患者由来の軟部肉腫の主な文化の確立
Summary
次のプロトコルは、患者由来の軟部肉腫 (STS) の主要な文化の確立に焦点を当てください。このモデルでは、分子の背景、これらのまれな悪性腫瘍の薬理学的プロファイルを理解する私たちを助けることができる、STS 管理の改善に向けたさらなる研究のための開始点を表すことができます。
Abstract
軟部組織肉腫 (STS) は、異種悪性腫瘍診断が困難、分類、および管理とのスペクトルを表します。日には、これらのまれな腫瘍の 50 以上の組織学的サブタイプが同定されています。したがって、彼らの驚くべき多様性と発生率が低いため、これらの腫瘍の生物学の私達の理解はまだ限られています。患者由来の文化は、STS の病態と薬理学の研究に理想的なプラットフォームを表します。このように外科的切除を受けた患者から収穫される腫瘍の標本から STS の人間前臨床モデルを作成しました。患者由来 STS 細胞培養は、コラゲナーゼの消化力によって摘出標本から得られ、濾過によって分離します。セルがカウント、シードしの標準的な単層培養 14 日間左し、下流の分析によって処理されます。細胞機能と、利用可能な場合の評価を通じて確認した STS 初代培養の確立医薬や分子の解析を実行する前に免疫組織化学的マーカー。このメソッドは、これらの不十分な検討悪性腫瘍の自然史を勉強するには 1) と 2) の作用メカニズム詳細については努力でさまざまな薬物の効果をテストするための便利なツールを表します。
Introduction
軟部組織肉腫 (STS) は、間葉系由来会計すべて固形腫瘍1,2, 1% の異機種混在病変のスペクトルと新しい世界保健機関の分類は 50 以上の存在を認識しサブタイプが異なる3。これらのうち、最も一般的な histotypes、脂肪肉腫や脂肪肉腫、平滑筋肉腫、15% とすべてアダルト STS、それぞれ4、5の 11% を占めます。STS は、体のさまざまな部分で成長できる、四肢と後腹膜が 60% とそれぞれ6の場合の 20% で発生する、最も一般的なサイトです。
ローカライズされた疾患の治療の基礎は広範囲の外科的切除、術前・術後の化学療法の利点がまだ明確でないと選択された場合は7にのみと見なされます。転移性の設定では、化学療法の標準治療が限られた結果8に示します。STS の分子生物学のよりよい理解は、現在の差動診断を改善、利用可能な治療の最適化、および療法のための新しいターゲットを識別に役立つでしょう。
このコンテキスト内で不死化細胞ライン9を使用して長年にわたって癌の研究を行った。これらの実験モデルは通常標準的な単分子膜サポートで培養または、生体内で異種移植モデル10を確立する免疫不全齧歯動物に注入します。不死化細胞株は、研究実験の十分な数を行うことができます管理およびストア簡単材料を表します。彼らは、実際には、少なくとも高価な最も広く臨床研究11でツールを使用します。
ただし、セルライン基づく癌モデルもいくつかの制限があります、例えば延長通路数の増加とともに単分子膜における文化誘導表現型、遺伝的浮動作る細胞ほどキーとなる癌を要約するには機能。さらに、ライン培養細胞は、細胞間相互作用やシグナル伝達の分子クロストーク腫瘍の生物学的挙動を模倣し、がん微小環境の特徴を再現する失敗します。これらの問題は、既存の前臨床および臨床結果12の間のギャップの基礎を形成します。
上記を考えると、患者由来の主な文化への興味は13に増加しています。確かに、癌と正常組織の切除は癌細胞の表現型とより腫瘍微小環境の代表は、原料をご提供の不均一性を失うことのリスクを軽減します。また、外科的切除を受けた患者から収穫される新鮮な腫瘍の標本の使用は、単一の腫瘍を調べると患者の体14の同じ部分から異なる病変を比較する私たちできます。上記の理由から、組織由来細胞培養腫瘍病態と薬理学15,16,17, 特にどの市販肉腫細胞株における STS の研究に貴重な資料を提供します。限定18です。我々 はこのため手術時摘出腫瘍組織13,19,20から始まって患者由来 STS 一次電池文化を確立する方法を最適化しました。本手法は、腫瘍標本を単一細胞懸濁液を取得する一晩の酵素組織解離に続いて小さな組織片に分解ので構成されます。次の日は新鮮な培地を追加することで酵素消化を停止し、得られた懸濁液を抽出し、組織片、細胞凝集塊と余分なマトリックス材料やゴミを取り除きます。最後に、孤立した腫瘍細胞の割合はスライド ガラス固定し、細胞形態学的、免疫組織化学、分子細胞遺伝学的評価による STS の主な文化の確立を目的と下流の分析のため保存に cytospinned(例えば魚における MDM2 増幅は高分化型脂肪肉腫と dedifferentiated の脂肪肉腫の標準的な鑑別診断を表します)4します。 残りの細胞は遺伝子発現プロファイリングと薬理学的研究のための標準的な単層培養に播かれます。低い使用して、実験を行いすべては通路の初代培養特異的ながんのサブクローンの選択を避けるために、経験豊富な肉腫の病理学者によって分析しました。このように完全に人間 STS ex vivoモデル13,19,20を作成しました。この汎用性の高い、簡単にハンドル モデルは異なったタイプの臨床研究など診断と予後のための新しい分子マーカーを識別するかのメカニズムと活動をより深く理解するための便利なツールを表すことができます。STS の管理で使用される標準および新しい薬剤のアクション。
Protocol
Representative Results
Discussion
よく定義された臨床前モデルは、腫瘍の分子の背景を解明、予後不良を予測して癌に対する新しい治療戦略の開発に必要です。これは特に STS などのまれな腫瘍の重要な形態の面でその高い異質性、攻撃的な潜在的なおよび臨床的行動課題 STS 生物学および患者管理21の私達の理解。さらに、利用可能ないくつかの商業肉腫細胞株は、間葉系腫瘍18のこのグ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は、編集者の支援のため Gráinne ティアニーを感謝したいです。
Materials
| DMEM High Glucose | EuroClone | ECB7501L | |
| Fetal bovine serum | EuroClone | ECS0180D | |
| Glutamine | Gibco | 25030-024 | |
| Paraformaldehyde 4% aqueous solution, EM grade | Electron Microscopy Sciences | 157-4-100 | |
| Penicillin streptomycin | Gibco | 15140122 | |
| Triazol reagent | Ambion Life-Technologies | 15596018 | |
| Trypsin | EuroClone | ECB3052D |
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