Повторно Arterialized крысы частично трансплантации печени в естественных условиях судно-ориентированный 70% гепатектомии
Summary
Здесь представлен протокол с участием вновь arterialized крысы частично трансплантации печени. В частности 70% печени был резецированный в естественных условиях , используя обновленный технику судна ориентированной гепатектомии. Печеночной артерии был реконструирован в духе конец в бок. Манжета техника была изменена, чтобы сократить время анастомоза infrahepatic верхней полой вены.
Abstract
Сплит трансплантации печени и трансплантации печени донорской печени жизни были разработаны в клинике использовать печени органов в более эффективной манере. Чтобы лучше понять механизм позади этих хирургических процедур, крысы модель частичной трансплантации печени (PLTx) была создана для хирургических исследований. Из-за сложности модели PLTx крыса требуется протокол с подробными описаниями. Протокол, в котором ex vivo гепатектомии использовался для достижения 50% крыса PLTx сообщалось ранее опубликованной статьи. В отличие от этого протокола мы ввели заново arterialized PLTx с 70% в vivo гепатектомии. Обновлено судна ориентированный гепатектомии была включена в крыса PLTx для уточнения микрохирургическая процедура. Портал вен и печёночной артерии левого бокового лепестка и средний лепесток индивидуально были расчленены и лигируют до удаления паренхимы печени, тем самым уменьшая вероятность кровотечения в печени остатки пней. Кроме того судно конец в бок анастомоза между общим печеночной артерии и расширенного надлежащего печеночной артерии была введена для повторного arterialize печёночной артерии. Используя эту технику наложения анастомоза конец в сторону судна, диаметр анастомоз был расширен, тем самым уменьшается сложность ручной шов и поддерживать высокий уровень проходимости анастомоза. Кроме того манжета анастомоза infrahepatic полой вены был слегка изменен. Раздел продольных паренхимы печени вокруг верхней полой вены получателя была сохранена во время анастомоза манжеты для поддержания трехмерной формы просвета сосудов. Этот раздел паренхимы печени был удален после завершения анастомоза. С этой модификации был пропущен шаг с участием размещение пребывания швы, тем самым еще больше сократить время анастомоза манжеты. Используя этот протокол крыса PLTx, уровень низкий ферментов печени, нетронутыми печени лобулярного архитектуры и высокую выживаемость были достигнуты после микрохирургии.
Introduction
В настоящее время существует большое расхождение между числом донорской печени органов и количество пациентов, ожидающих донорской печени. Нехватка органов, печени является глобальной проблемой. Чтобы расширить круг доноров, разделять трансплантации печени (LTx) и живого донора LTx были разработаны для использования частичного печени в качестве трансплантата1.
Для дальнейшего расследования механизм за частичное трансплантации печени (PLTx), соответствующих животных моделей были установленным2,3,4,5. В крыса PLTx печени долей являются резецированный в естественных условиях и ex vivo имитировать условия живого донора LTx и разделить LTx, соответственно, в человека. Статье, опубликованной в Журнале визуализировать эксперименты представил подробный протокол с участием 50% крыс с помощью ex vivo гепатектомии5PLTx. Однако крыса PLTx с гепатектомии в естественных условиях в визуализированных литературе еще не сообщалось.
Помимо различий между in vivo и ex vivo hepatectomies техника выполнения гепатектомии, сама также играет важную роль в определении результата PLTx. в настоящее время во многих хирургических исследованиях с использованием крыса PTLx модель, печени, которую мочки были резецируется после размещения простой перевязкой на ножке печени доли2,3,6,,78,9. Однако размещение простой перевязкой, прежде чем резекции подходит не для всех долей печени, как различных долей печени имеют различные формы и размеры. Простая перевязка на базе средней доли сопряжена с высоким риском причинения сужения верхней полой вены, который в конечном итоге может повлиять на отток частичной печени трансплантата10,11. Таким образом в области крыса PTLx требуется обновление гепатектомии метод, основанный на знании анатомии печени крыс.
В протоколе, описанные в данном исследовании обновленный гепатектомии судна ориентированный 70% был включен в процедуру крыса PLTx. Портал вен и печёночной артерии левого бокового лепестка (LLL) и средний лепесток (мл) были расчленены и разделили индивидуально до удаления паренхимы печени. Затем, пирсинг швы были лигируют печеночных вен LLL и мл. С помощью нескольких пирсинг швов и отдельными перешнуровок, а не размещение простой перевязкой, остатки пней мл был в состоянии распространить над верхней полой вены. Таким образом удалось избежать сужения верхней полой вены infrahepatic, вызванных хирургического лигирования. Кроме того непроходимость кровоснабжение LLL и ML, отдельными перешнуровок до удаления паренхимы печени снизилась интенсивность кровотечения в пень остатки печени, таким образом минимизируя влияние потери крови на эксперименты11.
Для микрохирургов она является важной задачей для восстановления надлежащего печеночной артерии (ФГА) печени трансплантата из-за крайне малого диаметра этого судна. Хотя вопрос о необходимости повторного arterialization в LTx действительно находится в стадии обсуждения12,13,14, многочисленные микрохирургические методы реконструкции печеночной артерии были предлагаемые14 . Здесь мы представляем Роман технику для повторного arterialization печени лоскута, который анастомозов общей печёночной артерии (CHA) расширенного PHA образом конец в бок. С помощью этого метода end-to-side, два печёночной артерии связаны с анастомоза большего диаметра. Чем больше диаметр анастомоза, легче рук сшивания — выполнить а чем больше становится улучшение проходимости анастомоза.
Protocol
Representative Results
Discussion
PLTx крыса-это сложные микрохирургическому процедура с программу обучения, которая является высокая стоимость и долго в продолжительность20. Исследователи помешало сложность крыса PLTx протокола с использованием этой модели на животных. По сравнению с полноразмерным крыса LTx…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это исследование было поддержано Национальный фонд естественных наук Китая (Грант № 81501382) и Чжэцзян провинции естественных наук фонд Китая (Грант № LQ13H100003 и LQ16H100002).
Materials
| Surgical microscope | Möller-Wedel, Germany | 654359 | |
| Light source | OSRAM (China) Lighting Co., Ltd | 64627 | |
| Isoflurane Vaporizer | MIDMARK Corporation | VIP3000 | |
| Isoflurane | Baxter Healthcare Corporation | 40032609 | For Inhalation anesthesia |
| Normal Saline | Zhejiang Tianrui Pharmaceutical Co., Ltd. | 716092103 | |
| Povidone Iodine Solution | HANGZHOU MINSHENG PHARMACEUTICAL | H33021567 | For disinfection |
| Hemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | J31020 | |
| Surgical scissors | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | JC2116 | |
| Needle-holder | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | J32030 | |
| Dressing Forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | J42020 | |
| Mosquito hemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | W40340 | For liver resection; For retracting the stay sutures. |
| Micro-scissors | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA1040 | |
| Micro needle-holder | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA2060 | |
| Curved micro typing forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA3061 | |
| straight micro typing forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA3060 | |
| Micro hemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA3020 | |
| Bulldog clamp | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | XEC350 | |
| Vessel clamps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | W40160 | |
| Micro Serrefine-curved | Fine Science Tools, Inc | 18055-05 | |
| Dacryosyrinx | Shi Zhuo medical instruments Co., Ltd. | 5# curve | Use as the curved needle for forcing out the air bubbles in the vascular lumen |
| Sterilized gauze swabs | Fuqing Health & Integral Medical | 20230R | |
| 5mL syringe | Zhejiang Yusheng Medical Instrument Co.,Ltd | 811932416 | |
| 18G needles | Shanghai Kindly Enterprise Development Group Co., Ltd | 01-014 | For fixing the upper abdomen wall |
| Intima II 22G intraveous catheter | Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. | 383207y | For making biliary stent; For infusing perfusate |
| 7-0 polypropylene sutures | Ningbo Medical Needle Co., Ltd | 151026 | For SHVC anastomsis |
| 6-0 silk suture | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd | 2650182 | For ligation |
| Culture dish (100mm) | Corning Incorporated | 430165 | used in back table for storage ice. The back table dish was placed on it. |
| Culture dish (30 mm) | Corning Incorporated | 3296 | As a vessel for organ preservation |
| Angiocath 12G intravenous catheter | Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. | 382277 | For making a IHVC cuff |
| Angiocath 14G intravenous catheter | Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. | 382269 | For making a PV cuff |
| Buprenorphine (hydrochloride) | Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Pharmaceutical Co., Ltd | H12020275 | For analgesic |
| Cefuroxime sodium for injection | Esseti FarmaceuticiS.r.l | H20160013 | As an antibiotics |
Referências
- Yan, J. Q., Becker, T., Peng, C. H., Li, H. W., Klempnauer, J. Split liver transplantation: a reliable approach to expand donor pool. Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 4, 339-344 (2005).
- Xia, R., Emond, J. C. Orthotopic partial liver transplantation in the rat: a model of 70% hepatectomy and reduced size liver transplantation. Transplantation. 56, 1041-1043 (1993).
- Omura, T., Ascher, N. L., Emond, J. C. Fifty-percent partial liver transplantation in the rat. Transplantation. 62, 292-293 (1996).
- Foss, A., et al. Function of reduced-size liver transplant in the rat. Res Exp Med (Berl). 197, 91-99 (1997).
- Nagai, K., Yagi, S., Uemoto, S., Tolba, R. H. Surgical procedures for a rat model of partial orthotopic liver transplantation with hepatic arterial reconstruction. J Vis Exp. , e4376 (2013).
- Sun, J., Qin, G., Wu, L., Wang, C., Sheil, A. G. Antigenic load and peripheral chimeric levels in entire and partial liver allograft recipients. Microsurgery. 21, 183-187 (2001).
- Ninomiya, M., et al. Deceleration of regenerative response improves the outcome of rat with massive hepatectomy. Am J Transplant. 10, 1580-1587 (2010).
- Yamanaka, K., et al. Effect of olprinone on liver microstructure in rat partial liver transplantation. J Surg Res. 183, 391-396 (2013).
- Wang, W., et al. Mesenchymal stem cells promote liver regeneration and prolong survival in small-for-size liver grafts: involvement of C-Jun N-terminal kinase, cyclin D1, and NF-kappaB. PLoS One. 9, e112532 (2014).
- Madrahimov, N., Dirsch, O., Broelsch, C., Dahmen, U. Marginal hepatectomy in the rat: from anatomy to surgery. Ann. Surg. 244, 89-98 (2006).
- Martins, P. N., Theruvath, T. P., Neuhaus, P. Rodent models of partial hepatectomies. Liver Int. 28, 3-11 (2008).
- Kamada, N., Sumimoto, R., Kaneda, K. The value of hepatic artery reconstruction as a technique in rat liver transplantation. Surgery. 111, 195-200 (1992).
- Steger, U., Sawitzki, B., Gassel, A. M., Gassel, H. J., Wood, K. J. Impact of hepatic rearterialization on reperfusion injury and outcome after mouse liver transplantation. Transplantation. 76, 327-332 (2003).
- Huang, H., et al. A novel end-to-side anastomosis technique for hepatic rearterialization in rat orthotopic liver transplantation to accommodate size mismatches between vessels. Eur Surg Res. 47, 53-62 (2011).
- Bernal, J., et al. Guidelines for rodent survival surgery. J.Invest Surg. 22, 445-451 (2009).
- Johnson, A. J., Stulting, R. D., Macsai, M. S. . Ophthalmic Microsurgical Suturing Techniques. , 21-28 (2007).
- Delriviere, L., et al. Detailed modified technique for safer harvesting and preparation of liver graft in the rat. Microsurgery. 17, 690-696 (1996).
- Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. Orthotopic liver transplantation in rats. J Vis Exp. , (2012).
- Delriviere, L., et al. Technical details for safer venous and biliary anastomoses for liver transplantation in the rat. Microsurgery. 18, 12-18 (1998).
- Jin, H., et al. Preliminary experience of a PDCA-cycle and quality management based training curriculum for rat liver transplantation. J Surg Res. 176, 409-422 (2012).
- Selzner, N., Selzner, M., Tian, Y., Kadry, Z., Clavien, P. A. Cold ischemia decreases liver regeneration after partial liver transplantation in the rat: A TNF-alpha/IL-6-dependent mechanism. Hepatology. 36, 812-818 (2002).
- Tanaka, H., Hashizume, K., Enosawa, S., Suzuki, S. Successful transplantation of a 20% partial liver graft in rats: a technical innovation. J Surg Res. 110, 409-412 (2003).
- Bockhorn, M., et al. Erythropoietin treatment improves liver regeneration and survival in rat models of extended liver resection and living donor liver transplantation. Transplantation. 86, 1578-1585 (2008).
- Martins, P. N., Neuhaus, P. Surgical anatomy of the liver, hepatic vasculature and bile ducts in the rat. Liver Int. 27, 384-392 (2007).
- Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28, 47-50 (1979).
- Kashfi, A., et al. A review of various techniques of orthotopic liver transplantation in the rat. Transplant.Proc. 37, 185-188 (2005).
- Wain, R. A. J., Hammond, D., McPhillips, M., Whitty, J. P. M., Ahmed, W., Ahmed, W., Jackson, M. J. . Surgical Tools and Medical Devices. , 545-562 (2016).
- Huang, H., et al. Hepatic arterial perfusion is essential for the spontaneous recovery from focal hepatic venous outflow obstruction in rats. Am J Transplant. 11, 2342-2352 (2011).
- Czigany, Z., et al. Improving Research Practice in Rat Orthotopic and Partial Orthotopic Liver Transplantation: A Review, Recommendation, and Publication Guide. Eur Surg Res. 55, 119-138 (2015).
