メチレン ブルー色素注入による尿路ジャンクション閉塞欠陥の評価
Summary
メチレン ブルー色素を注入、腎盂マウス胚性尿路開発中に尿路ジャンクション閉塞欠陥の評価が容易になります。ここでは、腎盂にメチレン ブルー色素液を注入するためのプロトコルを説明します。
Abstract
尿路ジャンクション閉塞奇形は、水腎症や水尿管を誘導する先天異常です。マウス尿路ジャンクション閉塞奇形は、尿中のシステム内のメチレン ブルー色素の流れを追跡することによって評価できます。周産期の萌芽期の腎臓の腎盂にメチレン ブルー色素を注入し、静水圧を適用した後尿管と膀胱内腔に腎臓の腎盂から色素の流れを監視します。色素の蓄積は正常周産期尿路膀胱内腔で明らかになりますが、尿路通過障害が発生した場合に, 腎盂と異常な尿管の終了点の間拘束します。このメソッドは、尿路ジャンクション障害物の確認と水腎、水尿管の可視化を促進します。本稿では、メチレン ブルー色素を注入腎盂尿路接合の障害物を確認するためのプロトコルについて説明します。
Introduction
泌尿器系は、腎臓、尿管および一般的な膀胱と尿道のペアで構成されます。泌尿器系の主な機能は、血液の水分・電解質のバランスを管理することによって体の恒常性を維持することです。腎臓はコントロール電解質濃度、酸塩基平衡、血液をろ過し、余分な水分と溶質と代謝産物などを含む廃棄物を排泄する尿を生成します。Bladderin 一方向方法で保存および尿道1で最終的には排除する腎臓の腎盂から尿管を尿後転送します。
尿管がストレート管 nephric 管から発生しました。マウスの萌芽期の日 10.5 (E10.5) で nephric のダクトから出芽後、尿管茎を延長し、E12.5 と E16.5 マウス間透水性である尿路上皮と呼ばれる多層構造に区別します。尿管茎を取り巻く間葉系細胞はまた間質細胞の内側、中間厚い平滑筋細胞と外側の外繊維芽細胞から成る 3 つの層に区別されます。尿2,3マウス1E16.5 でから作り出されるを輸送するため膀胱に尿管壁の平滑筋層を通って腎盂で開始する尿管の蠕動波が反映されます。
腎臓や尿路 (先天) の先天異常は最も頻繁に遺伝的疾患、胎児1,4の約 1% に存在の中で、さまざまな水腎症や水尿管などの表現型から成る。腎臓と尿管の尿の異常な蓄積, 水腎・水尿管の形成で起因します。水腎症や水尿管形成の原因の 1 つは、尿路の閉塞です。腎盂尿管移行部狭窄 (UPJO) は近位尿管と腎盂、腎と湾曲または永続的な折り畳み式5、近位尿管狭窄の結果との間の閉塞が原因の異常尿の流れによって引き起こされる 6。また、膀胱壁や生殖器官に遠位尿管異所挿入尿管移行部狭窄 (UVJO) と呼びます。UVJO することができますも水腎症および hydromegaureter の形成7、8を誘発します。その他尿管ジャンクション (UVJ) 欠陥が度逆流症 (VUR です)。VUR は UVJ で腎臓への膀胱からの逆行性尿の流れによって特徴付けられます。UVJO と比較して、vur が認められた周産期胚はっきりと示さない膨張, 水腎または尿管の深刻な表現型9。
実験室マウスの腎孟9へのメチレン ブルーなどの色素の注入によって尿の流れを調べることができます。青 injectedmethylene ソリューションは、腎盂、尿管、膀胱からの尿軌道がトレースされます。水腎症は、腎臓で色素の展開によって認識できます。UPJO 色素近位尿管腎盂が膨張した5流の閉塞として検出できます。尿管の拡大径によって示される任意の拡張は、尿管の例を示します。最後に、色素蓄積膀胱壁、または生殖管のサイトでは膨張した, 水腎と UVJO を示し、hydromegaureter7,10を拡張します。膀胱に VUR を検出する色素溶液を注入し、腎臓9以降の逆行フローを監視します。
ここでは、周産期胎児の腎孟にメチレン ブルー色素注入のプロトコルが表示されます。このプロトコルにより、腎盂尿管、膀胱からの尿の流れのトレースと UPJO や UVJO など潜在的な尿路接合の障害物を確認します。
Protocol
Representative Results
Discussion
マウス腎臓機能の先頭 E16.5 で、色素注入試験はこの時点から理論的に可能です。しかし、腎臓は色素溶液を注入するのには小さすぎる、これらの表現型は、尿異常尿搬送による構築の二次的効果によって水腎症や水尿管などの表現型が明瞭に観察されません。UPJO または UVJO などの障害物からのこれらの表現型は膨張した腎臓と尿管で E18.5 で明白であります。E19.5 または新生児子犬で胚の大…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この原稿の提出を支援博士アラン o. Perantoni (CDBL、NCI、NIH) をありがちましょう。私もこの原稿を編集の博士マイケル ホール (CDBL、NCI、NIH) とニルマラ シャルマ (CDBL、NCI、NIH) に感謝します。私は彼の優れたマウス飼育のライ タン (SAIC) に感謝しています。この作品は、癌研究のための健康、国立癌研究所とセンターの国立衛生研究所によって支えられました。
Materials
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. NORMAL SALINE – 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip | BD | 309657 | |
| Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane | Pall corporation | 4614 | |
| Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Delicate Operating Scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| Micro Dissecting Forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5135 | |
| Dumont Tweezers; Pattern #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
Referências
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