プロテオーム解析のための人間の網膜と網膜色素上皮・脈絡膜の解剖
Summary
人間の網膜は中心窩、黄斑の周辺部網膜など、分子の機能と異なる領域で構成されます。ここでは、細かく分析し、下流のプロテオーム解析のこれらの異なる網膜領域を収集パンチ生検と組織人間の目からレイヤーを手動で削除を使用して、メソッドについて述べる。
Abstract
人間の網膜は、しっかりと血管脈絡層に複合体である感覚の neuroretina と基になる網膜色素上皮 (RPE) ので構成されます。網膜の異なる領域は、解剖学的および分子異なります、ユニークな機能を促進し、病気に対する差動感受性を示します。これらの地域や層のそれぞれのプロテオーム解析は加加齢黄斑変性 (AMD)、糖尿病、緑内障など多くの病気の分子プロセスに重要な洞察力を提供できます。ただし、定量的プロテオーム解析を行うことができます前に網膜領域と層の分離が不可欠です。ここでは、解離と中心窩、黄斑および周辺網膜領域と網膜色素上皮-脈絡膜複合体の基になる、地域のパンチ生検と組織人間の目からレイヤーを手動で削除を含むコレクションの手法について述べる。液体クロマトグラフィー/タンデム質量分析法 (MS/LC-MS) などの下流のプロテオーム解析と同様に、一次元の SDS-PAGE 使えます切り裂かれた網膜各層については、蛋白質を識別するために網膜疾患の分子バイオ マーカーを明らかに。
Introduction
網膜、網膜色素上皮、脈絡膜は、蛋白質の表現、生理機能、病理学的感受率1,2の重要な地域の違いを示す複雑な組織です。たとえば、加加齢黄斑変性 (AMD)、網膜色素変性症、中心性漿液性網膜症は、各などの疾患を示す特徴的な局在中心窩、黄斑、網膜周辺部1,3、以内 4,6。どのように異なる網膜領域は独立してサンプリングすることができますを示す方法を紹介します。このメソッドの全体的な目標は、プロテオーム解析の人間の網膜と網膜色素上皮・脈絡膜の中心窩、黄斑および周辺地域から組織サンプルのコレクションのための信頼できるガイドを提供することです。開発し、この技術の使用のための理論的根拠では、これら特定の網膜領域、これらの領域の生理学的および病態生理学的機能に分子洞察が得られる可能性があります重要なのプロテオーム解析。
このアプローチは、相対地域病感受性のプロテオミクス基盤を明らかにするため、新しい具体的な治療目標の識別を容易にするお約束します。確かに、硝子体と網膜とのやり取りのプロテオーム研究は分子組成と健康と病気の組織5,7,8の機能に重要な洞察を提供しています。,9,10,11,12,13。 ただし、異なる網膜領域の明確な比較プロテオーム解析が欠けています。技術は、信頼性と再現性のある組織のコレクションのアプローチを示すことによって他の方法上の利点を提供するこれらの大いに必要な研究をサポートするのに役立ちます。もっとそう、アプローチは非常にアクセス可能な標準サイズと容易に入手できる組織パンチ生検ツールを活用です。本手法では、プロテオミクス処理、タンパク質の安定性の低下の重要な考慮事項のためのティッシュの適切なコレクション ・を強調しています。したがって、このメソッドは、プロテオーム因子の下流の分子解析を考慮した調査に最適です。
Protocol
Representative Results
Discussion
組織後コレクション、検体の取扱い、トリートメントが重要な考慮事項14です。後者は下流解析を傾けることができる蛋白質の構造に損傷の恐れがありますので、液体窒素中での保存は、化学固定法より優先されます。さらに、液体窒素保存サンプルの凍結を伴わない方法をお勧めします。特に、フェレールら4 ° C または 0 ° C15で保存されているも?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
VBM はドリス ・ デューク慈善財団助成金 [K08EY020530、R01EY024665、R01EY025225、R01EY024698、R21AG050437]、NIH の補助金によってサポートされている #: 2013103、および研究を防ぐため失明 (RPB)、ニューヨーク、NY。MT と GV が NIH によってサポートされて T32GM007337 を付与します。
Materials
| 4-mm skin punch biopsy tool | Miltex | REF 33-34 | |
| 8-mm skin punch biopsy tool | Miltex | REF 33-37 | |
| 0.12 Colibri Forceps | Stephens Instruments | S5-1145 | |
| Wescott Scissors | Sklar Surgical Instruments | 64-3146 | |
| Microfuge tubes | Eppendorf | #022364111 | 1.5 mL |
| Liquid Nitrogen | Praxair, Inc. | 7727-37-9 [R] |
Referências
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