Beurteilung der Harnwege Junction Obstruktion Mängel durch Methylenblau-Dye-Injektion
Summary
Methylenblau-Dye-Injektion in das Nierenbecken erleichtert die Beurteilung der Harnwege Kreuzung Obstruktion Mängel während der Maus embryonalen Harnwege Entwicklung. Hier wird ein Protokoll für Methylenblau-Dye-Injektion in das Nierenbecken beschrieben.
Abstract
Harnwege Kreuzung Obstruktion Mängel sind angeborene Anomalien induzierende Hydronephrose und Hydroureter. Murine Harnwege Kreuzung Obstruktion Mängel können beurteilt werden, durch die Verfolgung Methylenblau färben Strömung innerhalb der Harnwege. Methylenblau-Dye in das Nierenbecken der perinatalen embryonale Nieren injiziert und Farbstoff wird überwacht von den Nierenbecken der Niere durch den Harnleiter und in das Lumen der Blase nach dem hydrostatischen Druck anwenden. Farbstoff Anhäufung werden deutlich in der Blase Lumen der normalen perinatale Harnwege, sondern wird zwischen dem Nierenbecken und den Endpunkt der eine abnorme Harnleiter, eingeschränkt werden, wenn die Harnwege Hindernisse auftreten. Diese Methode ermöglicht die Bestätigung der Harnwege Kreuzung Hindernisse und Visualisierung von Hydronephrose und Hydroureter. Dieses Manuskript beschreibt ein Protokoll für Methylenblau färben Injektion in das Nierenbecken, Harnwege Kreuzung Hindernisse zu bestätigen.
Introduction
Das Harnsystem besteht aus einem Paar Nieren und Harnleiter und einer gemeinsamen Blase und Harnröhre. Die Hauptfunktion des Harnsystems ist Körper-Homöostase durch die Verwaltung der Wasser- und Elektrolyt-Gleichgewicht des Blutes. Die Nieren filtern das Blut zur Kontrolle Elektrolyt Konzentrationen und Säure-Basen-Gleichgewicht und produzieren Urin um überschüssiges Wasser und Abfällen einschließlich Solute und Stoffwechselprodukte auszuscheiden. Urin wird dann durch den Harnleiter aus dem Nierenbecken der Niere, die Bladderin einer unidirektionalen Weise transportiert, wo es gespeichert und schließlich über die Harnröhre1beseitigt.
Die Harnleiter sind gerade Rohre mit Ursprung aus dem nephric Rohr. Nach angehenden aus dem nephric Rohr an embryonalen Tag 10.5 (E10.5) in der Maus, der Harnleiter Stiel verlängert und differenziert in eine mehrschichtige Struktur namens Urothel, die zwischen Maus undurchlässig ist, E12.5 und E16.5. Die mesenchymalen Zellen umgibt den Harnleiter Stiel unterscheiden sich auch in drei Schichten bestehend aus inneren Stromazellen Zellen, zwischen dicken glatten Muskelzellen und äußeren adventitial Fibroblasten. Harnleiter peristaltische Wellen, Einleitung in das Nierenbecken werden vermehrt durch die glatte Muskulatur Schicht der Mauer Harnleiter in die Blase Urin2,3, transportieren die ab E16.5 in der Maus-1produziert wird.
Angeborene Fehlbildungen der Nieren und Harnwege (CAKUT) gehören zu den häufigsten Erbkrankheiten, bei rund 1 % der menschlichen Föten1,4, und setzt sich aus einer Vielzahl von Phänotypen einschließlich Hydronephrose und Hydroureter. Die abnorme Ansammlung von Urin in der Niere und Harnleiter führt Hydronephrotic Nieren- und Hydroureter Bildung. Eine Ursache der Hydronephrose und/oder Hydroureter Formation ist eine Obstruktion der Harnwege. Ureteropelvic Kreuzung Obstruktion (UPJO), verursacht durch aberrante Harnfluss durch eine Blockade zwischen den proximalen Harnleiter und das Nierenbecken, wodurch Hydronephrose und proximale Hydroureter Verengung mit Winkelung oder hartnäckige Falten5, 6. Darüber hinaus wird die ektopische Einfügung von den distalen Harnleiter in die Blasenwand oder die Fortpflanzungsorgane vesikale Kreuzung Obstruktion (UVJO) genannt. UVJO kann auch Hydronephrose und Hydromegaureter Bildung7,8induzieren. Ein zusätzliche vesikale Kreuzung (UVJ) defekt ist Vesicoureteric Reflux (VUR). VUR zeichnet sich durch retrograde Urin-Flow aus der Blase in Richtung Niere bei UVJ. Im Vergleich zu UVJO, zeigen perinatale Embryonen mit VUR deutlich einen aufgeblähten Hydronephrotic Nieren- oder schweren Hydroureter Phänotyp9nicht.
In der Labormaus kann Urin-Flow durch Injektion eines Farbstoffes, wie Methylenblau, in das Nierenbecken9untersucht werden. Die Injectedmethylene blaue Lösung wird die Flugbahn der Urin aus dem Nierenbecken durch den Harnleiter und in die Blase verfolgen. Hydronephrose kann durch eine Erweiterung des Farbstoffs in der Niere erkannt werden. UPJO kann als eine Blockade der Farbstoff Strömung an den proximalen Harnleiter mit aufgeblähten Nierenbecken5erkannt werden. Dilatation der Harnleiter durch einen aufgeweiteten Durchmesser angegeben zeigt ein Beispiel für Hydroureter. Zu guter Letzt Farbstoff Ansammlung an der Blasenwand oder auf der Website der Fortpflanzungsorgane zeigt UVJO mit aufgeblähten Hydronephrotic Niere und geweitet Hydromegaureter7,10. Um VUR zu erkennen, die Farbstofflösung in die Blase injiziert und anschließende retrograde wird in der Niere9überwacht.
Hier ist ein Protokoll für Methylenblau färben Injektion in das Nierenbecken eines perinatalen Embryos präsentiert. Dieses Protokoll ermöglicht die Rückverfolgung von Urin-Flow aus dem Nierenbecken durch den Harnleiter und in die Blase und prüft mögliche Harnwege Kreuzung Hindernisse wie UPJO oder UVJO.
Protocol
Representative Results
Discussion
Maus-Nieren sind funktionale Beginn E16.5 und ein Farbstoff-Injektion-Test ist ab diesem Zeitpunkt theoretisch möglich. Jedoch die Niere ist zu klein, um mit der Farbstofflösung injiziert werden und Phänotypen wie Hydronephrose und Hydroureter sind nicht eindeutig beobachtet, da diese Phänotypen als Nebeneffekt des Urins durch abnorme Urin Transport aufgebaut sind. Diese Phänotypen von Hindernissen wie UPJO oder UVJO, sind offensichtlich am E18.5 durch aufgeblähten Nieren und Harnleiter. Größere Nieren von Embryo…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ich danke Dr. Alan O. Perantoni (CDBL/NCI/NIH) für die Einreichung des Manuskripts zu unterstützen. Ich danke auch Dr. Michael Hall (CDBL/NCI/NIH) und Nirmala Sharma (CDBL/NCI/NIH) für die Bearbeitung dieser Handschrift. Ich bin dankbar für seine ausgezeichnete Maus Tierhaltung, Lai Thang (SAIC). Diese Arbeit wurde von den National Institutes of Health, National Cancer Institute und Center for Cancer Research unterstützt.
Materials
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. NORMAL SALINE – 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip | BD | 309657 | |
| Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane | Pall corporation | 4614 | |
| Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Delicate Operating Scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| Micro Dissecting Forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5135 | |
| Dumont Tweezers; Pattern #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
Referências
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