إصابة القائم على البالون لحمل ميوينتيمال تضخم في الشريان الاورطي البطني الماوس
Summary
يوضح هذا المقال نموذج مورين لدراسة وضع تضخم ميوينتيمال (MH) بعد إصابة البالون الابهري.
Abstract
من الضروري استخدام نماذج حيوانية لفهم أفضل لمتولي حسن، أحد الأسباب الرئيسية لتضيق الشرايين. في هذه المقالة، نبدي نموذج تعرية بالون مورين، وقابلة للمقارنة مع نماذج إصابة السفينة الراسخة في الحيوانات الكبيرة. نموذج تعرية الشريان الاورطي بالقسطرة البالونية يقلد الإعداد السريرية، ويؤدي إلى تغييرات مماثلة في باثوبيولوجيكال والفسيولوجية. بإيجاز، بعد إجراء شق أفقي في أبدوميناليس الشريان الاورطي، قسطرة بالون سيتم إدراجها في السفينة، وتضخم، وعرض ريتروجراديلي. تضخم البالون سيؤدي إلى إصابة البطانية والذي من السفينة. بعد إزالة القسطرة، سيتم إغلاق شق الابهري مع غرز واحد. النموذج الموضح في هذه المقالة استنساخه، من السهل القيام به، ويمكن أن تنشأ بسرعة وبشكل موثوق. ومناسبة خاصة لتقييم تكلفة العوامل العلاجية التجريبية، التي يمكن تطبيقها بطريقة اقتصادية. باستخدام الماوس خروج المغلوب سلالات مختلفة، يمكن تقييم تأثير جينات مختلفة في التنمية MH.
Introduction
وقد تضيق الشرايين في الشرايين التاجية والطرفية لها أثر كبير على معدلات الاعتلال والوفيات بين المرضى1. هو إحدى الآليات المرضية الكامنة وراء تضخم ميوينتيما (MH)، التي تتسم بزيادة الانتشار والهجرة وتوليف البروتين المصفوفة خارج الخلية من الخلايا (SMC) العضلات الملساء والأوعية الدموية2. SMC تقع في طبقة وسائط الإعلام من السفينة وتهاجر إلى التحفيز على سطح التجويف. وتشمل عوامل النمو، السيتوكينات، وخلية خلية الاتصال، الدهون، عناصر المصفوفة خارج الخلية، والقص الميكانيكية إشارات محفزة وتمتد القوات3،4،،من56. الإصابات الناجمة عن الجدار السفينة، مرضية أو علاجية المنشأ، تتسبب الخلايا البطانية وتلف الخلايا العضلية الملساء وتحفيز ردود الفعل الملتهبة، ويؤدي بالتالي إلى MH7.
نماذج حيوانية مختلفة متاحة حاليا لدراسة إصابات الشرايين وتضخم ميوينتيما. الحيوانات الكبيرة مثل الخنازير أو الكلاب لديها ميزة مشاركة الشريان مماثلة وتشريح الشرايين التاجية مع البشر، وهي مناسبة خاصة للتحقيق في أساليب وإجراءات وأجهزة قسطرة8دراسات. بيد النماذج خنزير يكون العيب من أعلى ثرومبوجينيسيتي9،10، بينما الكلاب لا تملك إلا استجابة معتدل للسفينة إصابة11. وبالإضافة إلى ذلك، تتطلب كافة نماذج حيوانية كبيرة المساكن الخاصة والمعدات والموظفين، التي ترتبط بارتفاع التكاليف ولا تتوفر دائماً في مؤسسة. وتشمل نماذج حيوانية صغيرة الجرذان والفئران. مقارنة بالجرذان، الفئران لها مزايا انخفاض التكلفة ووجود مجموعة متنوعة من ضرب نماذج. يمكن أن يكون النموذج المبين في هذا الفيديو جنبا إلى جنب مع الذين-/–الفئران التي تتغذى على اتباع نظام غذائي غربي لتقليد عن كثب وضع قسطرة في سفن تصلب الشرايين12السريرية. النماذج السابقة الناجمة عن إصابة الأوعية الدموية عبر أسلاك إصابة13أو جفاف السوائل14، ربيع15أو الكفة إصابة16. نظراً لطبيعة الضرر الذي سوف تؤثر بشكل كبير على التنمية والدستور من MH، استخدام قسطرة بالون للحث على إصابة السفينة هو أفضل طريقة لمحاكاة الإعداد السريرية.
في هذا المقال يصف لنا طريقة جديدة لحمل MH مع قسطرة بالون في الفئران. يسمح استخدام قسطرة البالون (1.2 مم × 6 مم) مع منفذ RX (الشكل 1A) كشط طبقة إينتيمال، وفي الوقت نفسه، تحريض الذي السفينة. كل من هذه العوامل مشغلات هامة لتطوير MH. وقت الملاحظة لهذا النموذج هو17من 28 يوما.
Protocol
Representative Results
Discussion
هذا المقال يوضح نموذج مورين لدراسة وضع تضخم ميوينتيمال ويتيح استكشاف العمليات المرضية الكامنة، واختبار أدوية جديدة أو الخيارات العلاجية.
أن الخطوة الأكثر أهمية في هذا البروتوكول هو تعرية للشريان الاورطي. ينبغي إيلاء عناية خاصة أثناء هذه الخطوة تعرية المفرط يؤدي إلى تشكيل…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
يشكر المؤلفون بهرمان كريستيان للمساعدة التقنية لها.
وأيد جاف مؤسسة القاضي ماكس. T.D. تلقي المنح من مؤسسة كرنر آخر (2012_EKES.04) والألمانية الأوقيانوغرافية (DE2133/2-1_. س. س. وتلقى المنح البحثية من الأوقيانوغرافية الألمانية (DFG؛ SCHR992/3-1، SCHR992/4-1).
Materials
| 10-0 Ethilon suture | Ethicon | 2814G | |
| 3 mL Syringe | BD Medical | 309658 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| 5-0 prolene suture | Ethicon | EH7229H | |
| 6-0 prolene suture | Ethicon | 8706H | |
| Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Trichrome staining |
| Antigen retrieval solution | Dako | S1699 | |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Trichrome staining |
| Bepanthen Eye and Nose ointment | Bayer | 1578675 | Eye ointment |
| Betadine Solution | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| C57BL/6J | Charles River | Stock number 000664 | |
| Clamp applicator | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| Collagen 3 | abcam | ab7778 | Antibody |
| DAPI | Thermo Fischer | D1306 | |
| Donkey anti-Goat IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | Secondary antibody |
| Ethanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Ethanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| Ethanol absolute | Th. Geyer | 2246 | |
| FAP | abcam | ab28246 | Antibody |
| Forceps fine | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Forceps standard | Fine Science Tools | 11023-10 | |
| Glacial Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| Hair clipper | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Heparin | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 I.E./mL |
| High temperature cautery kit | Bovie | 18010-00 | |
| Image-iT FX Signal Enhancer | Invitrogen | I36933 | Blocking solution |
| Light Green SF | Waldeck | 1B-211 | Trichrome staining |
| Microsurgical clamp | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine – 4mm |
| MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange | Abbott | 1012268-06U | |
| Molybdatophosphoric acid hydrate | Merck | 1.00532.0100 | Trichrome staining |
| NaCl 0,9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
| Needle holder | Fine Science Tools | 12075-14 | |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome staining |
| Paraffin | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
| PFA 4% | Electron Microscopy Sciences | #157135S | |
| Ponceau S solution | Serva Electrophoresis | 33427 | Trichrome staining |
| Primary antibody diluent | Dako | S3022 | |
| Prolong Gold Mounting solution | Thermo Fischer | P36930 | Mounting solution for immunofluorescence stained slides |
| Replaceable Fine Tip | Bovie | H101 | |
| Resorcin-Fuchsin Weigert | Waldeck | 2E-30 | Trichrome staining |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
| Scissors | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| Scissors Vannas-style | Fine Science Tools | 15000-03 | |
| Secondary antibody diluent | Dako | S0809 | |
| Fast acting Adhesive MINIS 3x1g | UHU | 45370 | Cyanoacrylate |
| Slide Rack | Ted Pella | 21057 | |
| SM22 | abcam | ab10135 | Antibody |
| SMA | abcam | ab21027 | Antibody |
| Staining dish | Ted Pella | 21075 | |
| Surgical microscope | Leica | M651 | |
| Tabotamp fibrillar | Ethicon | 431962 | Absorbable hemostat |
| Transpore Surgical Tape | 3M | 1527-1 | |
| U-100 Insulin syringe | BD Medical | 324825 | |
| Vessel Dilator | Fine Science Tools | 18603-14 | |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Weigerts iron hematoxylin Kit | Merck | 1.15973.0002 | Trichrome staining |
| Xylene | Th. Geyer | 3410 |
Referências
- Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).
- Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. Intimal proliferation of smooth muscle cells as an explanation for recurrent coronary artery stenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty. J Am Coll Cardiol. 6 (2), 369-375 (1985).
- Greenwald, S. E., Berry, C. L. Improving vascular grafts: the importance of mechanical and haemodynamic properties. J Pathol. 190 (3), 292-299 (2000).
- Majesky, M. W., Schwartz, S. M. Smooth muscle diversity in arterial wound repair. Toxicol Pathol. 18 (4 Pt 1), 554-559 (1990).
- Owens, G. K. Regulation of differentiation of vascular smooth muscle cells. Physiol Rev. 75 (3), 487-517 (1995).
- Owens, G. K., Kumar, M. S., Wamhoff, B. R. Molecular regulation of vascular smooth muscle cell differentiation in development and disease. Physiol Rev. 84 (3), 767-801 (2004).
- Kleemann, R., Zadelaar, S., Kooistra, T. Cytokines and atherosclerosis: a comprehensive review of studies in mice. Cardiovasc Res. 79 (3), 360-376 (2008).
- Karas, S. P., et al. Coronary intimal proliferation after balloon injury and stenting in swine: an animal model of restenosis. J Am Coll Cardiol. 20 (2), 467-474 (1992).
- Ip, J. H., et al. The role of platelets, thrombin and hyperplasia in restenosis after coronary angioplasty. J Am Coll Cardiol. 17 (6 Suppl B), 77B-88B (1991).
- Mason, R. G., Read, M. S. Some species differences in fibrinolysis and blood coagulation. J Biomed Mater Res. 5 (1), 121-128 (1971).
- Lafont, A., Faxon, D. Why do animal models of post-angioplasty restenosis sometimes poorly predict the outcome of clinical trials?. Cardiovasc Res. 39 (1), 50-59 (1998).
- Matter, C. M., et al. Increased balloon-induced inflammation, proliferation, and neointima formation in apolipoprotein E (ApoE) knockout mice. Stroke. 37 (10), 2625-2632 (2006).
- Lindner, V., Fingerle, J., Reidy, M. A. Mouse model of arterial injury. Circ Res. 73 (5), 792-796 (1993).
- Simon, D. I., et al. Decreased neointimal formation in Mac-1(-/-) mice reveals a role for inflammation in vascular repair after angioplasty. J Clin Invest. 105 (3), 293-300 (2000).
- Sata, M., et al. A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia. J Mol Cell Cardiol. 32 (11), 2097-2104 (2000).
- Moroi, M., et al. Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice. J Clin Invest. 101 (6), 1225-1232 (1998).
- Painter, T. A. Myointimal hyperplasia: pathogenesis and implications. 2. Animal injury models and mechanical factors. Artif Organs. 15 (2), 103-118 (1991).
- Stubbendorff, M., et al. Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models. J Vis Exp. (87), e51459 (2014).
- Deuse, T., et al. Dichloroacetate prevents restenosis in preclinical animal models of vessel injury. Nature. 509 (7502), 641-644 (2014).
