Um protocolo para Decellularizing Cochleae Mouse para engenharia de tecidos do ouvido interno

Christopher A. Neal; Jennifer G. Nelson-Brantley; Michael S. Detamore; Hinrich Staecker; Adam J. Mellott

doi:10.3791/56523

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Artigo de método

Um protocolo para Decellularizing Cochleae Mouse para engenharia de tecidos do ouvido interno

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DOI:

10.3791/56523

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1 de janeiro de 2018

Christopher A. Neal¹ , Jennifer G. Nelson-Brantley¹ , Michael S. Detamore² , Hinrich Staecker¹ , Adam J. Mellott³

¹Department of Otolaryngology, University of Kansas Medical Center, ²Stephenson School of Biomedical Engineering, University of Oklahoma, ³Department of Plastic Surgery, University of Kansas Medical Center

Neste artigo

Resumo

O objetivo do presente protocolo é demonstrar um método eficaz para decellularize e descalcificar cochleae rato para utilização como andaimes para aplicações de engenharia de tecidos.

Resumo

Nos mamíferos, mechanosensory células ciliadas que facilitam a falta de audiência a capacidade de regenerar, que limitou a tratamentos para perda auditiva. Estratégias atuais de medicina regenerativa concentraram-se no transplante de células-tronco ou manipulação genética de em torno de células de suporte na orelha interna para incentivar a substituição de células-tronco danificadas para corrigir a perda de audição. Ainda, a matriz extracelular (ECM) pode desempenhar um papel fundamental na indução e manutenção da função das células de cabelo e não tem sido suficientemente estudada. Usando o coclear ECM como um andaime para cultivar células-tronco adultas pode fornecer insights exclusivos sobre como a composição e arquitetura do ambiente extracelular aids células em sustentar a função auditiva. Aqui nós apresentamos um método para isolar e decellularizing cochleae de ratos para usar como andaimes aceitando perfundidas células-tronco adultas. O protocolo atual, cochleae são isolados da eutanásia de ratos, decellularized e descalcificadas. Depois, células de geleia humana da Wharton (hWJCs) que foram isoladas a partir do cordão umbilical foram cuidadosamente pintadas em cada cóclea. Os cochleae foram usados como biorreatores, e as células foram cultivadas por 30 dias antes de sofrer a transformação para análise. Decellularized cochleae mantidos identificáveis estruturas extracelulares, mas não revelou a presença de células ou fragmentos visíveis de DNA. Células perfundidas na cóclea invadiram a maior parte do interior e exterior da cóclea e cresceram sem incidentes em uma duração de 30 dias. Assim, o método atual pode ser usado para estudar como coclear ECM afeta células desenvolvimento e comportamento.

Introdução

A cóclea é uma estrutura espiral intrincado encontrada no osso temporal. Ele é composto de um labirinto ósseo exterior e interior, concêntricos labirinto membranoso¹. O labirinto membranoso é composto por três espaços fluidos: Scala vestibuli, Scala Scala tympani¹e mídia. A mídia scala abriga o epitélio sensorial, que é composto de uma infinidade de tipos de células, mas as células sensoriais de cabelo (HC), que transduce energia mecânica em ondas sonoras para impulsos nervosos², são de particular interesse. Exposição ao trauma acústico³^,⁴....