游离的小鼠皮层神经元文化的制备

Summary

这个视频显示了从胚胎后期和产后早期小鼠皮层神经元的文化生成的过程。这些文化可用于免疫细胞化学，生物化学，电生理，钙和钠成像，并提供一个平台，携带产后的致死基因突变的转基因动物研究神经元发育。

Abstract

此影片将引导的过程，产生胚胎后期和产后早期小鼠大脑的皮层神经元的文化。这些文化可用于各种应用，包括免疫细胞化学，生物化学，电生理，钙，钠成像，蛋白质和/或RNA隔离。这些文化也提供了一个平台，进行胚胎后期或出生后致死的基因突变的转基因动物研究神经发育。这个过程是相对直线前进，需要在组织培养技术的一些经验，不应该超过两到三个小时，如果你是正确准备。从丘脑 – 皮层纤维束的皮质外皮仔细分离，将减少不必要的非神经元细胞的数量。为了提高神经细胞的产量皮层组织碎片轻轻磨碎后酶的孵化步骤。这是必要的，因为它可以防止不必要的损伤细胞和神经细胞过早死亡。由于这些文化都保持在神经胶质细胞饲养层细胞的情况下，他们还提供了一个增长中的神经元丰富的文化附加值优势。

Protocol

培养前一天的准备工作： 准备无菌解剖解决方案（DS）。 准备NBM/B27（Neurobasal Mediom B27的补充）。 高压灭菌器DDH 2 O和消毒玻璃coversilps，如果需要的话。 涂层组织培养皿或D -聚赖氨酸的盖玻片。 D -聚赖氨酸涂层： 准备无菌条件下培养前一天。 解冻分装10X PDL和冰的地方。 添加1毫升的客运专线和9 ml无?…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
5-Fluoro-2′-deoxyuridine		Sigma	F0503
Sodium Chloride		Sigma	S9625
Vibraslicer		Campden Instruments Ltd.
Potassim Chloride		Sigma	P4504
Sodium Phosphate Dibasic		Sigma	S0876
Potassium Phosphate Monobasic		Sigma	P5379
Hepes		Sigma	H3375
D (+)-Glucose		Sigma	G8270
Sucrose		Sigma	S0389
Poly-D-Lysine		Sigma	P7280
B27 Supplement		Invitrogen (Gibco)	17504-044
Neurobasal Media (NBM)		Invirtogen (Gibco)	21103-049
2-Amino-5-phosphonopentanoic acid		Sigma	A5282
Bovine Albumin		Sigma	A7030
Trypsin Inhibitor		Sigma	T9253
Sodium Hydroxide, 1N solution		Fisher	SS266-1
L-Cysteine		Sigma	C7755
Bacto Agar		Difco	0140-01
Papain		Worthington	LS 03126
Sterile 0.2 µm Syringe Filter		Fisher	DDA02025S0
Glass Coverslips, No1, Ø12mm		Bellco Glass Inc.	1943-00012
Minimum Essential Media (MEM)		Invitrogen (Gibco)	11090-081	with Earle’s salts without L-glutamine, needed for growing non-neuronal cultures
Penicillin/Streptomycin		Invitrogen (Gibco)	15070-063	for non-neuronal culture
Fetal Bovine Serum		Invitrogen (Gibco)	16140-071	needed for non-neuronal cultures
Nunclon “Triple Flask” Tissue Culture Bottle		Fisher	12-565-25	Use for non-neuronal cultures. these flasks are very convenient when producing “conditioned Neurobasal Media/B27”, but any other tissue culture flasks or dishes can be used instead.
Glass bottom “Imaging dishes”		MatTek Corp.	P35G-1.5-10-C	Glass bottomed, Ø35mm culture dishes ideal for Calcium or Sodium Imaging when using an inverted imaging setup. But expensive!