluti solo 6-8 settimane, basate sul nostro lavoro precedente, per creare un modello di OE, considerando che richiede 3-12 mesi per indurre il modello di fumo di sigaretta, che indica che il modello di OE potrebbe essere una buona scelta per la ricerca di BPCO.
Si prevede infatti che la BPCO, tra cui l’enfisema e la bronchite cronica, potrebbe essere la terza causa di morte nel mondo nel 20201,2. L’incidenza potenziale della BPCO in una popolazione di oltre 40 anni di età è stimata essere 12,7% nei maschi e 8,3% in femmine entro i prossimi 40 anni3. No farmaci attualmente disponibili invertire il deterioramento progressivo in COPD pazienti4. Affidabili modelli animali della BPCO non solo esigono l’imitazione del processo patologico della malattia ma richiedono anche un generazione di breve periodo. Attuali modelli di BPCO, tra cui il LPS o un modello PPE-indotta, possono indurre sintomi simil-enfisema5,6. Una singola somministrazione o una sfida di settimana di LPS o PPE per risultati di topi o ratti in neutrophilia contrassegnato nel fluido di lavaggio broncoalveolare (BALF), aumenti di mediatori pro-infiammatori (per esempio, TNF-α e IL-1 β) nel BALF o siero, produce del polmone parenchimali distruzione-ingrandetta aria spazi e limiti del flusso d’aria5,6,7,8,9,10. Tuttavia, LPS o PPE non sono cause della BPCO umana e non imitare così il processo patologico11. Un modello indotto da CS prodotto una limitazione al flusso aereo persistente, la distruzione parenchimatica del polmone e ridotta capacità di esercizio funzionale. Tuttavia, un protocollo di CS tradizionale richiede almeno 3 mesi per generare un COPD modello12,13,14,15. Pertanto, è importante generare un nuovo modello animale più efficiente che soddisfa i requisiti di due.
Recentemente, oltre al fumo di sigaretta, inquinamento atmosferico e l’esposizione professionale sono diventati più comuni cause di BPCO16,17,18. L’ozono, come uno dei principali inquinanti (anche se non è la componente principale dell’inquinamento atmosferico), direttamente può reagire con le vie respiratorie e danneggiare il tessuto polmonare dei bambini e dei giovani adulti19,20,21 ,22,23,24,25. Ozono, come pure altri stimolatori inclusi LPS, PPE e CS, sono coinvolti in una serie di vie biochimiche dello stress ossidativo polmonare e danno del DNA e sono collegati all’avvio e alla promozione di BPCO26,27. Un altro fattore è che i sintomi di alcuni pazienti BPCO si deteriorano dopo essere stati esposti all’ozono, che indica che l’ozono può interrompere polmone funzione18,28,29. Di conseguenza, abbiamo generato un nuovo modello di BPCO esponendo ripetutamente topi ad alte concentrazioni di ozono per 7 settimane; Ciò ha provocato difetti di flusso d’aria e danni parenchimali polmonari simili a quelli di precedenti indagini30,31,32. Abbiamo prolungato il protocollo OE ai topi femminili in questo studio e riprodotto con successo dell’enfisema osservato nei topi maschi in nostri precedenti studi30,31,32. Perché BPCO mortalità è diminuita negli uomini, ma aumentato nelle donne in molti paesi33, è necessario un modello di BPCO nelle femmine di studiare i meccanismi e per sviluppare metodi terapeutici per pazienti BPCO femminili. L’applicabilità del modello OE per tutti i generi fornisce ulteriore sostegno al suo uso come un modello di BPCO.
In questo studio, presentiamo un metodo affidabile per la generazione di un nuovo modello di BPCO. Rispetto ad altri modelli (cioè, LPS o modelli di dpi), questo modello di OE ricapitola il processo patologico di pazienti con BPCO. Poiché il fumo di sigaretta è il principale materiale pericoloso che le cause della BPCO in pazienti umani40, il modello CS rimane il più popolare BPCO modello41,42. Tuttavia, il modello CS richiede…
The authors have nothing to disclose.
Gli autori vorrebbero esprimere gratitudine al signor Boyin Qin (Shanghai Public Health Clinical Center) per l’assistenza tecnica con la valutazione di µCT in questo protocollo.
BALB/c mice | Slac Laboratory Animal,Shanghai, China | N/A | 7-to-9-week-old female BALB/c mice were used in this study. |
Individual ventilated cages | Suhang, Shanghai, China | Model Number: MU64S7 | The cages were used for housing mice in the animal facility. |
Sealing perspex-box | Suhang, Shanghai, China | N/A | The box was used to contain the ozone generator. Mice were exposed to ozone within the box. |
Electric generator | Sander Ozoniser, Uetze-Eltze, Germany | Model 500 | The device was used for generating ozone. |
Ozone probe | ATi Technologies, Ashton-U-Lyne, Greater Manchester, UK | Ozone 300 | The device was used for monitoring and controlling the generation of ozone. |
Pelltobarbitalum natricum | Sigma, St. Louis, MO, USA | P3761 | Mice were anesthetized by intraperitoneal injection of pelltobarbitalum natricum. |
Micro-Computed Tomography | GE Healthcare, London, ON, Canada | RS0800639-0075 | This device was used for acquiring images of the lung. |
Micro-view 2.01 ABA software | GE Healthcare, London, ON, Canada | Micro-view 2.01 | This device was used for reconstruct the lung and analyze volume, LAA of the lung. |
Treadmill machine | Duanshi, Hangzhou, Zhejiang, China | DSPT-208 | This machine was usd for fatigue test. |
Body plethysmograph | eSpira™ Forced Manoeuvres System, EMMS, Edinburgh, UK | Forced Manoeuvres System | This device was used to test spirometry pulmonary function. |
Ventilator | eSpira™ Forced Manoeuvres System, EMMS, Edinburgh, UK | Forced Manoeuvres System | This device was used to test spirometry pulmonary function. |
Slide spinner centrifuge | Denville Scientific, Holliston, MA, USA | C1183 | It was used to spin BALF cells onto slides. |
Wright Staining | Hanhong, Shanghai, China | RE04000054 | It was used to staining macrophages, neutrophils in the suspended BALF. |
Hemocytometer | Hausser Scientific, Horsham, PA, USA | 4000 | It was used to count cells. |
IL-1β | Abcam, Cambridge, MA, USA | ab100704 | They were used to test the respective factors in serum. |
IL-10 | Abcam, Cambridge, MA, USA | ab46103 | They were used to test the respective factors in serum. |
TNF-α | Abcam, Cambridge, MA, USA | ab100747 | They were used to test the respective factors in serum. |
Paraformaldehyde | Sigma, St. Louis, MO, USA | P6148 | The lung was inflated by 4% paraformaldehyde. |
Paraffin | Hualing, Shanghai, China | 56# | It was used to embed the lung. |
Rotary Microtome | Leica, Wetzlar, Hesse, Germany | RM2255 | It was used for sectioning the lung. |
Hgaematoxylin and Eosin (H&E) staining solution | Solarbio, Beijing, China | G1120 | H&E staining was done for morphometric analysis. |
Upright bright field microscope | Olympus, Center Valley, PA, USA | CX41 | It was used to image the H&E staining slides. |
Adobe Photoshop 12 | Adobe, San Jose, CA, USA | Adobe Photoshop 12 | It was used to count the number of alveoli on the H&E stained images. |
GraphPad prism 5 | Graphpad Software Inc., San Diego, CA | GraphPad prism 5 | It was used for data analysis and production of figures. |