פרוטוקול הבאים מתמקד הקמת תרבות העיקרי של סרקומה של רקמות רכות, נגזר החולה (STS). מודל זה יכול לעזור לנו להבין טוב יותר את רקע מולקולרי ופרופיל תרופתי של ממאירות נדירים אלה, שעשוי לייצג נקודת התחלה עבור מחקרי המשך שמטרתם לשפר את ניהול STS.
סרקומות של רקמות רכות (STS) מייצגים קשת של ממאירות הטרוגנית עם האבחנה קשה, סיווג, ניהול. עד כה, זוהו יותר מ-50 סוגי היסטולוגית של אלו גידולים נדירים מוצק. לכן, בשל מגוון עצום שלהם שכיחות נמוכה, ההבנה שלנו של הביולוגיה של גידולים אלה הוא עדיין מוגבל. החולה-derived תרבויות מייצגים הפלטפורמה האידיאלית ללמוד פתופסיולוגיה STS ו פרמקולוגיה. לכן פיתחנו מודל פרה האנושי של STS החל מדגימות הגידול שנקטפו חולים שעברו כריתה כירורגית. תרביות תאים STS נגזר המטופל המתקבל דגימות כירורגי על ידי collagenase עיכול, מבודדת על ידי סינון. תאים היו נספרים, נזרע, השאירו למשך 14 ימים בתרבויות טפט רגיל, ואז שעובדו על-ידי ניתוח במורד הזרם. לפני ביצוע ניתוחים מולקולריים או תרופות, אושרה הקמת תרבויות העיקרי STS דרך ההערכה של תכונות cytomorphologic, כאשר היא זמינה, סמנים immunohistochemical. שיטה זו מייצגת כלי שימושי 1) ללמוד את ההיסטוריה הטבעית של ממאירות לקוי בחנו אלה ו 2) כדי לבחון את ההשפעה של תרופות שונות במאמץ כדי ללמוד עוד אודות מנגנוני הפעולה שלהם.
סרקומות של רקמות רכות (STS) כוללים קשת של נגעים הטרוגנית של המקור mesenchymal חשבונאות 1% של גידולים מוצקים כל1,2, סיווג חדש ארגון הבריאות העולמי מזהה הנוכחות של יותר מ 50 תת שונים3. בקרב אלו, histotypes הנפוצות ביותר הן adipocyte סרקומה או liposarcoma leiomyosarcoma, והיוו 15% ו- 11% של כל הבוגרים STS, בהתאמה4,5. למרות STS יכולים לפתח בחלקים שונים של הגוף, הגפיים ואת מקבץ הם האתרים הנפוצים ביותר, המתרחשים 60% ו-20% מהמקרים, בהתאמה6.
אבן הפינה של הטיפול למחלה מקומית היא כריתה כירורגית רחבה, בעוד היתרונות של טיפול כימותרפי אדג’וונט ו neoadjuvant עדיין אינם ברורים והם נחשבים רק במקרים נבחרים7. בהגדרה גרורתי, טיפול כימותרפי סטנדרטי של טיפול אבל מראה תוצאות מוגבלות8. הבנה טובה יותר של הביולוגיה המולקולרית של STS יעזור לשפר את האבחנה המבדלת הנוכחי, למטב את הטיפולים, ולזהות יעדים חדשים לטיפול.
בהקשר זה, בוצע מחקר לתוך סרטן במשך שנים רבות באמצעות תא מונצחים קווים9. מודלים ניסיוניים אלה הם בדרך כלל תרבותי ב טפט סטנדרטי תומך או מושתל לתוך מכרסמים immunodeficient להקים ויוו xenograft מודלים10. שורות תאים מונצחים מייצגים חומר לניהול, קל-אל-חנות שבה ניתן לבצע מספר מספיק של מחקרים. הם, למעשה, לפחות יקר, בשימוש נרחב ביותר כלי לימודי פרה11.
עם זאת, תא-קו המבוסס על סרטן הדגמים גם יש כמה מגבלות, למשל ממושך תרבות במערכת חד שכבתי עם מספר גדל והולך של מעברים מעניקה פנוטיפי, סחף גנטי, יצירת תאים פחות סביר כדי לסכם הגידול מפתח תכונות. יתר על כן, תרביות תאים קו להיכשל לשחזר את האינטראקציה לתא ואת crosstalk מולקולת איתות לחקות את התנהגות ביולוגית של גידולים, לאפיין את microenvironment הגידול. נושאים אלה מהווים את הבסיס של הפער הקיים בין תוצאות קליניות12.
לאור האמור לעיל, הריבית בתרבויות העיקרי נגזר החולה גדל13. אכן, הכריתה של רקמות ממאירות ונורמלי מפחיתה את הסיכון לאבד סרטן התא פנוטיפ והטרוגניות, ובכך מציע חומר המוצא זה נציג נוסף של microenvironment הגידול. יתר על כן, השימוש של דגימות הגידול טריים שנקטפו חולים שעברו כריתה כירורגית מאפשרת לנו לחקור גידולים יחיד וכדי להשוות נגעים שונים מאותו חלק של הגוף של המטופל14. מהסיבות הנ ל, תרביות תאים רקמות-derived לספק חומר יקר ללמוד הגידול פתופסיולוגיה ו פרמקולוגיה15,16,17, בפרט STS אילו שורות תאים סרקומה זמינים מסחרית זה מוגבל18 אנחנו ובכך אופטימיזציה שיטה להקים נגזר החולה STS התא הראשי תרבות החל בניתוח נכרת גידול רקמות13,19,20. השיטה שלנו מורכב disaggregating הדגימה הגידול לחלקים קטנים רקמות ואחריו דיסוציאציה רקמות אנזימטי לילה כדי לקבל השעיה תא בודד. למחרת, עיכול אנזימטי מופסקת על-ידי הוספת מדיה תרבות טריים, ההשעיה שהושג מסונן כדי להסיר שברי רקמת, תא-אגרגטים, ואת החומר מטריקס עודף או פסולת. לבסוף, שבריר של תאים סרטניים מבודד הוא cytospinned על גבי זכוכית שקופיות, קבוע ומאוחסן לניתוח במורד הזרם, שמטרתם לאשר הקמת תרבות ראשי STS מאת cytomorphological, immunohistochemical והערכה cytogenetic מולקולרית (למשל דגים ניתוח של הגברה MDM2 מייצג את האבחנה המבדלת סטנדרטית של liposarcoma היטב הבדיל, את liposarcoma dedifferentiated) 4. התאים הנותרים הם נזרע בתרבות טפט רגיל עבור ג’ין ביטוי מחקרים פרופיל תרופתי. כל הניסויים מתבצעים באמצעות נמוך המעבר תרבויות הראשי כדי למנוע את מבחר subclones סרטן ספציפיים, נותחו על ידי פתולוג מנוסה סרקומה. לכן יצרנו אנושית לחלוטין STS לשעבר-vivo דגם13,19,20. זה רב תכליתי, קל ידית דגם יכול לייצג כלי שימושי עבור סוגים שונים של מחקר פרה, למשל כדי לזהות סמנים מולקולריים חדשים עבור האבחנה והפרוגנוזה או כדי להרוויח הבנה עמוקה יותר של הפעילות ואת מנגנוני פעולה של סמים חדשים ואיכותיים המשמשים את הניהול של STS.
במודלים פרה מוגדרת היטב יש צורך להבהיר את הרקע מולקולרית של גידולים, לנבא פרוגנוזה ולפתח אסטרטגיות טיפוליות חדשות לחולי סרטן. זה חשוב במיוחד עבור גידולים נדירים כגון STS של מי הטרוגניות גבוה במונחים של מורפולוגיה, התנהגות תוקפנית פוטנציאליים, ומחקרים קליניים אתגרים ההבנה שלנו של STS ביולוג?…
The authors have nothing to disclose.
המחברים רוצה להודות Gráinne טירני לסיוע העריכה.
DMEM High Glucose | EuroClone | ECB7501L | |
Fetal bovine serum | EuroClone | ECS0180D | |
Glutamine | Gibco | 25030-024 | |
Paraformaldehyde 4% aqueous solution, EM grade | Electron Microscopy Sciences | 157-4-100 | |
Penicillin streptomycin | Gibco | 15140122 | |
Triazol reagent | Ambion Life-Technologies | 15596018 | |
Trypsin | EuroClone | ECB3052D |