Hasta elde edilen yumuşak doku sarkomu birincil kültürünün kurulması
Summary
Aşağıdaki iletişim kuralı hasta elde edilen yumuşak doku sarkomu (STS) birincil kültürünün kurulması üzerinde duruluyor. Bu model bize moleküler arka plan ve bu nadir maligniteler farmakolojik profil daha iyi anlamak için yardımcı ve daha fazla STS yönetimi iyileştirme amaçlı araştırma için bir başlangıç noktası temsil edebilir.
Abstract
Yumuşak doku sarkomları (STS) heterojen maligniteler zor tanı, sınıflandırma ve yönetimi ile bir spektrum temsil eder. Bugüne kadar 50’den fazla histolojik alt türlerinden bu nadir solid tümör tespit edilmiştir. Böylece, onların olağanüstü çeşitlilik ve düşük insidansı nedeniyle, bu tümörlerin biyoloji anlayışımız hala sınırlıdır. Hasta kaynaklı kültürler STS patofizyolojisi ve Farmakoloji eğitim için ideal bir platform temsil eder. Böylece tümör numuneler cerrahi rezeksiyon uygulanan hastalardan hasat itibaren STS insan preklinik modeli geliştirdik. STS hücre kültürleri hasta türetilmiş cerrahi numuneler collagenase sindirim tarafından elde edilen ve filtrasyon tarafından izole. Hücreleri sayılır, tohumlari ve 14 gün içinde standart monolayer kültürler için yaptı ve ardından aşağı akım analizi ile. Moleküler veya ilaç analizleri gerçekleştirmeden önce STS birincil kültürler kurulması ile cytomorphologic özellikleri ve, ne zaman elde edilebilir, değerlendirme doğrulandı immunohistokimyasal işaretleri. Bu yöntem 1) bu kötü keşfedilmeyi maligniteler Doğal Tarih çalışmaya ve 2) bir çaba daha fazla eylem mekanizmaları hakkında bilgi edinmek için farklı ilaçlar etkilerini sınamak için yararlı bir araç temsil eder.
Introduction
Yumuşak doku sarkomları (STS) bir spektrum Mezenkimal kökenli muhasebe bütün solid tümör1,%21’için türdeş olmayan lezyonların içerir ve Yeni Dünya Sağlık Örgütü sınıflandırma 50’den fazla varlığı tanır farklı alt türlerinden3. Bunlar arasında en yaygın histotypes adipocyte sarkomu veya Liposarkom ve Leyomiyosarkom, % 15 ve tüm yetişkin STS, sırasıyla4,%511’i için muhasebe vardır. STS-ebilmek gelişmek vücudun farklı bölgelerinde de, ekstremitelerde ve retroperitoneum % 60 ve % 20 olgunun, sırasıyla6meydana gelen en yaygın siteleri vardır.
Adjuvan ve neoadjuvan kemoterapi faydaları hala pek açık değildir ve yalnızca seçili durumda7‘ olarak kabul edilir ise lokalize hastalığın tedavisinin geniş cerrahi rezeksiyon, temel taşıdır. Metastatik ortamda kemoterapi standart tedavi ama sınırlı sonuçlar8gösterir. STS moleküler biyoloji daha iyi bir anlayış geçerli ayırıcı tanı geliştirmek, mevcut uygulamaları en iyi duruma getirmek ve tedavisi için yeni hedefler belirlemek için yardımcı olacaktır.
Bu bağlamda, kanser araştırması ölümsüzleştirdi hücre hatları9kullanarak uzun yıllar sahne aldı. Bu deneysel modeller normalde standart monolayer destekler kültürlü veya10 in vivo xenograft modeller kurmak için immünyetmezligi kemirgen implante. Ölümsüzleştirdi hücre hatları ile araştırma deneyler yeterli sayıda gerçekleştirileceği bir yönetilebilir ve mağaza kolay malzeme temsil eder. Onlar, aslında, en ucuz ve en çok kullanılan aracı preklinik çalışmalar11‘.
Ancak, hücre bulundurarak kanser modelleri de bazı sınırlamalar var, uzun süreli örneğin pasajlar sayısının artmasıyla birlikte monolayer sistem kültüründe fenotipik indükler ve genetik sürüklenme, hücreleri yapımı daha az muhtemel anahtar tümör özetlemek için özellikleri. Ayrıca, hücre satırı kültürleri hücre hücre etkileşim ve tümörlerin biyolojik davranışını taklit ve tümör microenvironment karakterize sinyal molekülü crosstalk çoğaltmak başarısız. Bu sorunlar preklinik ve klinik sonuçları12arasında varolan boşluğu oluşturmaktadır.
Yukarıda bahsedildiği, birincil kültürler hasta kaynaklı ilgi13artmıştır. Nitekim, kötü huylu ve normal doku eksizyon kanser hücre fenotip ve heterojenlik, böylece daha fazla temsilcisi tümör microenvironment, başlangıç materyali sunan kaybetme riskini azaltır. Ayrıca, cerrahi rezeksiyon uygulanan hastalardan hasat taze tümör örnekler kullanımı tek tümörler araştırmak ve bir hastanın vücut14aynı kısmından farklı lezyonlar karşılaştırmak için bize sağlar. Yukarıdaki nedenlerden dolayı doku kaynaklı hücre kültürleri tümör patofizyolojisi ve Farmakoloji15,16,17, özellikle’STS hangi ticari olarak mevcut sarkomu hücre hatlarında çalışmaya değerli bir malzeme sağlar. sınırlı18‘ dir. Biz böylece en iyi duruma getirilmiş hasta kaynaklı STS birincil hücre kültürü cerrahi olarak eksize tümör doku13,19,20ila başlayan bir yöntem. Bizim yöntem bir tek hücre süspansiyon elde etmek için gece enzimatik doku ayrılma tarafından takip küçük doku parçaları içine tümör numune disaggregating oluşur. Ertesi gün, Enzimatik sindirim taze kültür medya ekleyerek durdurulur ve elde edilen süspansiyon doku parçaları, hücre-toplamları ve aşırı matris malzeme veya enkaz kaldırmak için filtre uygulanır. Son olarak, bir izole tümör hücreleri cytospinned cam slayda, sabit ve STS birincil kültür kurulması onaylayan cytomorphological, immunohistokimyasal ve Moleküler Sitogenetik değerlendirme amaçlı aşağı akım analizi için depolanan bölümüdür (örneğin balık analizi ile MDM2 amplifikasyon temsil eden standart ayırıcı tanı için iyi farklılaşmış Liposarkom ve dediferansiye Liposarkom) 4. kalan hücrelerin gen ifade profil oluşturma ve farmakolojik çalışmalar için bir standart monolayer kültür içine tohumlari. Tüm deneyler düşük kullanarak gerçekleştirilen belirli kanser subclones seçim önlemek için birincil kültürlerin geçiş ve deneyimli sarkomu patolog tarafından analiz. Biz böylece tamamen insan STS ex vivo modeli13,19,20oluşturduk. Bu çok yönlü, kolay kolu modeli preklinik araştırma, örneğin tanı ve teşhis için yeni moleküler işaretleri veya faaliyet daha derin bir anlayış ve mekanizmaları kazanmak için farklı türleri için yararlı bir araç temsil eder eylem STS yönetiminde kullanılan standart ve yeni ilaçların.
Protocol
Representative Results
Discussion
İyi tanımlanmış preklinik modelleri Tümörlerinin moleküler arka plan aydınlatmak, kötü prognoz tahmin ve kanser hastaları için yeni tedavi stratejileri geliştirmek için ihtiyaç vardır. Bu yüksek olan heterojen Morfoloji açısından özellikle STS gibi nadir tümörler için önemlidir, saldırgan potansiyel ve klinik davranış STS Biyoloji ve hasta yönetimi21anlayışımızı meydan okuyor. Ayrıca, kullanılabilir birkaç ticari sarkomu hücre hatları bu grup Mezenkimal tüm?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar Gráinne Tierney Editör Yardım için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| DMEM High Glucose | EuroClone | ECB7501L | |
| Fetal bovine serum | EuroClone | ECS0180D | |
| Glutamine | Gibco | 25030-024 | |
| Paraformaldehyde 4% aqueous solution, EM grade | Electron Microscopy Sciences | 157-4-100 | |
| Penicillin streptomycin | Gibco | 15140122 | |
| Triazol reagent | Ambion Life-Technologies | 15596018 | |
| Trypsin | EuroClone | ECB3052D |
Referências
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).
- Linch, M., Miah, A. B., Thway, K., Judson, I. R., Benson, C. Systemic treatment of soft-tissue sarcoma gold standard and novel therapies. Nat Rev Clin Oncol. 11 (4), 187-202 (2014).
- Fletcher, C. D. The evolving classification of soft tissue tumours – an update based on the new 2013 WHO classification. Histopathology. 64 (1), 2-11 (2014).
- De Vita, A., et al. Current classification, treatment options, and new perspectives in the management of adipocytic sarcomas. Onco Targets Ther. 9 (12), 6233-6246 (2016).
- Recine, F., et al. Update on the role of trabectedin in the treatment of intractable soft tissue sarcomas. Onco Targets Ther. 10, 1155-1164 (2017).
- Ducimetière, F., et al. Incidence of sarcoma histotypes and molecular subtypes in a prospective epidemiological study with central pathology review and molecular testing. PLoS One. 6 (8), 20294 (2011).
- Nussbaum, D. P., et al. Preoperative or postoperative radiotherapy versus surgery alone for retroperitoneal sarcoma: a case-control, propensity score-matched analysis of a nationwide clinical oncology database. Lancet Oncol. 17 (7), 966-975 (2016).
- The ESMO/European Sarcoma Network Working Group. Soft tissue and visceral sarcomas: ESMO clinical practice guidelines for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol. 25, 102-112 (2014).
- Paul, J. The Cancer Cell in Vitro: A Review. Pesquisa do Câncer. 22, 431-440 (1962).
- Morton, C. L., Houghton, P. J. Establishment of human tumor xenografts in immunodeficient mice. Nat Protoc. 2 (2), 247-250 (2007).
- Centenera, M. M., Raj, G. V., Knudsen, K. E., Tilley, W. D., Butler, L. M. Ex vivo culture of human prostate tissue and drug development. Nat Rev Urol. 10 (8), 483-487 (2013).
- Vannucci, L. Stroma as an Active Player in the Development of the Tumor Microenvironment. Cancer Microenviron. 8 (3), 159-166 (2015).
- De Vita, A., et al. Activity of Eribulin in a Primary Culture of Well-Differentiated/Dedifferentiated Adipocytic Sarcoma. Molecules. 3 (12), 1662 (2016).
- Failli, A., et al. The challenge of culturing human colorectal tumor cells: establishment of a cell culture model by the comparison of different methodological approaches. Tumori. 95 (3), 343-347 (2009).
- Steinstraesser, L., et al. Establishment of a primary human sarcoma model in athymic nude mice. Hum. Cell. 23, 50-57 (2010).
- Raouf, A., Sun, Y. J. In vitro methods to culture primary human breast epithelial cells. Methods Mol. Biol. 946, 363-381 (2013).
- Daigeler, A. Heterogeneous in vitro effects of doxorubicin on gene expression in primary human liposarcoma cultures. BMC Cancer. 29, 313 (2008).
- Pan, X., Yoshida, A., Kawai, A., Kondo, T. Current status of publicly available sarcoma cell lines for use in proteomic studies. Expert Rev Proteomics. 13 (2), 227-240 (2016).
- Liverani, C., et al. Innovative approaches to establish and characterize primary cultures: an ex vivo. 3D system and the zebrafish model. Biol Open. 15 (2), 309 (2017).
- De Vita, A., et al. Myxofibrosarcoma primary cultures: molecular and pharmacological profile. Ther Adv Med Oncol. 9 (12), 755-767 (2017).
- Blay, J. Y., Ray-Coquard, I. Sarcoma in 2016: Evolving biological understanding and treatment of sarcomas. Nat Rev Clin Oncol. 14 (2), 78-80 (2017).
- Dairkee, S. H., Deng, G., Stampfer, M. R., Waldman, F. M., Smith, H. S. Selective cell culture of primary breast carcinoma. Cancer Res. 55 (12), 2516-2519 (1995).
- Kar, R., Sharma, C., Sen, S., Jain, S. K., Gupta, S. D., Singh, N. Response of primary culture of human ovarian cancer cells to chemotherapy: In vitro individualized therapy. J Cancer Res Ther. 12 (2), 1050-1055 (2016).
- Ravi, A., et al. Proliferation and Tumorigenesis of a Murine Sarcoma Cell Line in the Absence of DICER1. Cancer Cell. 21 (6), 848-855 (2012).
- Zhong, X. Y., et al. Effect of vegf gene knockdown on growth of the murine sarcoma cell line MS-K. Cells. 16 (6), 625-638 (2011).
- Kidani, T., Yasuda, R., Miyawaki, J., Oshima, Y., Miura, H., Masuno, H. Bisphenol A Inhibits Cell Proliferation and Reduces the Motile Potential of Murine LM8 Osteosarcoma Cells. Anticancer Res. 37 (4), 1711-1722 (2017).
- Sugiyasu, K., et al. Radio-sensitization of the murine osteosarcoma cell line LM8 with parthenolide, a naturalinhibitor of NF-κB. Oncol Lett. 2 (3), 407-412 (2011).
- Daigeler, A., et al. Heterogeneous in vitro effects of doxorubicin on gene expression in primary human liposarcoma cultures. BMC Cancer. 29 (8), 313 (2008).
