सी. एलिगेंस निकालनेवाला नहर Intracellular लुमेन Morphogenesis के लिए एक मॉडल के रूप में और Vivo में एक एकल कक्ष में ध्रुवीकरण झिल्ली की उत्पत्ति: लेबलिंग द्वारा GFP-फ्यूजन, RNAi इंटरेक्शन स्क्रीन और इमेजिंग
Summary
C. एलिगेंस निकालनेवाला नहर de नोवो के vivo विश्लेषण में दृश्य के लिए एक अनूठा एकल सेल मॉडल है कि झिल्ली की उत्पत्ति । इस प्रोटोकॉल मानक आनुवंशिक/RNAi और इमेजिंग दृष्टिकोण, कोशिकीय tubulogenesis निर्देशन अणुओं की पहचान और लक्षण वर्णन के लिए अनुकूलनीय का एक संयोजन का वर्णन करता है, और शिखर झिल्ली और लुमेन ।
Abstract
चार ग. एलिगेंस निकालनेवाला नहरों संकीर्ण ट्यूब एक एकल सेल से जानवर की लंबाई के माध्यम से विस्तारित कर रहे हैं, लगभग उतना ही दूर विस्तारित intracellular endotubes के साथ कि निर्माण और एक झिल्ली और उपझिल्ली के साथ लुमेन को स्थिर शिखर चरित्र का cytoskeleton । निकालनेवाला सेल अपनी लंबाई लगभग २,००० बार फैलता है इन नहरों उत्पंन करने के लिए, इस मॉडल को vivo में मूल्यांकन के लिए अद्वितीय बना de नोवो ध्रुवीय झिल्ली की उत्पत्ति, intracellular लुमेन morphogenesis और कोशिकीय tubulogenesis । प्रोटोकॉल यहां प्रस्तुत कैसे मानक लेबलिंग, लाभ और हानि-समारोह आनुवंशिक या आरएनए हस्तक्षेप (RNAi) गठबंधन करने के लिए, और सूक्ष्म दृष्टिकोण नेत्रहीन टुकड़े के लिए इस मॉडल का उपयोग करें और कार्यात्मक एक आणविक स्तर पर इन प्रक्रियाओं का विश्लेषण करने के लिए दिखाता है । एक लेबलिंग दृष्टिकोण का एक उदाहरण के रूप में, प्रोटोकॉल tubulogenesis के लाइव विश्लेषण के लिए फ्लोरोसेंट फ्यूजन प्रोटीन के साथ ट्रांसजेनिक जानवरों की पीढ़ी की रूपरेखा । एक आनुवंशिक दृष्टिकोण के एक उदाहरण के रूप में, यह एक दृश्य RNAi-आधारित बातचीत के मुख्य बिंदुओं पर प्रकाश डाला गया एक लाभ के समारोह सिस्टिक नहर phenotype संशोधित करने के लिए डिज़ाइन । विशिष्ट वर्णित तरीके है कैसे: लेबल और फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त करके नहरों कल्पना; नहर morphogenesis के आणविक विश्लेषण के लिए एक लक्षित RNAi पुस्तकालय और strategize RNAi स्क्रीनिंग का निर्माण; नेत्रहीन नहर phenotypes के संशोधनों का आकलन; प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा उन्हें स्कोर; फोकल माइक्रोस्कोपी द्वारा उच्च संकल्प पर उपसेलुलर नहर घटकों की विशेषता; और दृश्य मापदंडों को बढ़ाता है । यह दृष्टिकोण जांचकर्ता के लिए उपयोगी है जो कि एलिगेंस निकालनेवाला नहर का लाभ लेने में रुचि रखता है और निस्र्पक जीन intracellular लुमेन और कोशिकीय के phylogenetically संरक्षण प्रक्रियाओं में शामिल की पहचान करने के लिए ट्यूब morphogenesis.
Introduction
सभी आंतरिक अंगों ट्यूब से बना रहे हैं, इस तरह के परिवहन और गैसों, तरल पदार्थ और पोषक तत्वों और चयापचय अपशिष्ट के उत्सर्जन के आदान-प्रदान के रूप में उनके कई विभिंन कार्यों के लिए महत्वपूर्ण है । अलग शिखर और लुमेन झिल्ली के साथ उनके ध्रुवीय चरित्र, इन विशिष्ट कार्यों के लिए अनुकूलित है, और उनके इंडो की उत्पत्ति में दोष-और प्लाज्मा झिल्ली प्रणालियों मानव रोग1,2का लगातार कारण हैं । vasculature और आंतरिक अंगों की नलियों के बहुमत कोशिकीय और फार्म एक लुमेन के रूप में कर रहे हैं; हालांकि, कोशिकीय ट्यूबों, जो लुमेन intracellularly फार्म, उदाहरण के लिए कर सकते हैं, के रूप में ज्यादा के रूप में 30-मानव केशिका बिस्तर के 50% का प्रतिनिधित्व2। बहु और कोशिकीय ट्यूबों के ध्रुवीकरण झिल्ली की संरचना में समान हैं, हालांकि उनके microdomains ट्यूब के विशिष्ट समारोह के आधार पर अलग हो सकता है (जैसे, निकालनेवाला नहर canaliculi बनाम आंत्र microvilli में Caenorhabditis एलिगेंस; C. एलिगेंस आंत्र tubulogenesis)3पर कागज के साथ देखें । ध्रुवीय झिल्ली के सिद्धांतों के उत्पत्ति और tubulogenesis metazoans के बीच संरक्षण कर रहे हैं, और एक समान आणविक मशीनरी उंहें1,2,4निर्देशन ।
इस C. एलिगेंस निकालनेवाला सिस्टम में पांच कक्ष होते हैं: निकालनेवाला सेल (ईसी), डक्ट सेल (DC), ताकना सेल (पीसी) और दो थाइराइड कोशिकाएं । चुनाव आयोग, डीसी या पीसी के पृथक शरीर गुहा में द्रव संचय का कारण बनता है और जानवरों के एक प्रारंभिक लार्वा चरण5में मर जाते हैं । साज़िश, इन तीन कोशिकीय ट्यूबों तीन अलग तरीकों से अपने लुमेन बनाने के लिए: द्वारा सेल खोखले (ईसी); सेल सेलुलर जंक्शन गठन (पीसी) के साथ युग्मित लपेटकर; और सेल रैपिंग (डीसी) के साथ युग्मित द्वारा; लुमेन morphogenesis के विभिंन तंत्र है कि सभी phylogenetically6,7संरक्षित कर रहे हैं । चुनाव आयोग, पीछे ग्रसनी बल्ब के बाएं पार्श्व पक्ष में स्थित है, बाहर दो पार्श्व एक्सटेंशन है जिसमें से चार नहरों शाखा से बाहर भेजता है के लिए पूर्वकाल और पीछे का विस्तार (दोनों सही और बाईं ओर) है कीड़ा नाक और पूंछ की नोक , क्रमशः (चित्रा १)५,६,८. चुनाव आयोग लगभग 1 µm से 2 x १,००० µm, यह जानवर में सबसे बड़ा सेल बनाने से फैली हुई है । एक सेलुलर स्तर पर, निकालनेवाला नहर एक सरल ट्यूब, pseudocoelom की ओर निर्देशित एक बेसल झिल्ली से उत्पन्न होता है, और एक लुमेन झिल्ली (endotube) द्वारा सुरंग । नहर लुमेन झिल्ली अपने ही सेलुलर जंक्शन पर डक्ट लुमेन झिल्ली को जोड़ता है; नहरों में उनकी लंबाई (चित्रा 1) के साथ अंयथा जंक्शन रहे हैं । निकालनेवाला नहर लुमेन झिल्ली और उसके उपझिल्ली cytoskeleton शिखर हैं, उनके आणविक संरचना है कि शिखर झिल्ली और cytoskeleton ट्यूबों की उपझिल्ली कोशिकीय, जैसे आंत के रूप में की संरचना के द्वारा परिभाषित, और अंय (उदा, फ़्लैट) epithelia । Cytoplasmic organelles सहित endosomal vesicular और अन्य (उदा., Golgi) endomembranes नहर की लम्बाई के साथ वितरित किए जाते हैं. इसके अलावा, एकाधिक canalicular बुलबुले-या तो लुमेन झिल्ली से जुड़ा है, और/या परस्पर, या पृथक-नहर के माध्यम से लड़ी पिरोया है कोशिका7,8,9,10 . इस गतिशील प्लाज्मा-झिल्ली/canalicular कनेक्शन आगे नहर की झिल्ली प्रणाली का विस्तार और दोनों लुमेन morphogenesis और osmoregulation10करने के लिए योगदान देता है । निकालनेवाला नहर इस प्रकार इंडो-और प्लाज्मा झिल्ली के लगभग पूरी तरह से होते हैं, ध्रुवीय झिल्ली के विश्लेषण के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल उपलब्ध कराने के उत्पत्ति और इंडो के विनियमन प्लाज्मा झिल्ली इंटरफेस करने के लिए । नहर morphogenesis के दौरान शिखर झिल्ली के नाटकीय विस्तार-इस एकल सेल प्रणाली लुमेन विस्तार के साथ संपाती में-भी वास्तु को स्थिर करने के लिए और एक intracellular लुमेन झिल्ली केंद्र की आवश्यकता से उत्पंन होने वाली समस्याओं का विश्लेषण करने की अनुमति देता है . इस प्रोटोकॉल नहर है ट्यूब और लुमेन संरचनात्मक morphogenesis और intracellular झिल्ली गतिशीलता के विश्लेषण पर ध्यान केंद्रित करने के बजाय इस प्रक्रिया के लिए आवश्यक संकेतों पर है कि प्रत्यक्ष सेल आंदोलनों कि चुनाव आयोग की स्थिति में उत्पंन निकालनेवाला प्रणाली और अंय सेलुलर तत्वों के लिए अपनी जटिल कनेक्शन का निर्माण (6में समीक्षित) ।
C. एलिगेंस एकल सेल नहर प्रणाली का एक और लाभ के विश्लेषण के लिए ध्रुवीकरण झिल्ली और intracellular लुमेन के लिए अपने अलग करने की क्षमता है, विकास के समय के माध्यम से, अपनी झिल्ली के विभिंन घटकों की पीढ़ी और जंक्शन । चुनाव आयोग ventral बंद करने के समय पैदा होता है और ventro-बाद में ग्रसनी के मध्य embryogenesis5,6,8, के दौरान जो समय पार्श्व नहर विस्तार और शाखाओं में बंटी के दौरान बसा हुआ है । यह देर से embryogenesis, एक प्रक्रिया है कि L1-लार्वा चरण (चित्रा 1) में जारी है के दौरान पूर्वकाल पीछे नहर विस्तार के बाद है. एक नए रची लार्वा में, पीछे नहर टिप कीड़ा के बीच लगभग पहुंचता है, पूरी तरह से L1 चरण के अंत में पूंछ के लिए विस्तार, जिसके बाद समय नहर कीड़ा के साथ8बढ़ाव । एक गति से अधिक है कि पशुओं के विकास के इस प्रकार के पहले लार्वा चरण में समाप्त होता है पर सक्रिय नहर विकास, तथापि, आगे की वृद्धि अतिरिक्त लार्वा चरणों (L2-4) के दौरान पूरे जानवर के विकास के साथ समानांतर में होता है । यह सेटिंग de नोवो के भिंन चरणों का विश्लेषण करने का अवसर प्रदान करती है, जो ध्रुवीय कोशिका विभाजन या माइग्रेशन से स्वतंत्र है । इसके अलावा, यह जंक्शनों के विधानसभा से इस प्रक्रिया की जुदाई परमिट (जो लुमेन दीक्षा से पहले भ्रूण में होते हैं); उनकी झिल्ली ध्रुवीकरण में सटीक आवश्यकता अभी भी ध्रुवीय क्षेत्र में एक खुला सवाल है । अंत में, यह विशिष्ट बेसल झिल्ली विस्तार से शिखर अलग, उत्तरार्द्ध निकालनेवाला नहरों में पूर्व पूर्ववर्ती प्रक्रिया10। C. एलिगेंस निकालनेवाला नहर मॉडल इसलिए एक विशेष रूप से जानकारीपूर्ण आंत्र मॉडल है जो ध्रुवीय झिल्ली के विश्लेषण के लिए इन फायदों की एक संख्या के शेयरों के लिए पूरक है, लेकिन यह एक कोशिकीय सेटिंग में निष्पादित (देखें आंतों tubulogenesis पर साथ कागज3) ।
हालांकि जंगली प्रकार नहरों इस छोटे कीड़ा में ultrathin नलिकाओं हैं, उनके लुमेन vi जा सकता हैइस पारदर्शी जानवर में Nomarski प्रकाशिकी द्वारा सीधे sualized । वास्तव में, उत्परिवर्ती सिस्टिक नहर morphologies कम आवर्धन विदारक सूक्ष्म, जो आगे आनुवंशिक स्क्रीन में महान प्रभाव के लिए इस्तेमाल किया गया है tubulogenesis में शामिल जीन की पहचान का उपयोग कर unलेबल्ड पशुओं में विशेषता हो सकती है11। नहरों और उनके ध्रुवीकरण झिल्ली, cytoskeletal घटकों, विभिन्न intracellular organelles और अन्य उपसेलुलर संरचनाओं के भेद की आकृति विज्ञान के बेहतर दृश्य, तथापि, लेबलिंग और उच्च शक्ति फ्लोरोसेंट की आवश्यकता है विदारक और फोकल माइक्रोस्कोपी । हालांकि ‘ नहरों ठीक संरचना लेबलिंग और माइक्रोस्कोपी के लिए कठिनाइयों के एक नंबर बन गया, झिल्ली और सेलुलर घटकों विशिष्ट प्रत्येक डिब्बे के लिए अद्वितीय अणुओं के माध्यम से प्रतिष्ठित किया जा सकता है, और जानवरों को सुरक्षित रूप से माइक्रोस्कोपी के लिए घुड़सवार किया जा सकता है अगर कलाकृतियों को शुरू करने से बचने के लिए कुछ सावधानियां बरती गई हैं ( प्रोटोकॉल और चर्चादेखें) । लेबलिंग निश्चित नमूनों में immunohistochemistry द्वारा किया जा सकता है, या अपने स्वयं के नियंत्रण के तहत फ्लोरोसेंट फ्यूजन प्रोटीन व्यक्त ट्रांसजेनिक कीड़े पैदा करके या निकालनेवाला नहर- vivo इमेजिंग में के लिए विशिष्ट प्रवर्तक. इस प्रोटोकॉल उत्तरार्द्ध लेबलिंग तकनीक का वर्णन करता है (एंटीबॉडी धुंधला के लिए आंतों tubulogenesis पर साथ कागज देखें3) ।
vivo नुकसान में गठबंधन करने की क्षमता-या विकास के दौरान एकल कोशिका स्तर पर vivo इमेजिंग विश्लेषण में लाभ के साथ समारोह के अध्ययन सी. एलिगेंस निकालनेवाला नहर आणविक के लिए एक विशेष रूप से मजबूत मॉडल बनाता है और कोशिकीय tubulogenesis के सेलुलर विश्लेषण । आगे या रिवर्स आनुवंशिक स्क्रीन एक जंगली प्रकार या लेबल ट्रांसजेनिक पशु नहर morphogenesis phenotypes (उदाहरण के लिए, अल्सर) और उनके अंतर्निहित जीन दोषों की पहचान के साथ शुरू किया जा सकता है । वैकल्पिक रूप से, ऐसी स्क्रीन एक उत्परिवर्ती phenotype (जैसे, एक सिस्टिक नहर के साथ शुरू कर सकते हैं) और दमन या इस phenotype के बढ़ाने की पहचान करने के लिए जीन है कि कार्यात्मक रूप से उत्परिवर्ती phenotype कारण जीन के साथ बातचीत की पहचान । आनुवंशिक केकारण उत्परिवर्ती phenotype नुकसान (उदा, जीन विलोपन के माध्यम से ) या एक लाभ (उदाहरण के लिए, एक उत्परिवर्तन को सक्रिय करने के माध्यम से या अतिरिक्त जीन प्रतियां की शुरूआत के माध्यम से) की जांच की समारोह प्रेरित कर सकते हैं । आगे mutagenesis या व्यवस्थित RNAi स्क्रीन जीन समारोह पर धारणाओं के बिना कर रहे है और ब्याज के समारोह में शामिल जीन की निष्पक्ष पहचान की अनुमति । जीनोम की उपलब्धता को देखते हुए व्यापक RNAi खिला पुस्तकालयों, लगभग हर जीन आसानी से कर सकते है नीचे दस्तक RNAi द्वारा सी. एलिगेंसमें, ऐसी है कि ब्याज की किसी भी जीन या जीन के किसी भी समूह (उदाहरणके लिए, लक्षित स्क्रीन में) भी तेजी से जांच की जा सकती है एक रिवर्स आनुवंशिकी दृष्टिकोण में उनके प्रभाव के लिए । दृष्टिकोण का एक संभव संयोजन प्रदर्शित करने के लिए, हम यहां एक लक्षित RNAi बातचीत स्क्रीन का वर्णन, एक लाभ के समारोह सिस्टिक निकालनेवाला नहर उत्परिवर्ती, cytoplasmic नहर ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) के साथ लेबल के साथ शुरू । उत्परिवर्ती phenotype के द्वारा उत्पंन किया गया था एर्म-1, एक उच्च संरक्षित सी. एलिगेंस ortholog झिल्ली की-actin linker परिवार Ezrin-Radixin-Moesin (एर्म), जो लुमेन morphogenesis और झिल्ली में फंसाया गया है कई प्रजातियों में संगठन12. C. एलिगेंस एर्म-1 स्थानीयकरण आंतरिक अंगों, जैसे निकालनेवाला नहर और आंत के लुमेन झिल्ली के लिए, और दोनों में लुमेन गठन के लिए आवश्यक है13. एर्म-1 अत्यधिक actin और बुलबुले नहर लुमेन के लिए भर्ती, लुमेन में प्रवाह में वृद्धि और एक छोटी सिस्टिक नहर पैदा करने और गाढ़ा actin कोट के साथ एक समेटना लुमेन झिल्ली9… प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे निकालनेवाला के साथ ट्रांसजेनिक उपभेदों उत्पंन करने के लिए-नहर-व्यक्त लेबल फ्यूजन प्रोटीन (या अंय प्रोटीन); इस तरह के उपभेदों के साथ शुरू लक्षित RNAi स्क्रीन प्रदर्शन करने के लिए कैसे, एक नहर phenotype के संशोधक की पहचान करने के लिए; और कैसे नेत्रहीन प्रतिदीप्ति विदारक और फोकल माइक्रोस्कोपी से ऐसी स्क्रीन के परिणामों का विश्लेषण करने के लिए, जानकारीपूर्ण tubulogenesis phenotypes यों तो सरल तरीके भी शामिल है । वैकल्पिक लेबलिंग तकनीक और RNAi के विवरण, अक्सर घातक tubulogenesis जीन को समायोजित, आंतों tubulogenesis3पर साथ कागज में पाया जा सकता है । नहर tubulogenesis पर अन्य प्रश्नों की जांच के लिए विभिन्न संयोजनों में सभी तरीकों का प्रयोग किया जा सकता है ।
Protocol
1. C. एलिगेंस निकालनेवाला नहर को फ्लोरोसेंट फ्यूजन प्रोटीन द्वारा लेबल करना 14
नोट: साथ आंतों tubulogenesis पर पेपर देखें 3 निकालनेवाला नहर के लिए अनुकूलनीय प्रक्?…
Representative Results
Discussion
C. एलिगेंस ‘ आनुवंशिक बहुमुखी प्रतिभा, पारदर्शिता, सरल शरीर योजना और अपरिवर्तनीय सेल वंश सभी यह morphogenesis के विश्लेषण के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल बना । इस प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे मानक आनुवंशिक जोड़तोड़ और इम?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम Buechner (विश्वविद्यालय कैनसस, कैनसस, संयुक्त राज्य अमेरिका), के Nehrke (विश्वविद्यालय रोचेस्टर चिकित्सा केंद्र, रोचेस्टर, ंयूयॉर्क, संयुक्त राज्य अमरीका), और Caenorhabditis जेनेटिक्स केंद्र, स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों द्वारा वित्त पोषित, अनुसंधान के कार्यालय के बुनियादी ढांचे का धंयवाद कार्यक्रम (P40 OD010440) । यह काम पलाश NIH GM078653 द्वारा समर्थित था, MGH २२४५७० है और साे २२३८०९ को V.G.
Materials
| Cloning | |||||
| Plasmid pPD95.75 | Addgene | Cat. No. 37464 | |||
| PCR Kit | Qiagen | Cat. No. 27106 | |||
| Ligation kit | New England Biolabs | Cat. No. E2611L | |||
| DNA marker | Thermo Scientific | Cat. No. SM1331 | |||
| Agarose DNA grade | Fisher Scientific | Cat. No. BP164-100 | |||
| Competent cells | New England Biolabs | Cat. No. C2987H | |||
| Tris | Fisher Scientific | Cat. No. BP154-1 | |||
| EDTA | Sigma | Cat. No. ED-1KG | |||
| Acetic acid | Fisher Scientific | Cat. No. A38S-500 | |||
| Ethidium bromide | Fisher Scientific | Cat. No. BP1302-10 | |||
| Equipments | |||||
| PCR machine | MJ Research | Cat. No. PTG-200 | |||
| Centrifuge | Eppendorf | Cat. No. 5415C | |||
| Water Bath | Precision Scientific | Cat. No. 666A3 | |||
| Gel running instrument | Fisher Scientific | Cat. No. 09-528-165 | |||
| Gel running power supply | Fisher Scientific | Cat. No. 45-000-465 | |||
| Molecular Imager Gel Doc XR System | Bio-Rad | Cat. No. 1708195EDU | |||
| Nanodrop Spectrophotometer | Thermo Scientific | Cat. No. ND1000 | |||
| C. elegans related1 | 1see reference27 for standard C. elegans culture and maintenance procedures. | ||||
| LB Medium and plates2 | 2see reference24 for protocols. | ||||
| Tryptone | Acros Organics | Cat. no. 611845000 | |||
| Yeast Extract | BD Biosciences | Cat. no. 212750 | |||
| NaCl | Sigma | Cat. no. S7653 | |||
| Bacto Agar | BD Biosciences | Cat. no. 214040 | |||
| Ampicillin | Sigma | Cat. no. A0116 | |||
| Tetracycline | Fisher Scientific | Cat. no. BP912 | |||
| M9 Medium2 | 2see reference24 for protocols. | ||||
| NaCl | Sigma | Cat. no. S7653 | |||
| KH2PO4 | Sigma | Cat. no. P0662 | |||
| Na2HPO4 | Sigma | Cat. no. S7907 | |||
| MgSO4 | Sigma | Cat. no. M2773 | |||
| NGM plates 2 | 2see reference24 for protocols. | ||||
| NaCl | Sigma | Cat. no. S7653 | |||
| Peptone | BD Biosciences | Cat. no. 211677 | |||
| Tryptone | Acros Organics | Cat. no. 611845000 | |||
| Bacto Agar | BD Biosciences | Cat. no. 214040 | |||
| MgSO4 | Sigma | Cat. no. M2773 | |||
| CaCl2 | Sigma | Cat. no. C3881 | |||
| Cholesterol | Sigma | Cat. no. C8667 | |||
| K2HPO4 | Sigma | Cat. no. P3786 | |||
| KH2PO4 | Sigma | Cat. no. P0662 | |||
| RNAi plates3 | 3see reference60 for protocols. | ||||
| NaCl | Sigma | Cat. no. S7653 | |||
| Peptone | BD Biosciences | Cat. no. 211677 | |||
| Tryptone | Acros Organics | Cat. no. 611845000 | |||
| Bacto Agar | BD Biosciences | Cat. no. 214040 | |||
| MgSO4 | Sigma | Cat. no. M2773 | |||
| CaCl2 | Sigma | Cat. no. C3881 | |||
| Cholesterol | Sigma | Cat. no. C8667 | |||
| K2HPO4 | Sigma | Cat. no. P3786 | |||
| KH2PO4 | Sigma | Cat. no. P0662 | |||
| IPTG | US Biological | Cat. no. I8500 | |||
| Carbenicillin | Fisher Scientific | Cat. no. BP2648 | |||
| NaOH | Fisher Scientific | Cat. no. SS266-1 | |||
| Sodium hypochlorite | Fisher Scientific | Cat. no. 50371500 | |||
| Bacteria | |||||
| OP50 bacteria | CGC | ||||
| HT115 bacteria | CGC | ||||
| Genome-wide RNAi libraries | |||||
| Ahringer genome-wide RNAi feeding library (ref29,49) | Source BioScience | ||||
| C. elegans ORF-RNAi feeding library (ref50) | Source BioScience | ||||
| Imaging related | |||||
| Lidocaine | MP Biomedicals,LLG | Cat. no. 193917 | |||
| Materials | |||||
| Vacuum Grease Silicone | Beckman | Cat. no. 335148 | |||
| Microscope slides | Fisher Scientific | Cat. no. 4448 | |||
| Microscope coverslips (22×22-1） | Fisher Scientific | Cat. no. 12-542-B | |||
| Tissue culture plate, 6 well | Corning Inc. | Cat. no. 08-772-33 | |||
| Equipment | |||||
| SMZ-U dissecting microscope (Nikon) | |||||
| SZX12 dissecting microscope (Olympus), equipped with a high-power stereo fluorescence attachment (Kramer Scientific), CCD camera with Q capture software and X-Cite fluorescent lamp (Photonic Solutions). | |||||
| TCS SL Laser-scanning confocal microscope (Leica Microsystem) | |||||
| C2 laser-scanning confocal mounted on an ECLIPSE Ti-E inverted microscope (Nikon) | |||||
Referências
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