生体内でマルチ モーダル イメージングとマウス レーザー誘発脈絡膜新生血管モデルの解析
Summary
マウスのレーザー誘発脈絡膜新生血管の形態学的変化のフォロー アップの縦生体内イメージングの有用性を紹介します。
Abstract
レーザー誘発脈絡膜新生血管 (CNV) は、加齢に伴う黄斑変性症 (AMD) のウェット フォームを模倣する確立されたモデルです。このプロトコルでは血管新生のプロセス、マルチ モーダル縦から得ることができる強力な情報焦点を当てるをトリガーするレーザー誘起病変を生成の技術的な考察を通して単に読者を目指します生体内のフォロー アップ期間中イメージングします。
レーザー マウス CNV モデルは、ダイオード レーザーの管理によって生成されました。体内のマルチ モーダル イメージング技術は、CNV 誘導、進行と回帰を監視する使用されました。最初、ブルッフ膜の中断を確認するレーザー加工直後後スペクトル領域光干渉断層法 (SD 10 月) を行った。血管造影 (FA) を使用してその後体内イメージング脈絡膜レベルでシリアル画像からブルッフ膜の正常な損傷を確認しました。SD 10 月と FA の両方を使用して CNV の増殖と、レーザー加工後 5、10、および 14 日回帰の縦方向のフォロー アップを行った。シンプルで信頼性の高い FA 画像から漏れの CNV leasions の等級が表示されます。CNV のサイトで網膜の厚さの測定のための手動口径アプリケーションと組み合わせて、合計の網膜厚測定のための自動セグメンテーションは、浮腫の存在の公平な評価を許可します。最後に、脈絡膜の flatmounts に isolectin GS IB4 染色を使って CNV の組織学的検証を行います。どちらられる、染色は、ImageJ で isolectin 正面積が計算されます。
このプロトコルは、CNV の病理学のような高スループット スクリーニングを必要とすることができます高速、マルチ モーダル、治療研究と CNV 病理学および網膜浮腫の信頼性の高い分類に便利です。さらに、高解像度 SD OCT は網膜や網膜の流体の蓄積など、他の病理学的特徴の記録をできます。ただし、このメソッドは SD OCT 画像から手動で行う必要のあるボリュームの CNV 解析を自動化する可能性を行いません。
Introduction
齧歯動物で人間の CNV の病理学を模倣する最初の成功した試みはロング ・ ラット1クリプトン レーザーでほぼ三十年前を示した。その後、クリプトン レーザーは、最も人気のあるマウス緊張、c57bl/6 j2,3,4でブルッフ膜を破るに使用されました。FA と組織学的汚れ CNV 誘導の成功率を検証しました。OCT などの非侵襲的画像診断装置の急速な発展は、齧歯動物の前臨床モデルのフィールドの成長を促しています。大幅目と同じで複数の時点で網膜の形態変化を監視する機能は動物の使用の削減に寄与する、実験的研究の効率が向上します。CNV 病変の組織学的評価ではなく簡単で、レーザー管理、画像取得と画像解析ソフトを用いた面積/体積推定のサイトの周りの異常血管の増殖のラベリングを必要とします。対照的に、生体内のイメージ投射様相は、CNV の病理とその解釈のより複雑な分析をご紹介します。
ここで提示グレード誘導、進行、CNV の回帰してシンプルで比較的高速なメソッド FA、SD、OCT を使用して、マウスの自動抽出法レーザー誘起 CNV モデル。
Protocol
Representative Results
Discussion
マルチ モーダル イメージングでは、CNV の病理学的評価のための貴重なツールを提供しています。FA から成るイメージング プロトコルの紹介、SD OCT と CNV 病理、再現可能な迅速かつ信頼性の高い評価のための自動セグメンテーション。ブルッフ膜レーザー管理が確認された後の休憩。また、この段階で SD 10 月の使用はまたの結果の解釈を混同するかもしれない可能な網膜と網膜出血の即時?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者感謝したい Yuliya Naumchuk (Loyola 大学シカゴ)、アグネ Žiniauskaitė (Experimentica 株式会社) 優れた技術と再生産のサポート。カジャ博士の研究プログラムをサポートするには、博士ジョン p. とテレーズ E. マルケイ恵まれて教授ロヨラ大学シカゴ校で眼科で。
Materials
| Medetomidine (commercial name Domitor) | Orion | Vnr 01 56 02 | Anesthesia |
| Ketamine | Intervet | Vnr 51 14 85 | Anesthesia |
| 0,9% NaCl | B Braun | 357 0340 | Anesthesia |
| Xylazine (commercial name Rompun vet) | Bayer | vnr 14 89 99 | Anesthesia |
| Tropicamide | Santen | Vnr 04 12 36 | Mydriatic agent |
| Viscotears | Alcon | Vnr 44 54 81 | Lubricant |
| Systane | Alcon | - | Lubricant |
| 5% Fluorescein sodium salt | Sigma Aldrich | F6377-100G | Fluoresent agent |
| Atipamezole (commercial name Antisedane) | Orion | Vnr 47 19 53 | Anesthesia |
Referências
- Dobi, E. T., Puliafito, C. A., Destro, M. A new model of experimental choroidal neovascularization in the rat. Arch. Ophthalmol. Chic. Ill 1960. 107, 264-269 (1989).
- Tobe, T., et al. Evolution of neovascularization in mice with overexpression of vascular endothelial growth factor in photoreceptors. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 180-188 (1998).
- Seo, M. S., et al. Dramatic inhibition of retinal and choroidal neovascularization by oral administration of a kinase inhibitor. Am. J. Pathol. 154, 1743-1753 (1999).
- Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. Animal models of choroidal and retinal neovascularization. Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).
- Shah, R. S., Soetikno, B. T., Lajko, M., Fawzi, A. A. A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization. J Vis Exp. (106), e53502 (2015).
- Giani, A., et al. In vivo evaluation of laser-induced choroidal neovascularization using spectral-domain optical coherence tomography. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3880-3887 (2011).
- Gong, Y., et al. Optimization of an Image-Guided Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model in Mice. PloS One. 10, e0132643 (2015).
- Sheets, K. G., et al. Neuroprotectin D1 attenuates laser-induced choroidal neovascularization in mouse. Mol. Vis. 16, 320-329 (2010).
- Hoerster, R., et al. In-vivo and ex-vivo characterization of laser-induced choroidal neovascularization variability in mice. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. Albrecht Von Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol. 250, 1579-1586 (2012).
- Sulaiman, R. S., et al. A Simple Optical Coherence Tomography Quantification Method for Choroidal Neovascularization. J. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. 31, 447-454 (2015).
