Anesthetized चूहों से मस्तिष्कमेरु द्रव के संग्रह के लिए एक बेहतर तरीका
Summary
इस प्रोटोकॉल रक्त से कोई संदूषण के साथ मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) के प्रचुर मात्रा में संग्रह के लिए एक बेहतर तकनीक का वर्णन । अधिक से अधिक नमूना संग्रह और शुद्धता के साथ, अधिक विश्लेषण सीएसएफ का उपयोग कर रोगों की हमारी समझ को आगे बढ़ाने के लिए किया जा सकता है कि मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी को प्रभावित.
Abstract
मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान में विश्लेषण के लिए एक मूल्यवान शरीर द्रव है । यह केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के साथ निकटतम संपर्क में तरल पदार्थ में से एक है और इस प्रकार, सीधे इन ऊतकों तक पहुँचने के बिना मस्तिष्क या रीढ़ की हड्डी के रोगग्रस्त राज्य का विश्लेषण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । हालांकि, चूहों में यह cisterna magna से रक्त वाहिकाओं, जो अक्सर नमूने दूषित करने के लिए अपनी निकटता के कारण प्राप्त करने के लिए मुश्किल है । चूहों में सीएसएफ संग्रह के लिए क्षेत्र भी काटना करने के लिए मुश्किल है और अक्सर केवल छोटे नमूनों प्राप्त कर रहे हैं (अधिकतम 5-7 µ l या कम). इस प्रोटोकॉल में विस्तार से वर्णन एक तकनीक है कि संग्रह के वर्तमान तरीकों पर सुधार के लिए रक्त से संदूषण को कम करने और सीएसएफ के प्रचुर मात्रा में संग्रह के लिए अनुमति (औसत 10-15 µ एल पर एकत्र किया जा सकता है) । इस तकनीक का उपयोग चूहों से ऊतक संग्रह के लिए अन्य विच्छेदन विधियों के साथ किया जा सकता है, क्योंकि यह सीएसएफ निष्कर्षण के दौरान किसी भी ऊतकों को प्रभावित नहीं करता है । इस प्रकार ब्रेन और स्पाइनल कॉर्ड इस तकनीक से प्रभावित नहीं होते और बरकरार रहते हैं । अधिक से अधिक सीएसएफ नमूना संग्रह और शुद्धता के साथ, अधिक विश्लेषण इस तरल पदार्थ के साथ आगे सहायता तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान और बेहतर मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी को प्रभावित करने वाले रोगों को समझने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
Introduction
सीएसएफ तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान में विश्लेषण के लिए एक मूल्यवान शरीर द्रव है । सीएसएफ मुख्य रूप से रक्त प्लाज्मा से बना है, जिसमें कुछ कोशिकाओं (कोई लाल रक्त कोशिकाओं और केवल कुछ सफेद रक्त कोशिकाओं) और लगभग प्रोटीन से मुक्त है । यह केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) के साथ निकट संपर्क में तरल पदार्थ में से एक है और यह मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी से परिधीय प्रणाली के लिए कई इलेक्ट्रोलाइट्स पारित कर सकते हैं । मानव में, सीएसएफ नमूने रोग निदान में सहायता करने के लिए एकत्र किया जा सकता है या नैदानिक परीक्षणों में अनुसंधान प्रयोजनों के लिए, एक रीढ़ की हड्डी के रूप में नल (या काठ का पंचर) एक छोटी सी, इनवेसिव प्रक्रिया है: सीएसएफ द्रव सीधे इन तक पहुँचने के लिए बिना सीएनएस में परिवर्तन को प्रतिबिंबित कर सकते हैं ऊतकों. इस प्रकार, हाल के वर्षों में, क्लिनिक में अनुसंधान प्रयोजनों के लिए, सीएसएफ के नमूने अल्जाइमर रोग और अन्य परिवारजन1,2,3जैसे neurodegenerative रोगों के रोगियों से प्राप्त किए गए हैं. वहां कई है जो कि सीएसएफ के नमूनों का उपयोग कर विकसित किया गया है क्लीनिक में रोगों के निदान में सहायता के लिए2,3। हालांकि, इन परख की विश्वसनीयता पर बहुत बहस के लिए संगत, संवेदनशील परिणाम विशेष रूप से रोग का निदान करने के लिए4,5का उत्पादन है । तो, वहां बेहतर परख और लक्ष्य है, जो सीएसएफ में पाया जा सकता है के विकास के लिए एक बड़ी जरूरत है, एक मानक तकनीक के उत्पादन में सहायता के लिए अधिक से अधिक संवेदनशीलता और विशिष्टता के साथ neurodegenerative रोगों का निदान । रोग में मानव सीएसएफ के नमूनों के संभावित महत्व के कारण, तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान में कुतर से सीएसएफ का संग्रह भी ब्याज की है.
चूहों जैविक और चिकित्सा अनुसंधान में महत्वपूर्ण जानवर है और संभावित चिकित्सीय यौगिकों और मानव नैदानिक परीक्षणों से पहले सबूत के अवधारणा अध्ययन के परीक्षण के लिए अनुमति देते हैं । हालांकि, चूहों में यह एक छोटे से पशु में मस्तिष्क के लिए अपनी निकटता के कारण सीएसएफ के नमूनों को प्राप्त करने के लिए मुश्किल है, चूहों में सीएसएफ संग्रह की सामान्य विधि के रूप में यह cisterna magna, सेरिबैलम और मज्जा oblongata के पृष्ठीय सतह के बीच एक खोलने के माध्यम से प्राप्त करने के लिए है. इस क्षेत्र के लिए और करीब निकटता में रक्त वाहिकाओं के लिए काटना मुश्किल है के रूप में यह सीएसएफ के नमूनों को इकट्ठा करने में कठिनाई का कारण बनता है, रक्त कोशिकाओं से संदूषण के जोखिम में वृद्धि. इन कठिनाइयों के कारण, ज्यादातर शोधकर्ताओं केवल विश्लेषण के लिए सीएसएफ की एक छोटी राशि प्राप्त कर सकते हैं (आमतौर पर 5-7 µ एल के रूप में कहा जाता है) और रक्त कोशिकाओं द्वारा सीएसएफ के नमूनों की संदूषण विश्लेषण के लिए एक प्राथमिक चिंता का विषय है6,7,8 , 9. रक्त दूषण परिणाम अस्पष्ट कर सकते हैं और सही मायने में सीएनएस की स्थिति को प्रतिबिंबित नहीं. इसके अलावा, सीमित नमूना एकत्र कर सकते है अनुसंधान के रूप में सामांय चूहों से एकत्र की राशि केवल एक ही माप के लिए पर्याप्त है (डुप्लिकेट या तपसिल में) एंजाइम से जुड़े immunosorbent परख (एलिसा) का उपयोग कर । इस प्रकार, सीएसएफ नमूनों आमतौर पर कई चूहों से जमा कर रहे हैं क्रम में करने के लिए पर्याप्त कई परख चलाने के लिए नमूना है. चूहों से सीएसएफ के प्रचुर मात्रा में, दूषित संग्रह के लिए एक प्रोटोकॉल का विकास बहुत वांछित है और कुतर का उपयोग कर तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान में सुधार लाने में लाभकारी होगा ।
इस प्रोटोकॉल में, प्रचुर मात्रा में (10-15 µ एल के एक औसत) anesthetized चूहों से सीएसएफ के संग्रह के लिए एक तकनीक विस्तार से वर्णित है और सीएसएफ संग्रह के वर्तमान में एक ज्ञात विधि पर सुधार करने के लिए रक्त से संक्रमण को कम करने के लिए10. सीएसएफ संग्रह के लिए एक मजबूत प्रोटोकॉल सीएसएफ के विकास में सहायता करेगा आधारित है, जो रोग निदान में सहायता करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, साथ ही तंत्र में अनुसंधान में सुधार है कि आबाद रोगों सीएनएस को प्रभावित ।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस प्रोटोकॉल विस्तार से एक तकनीक जो सीएसएफ संग्रह के10 वर्तमान तरीकों पर सुधार करने के लिए रक्त से संदूषण को कम करने और सीएसएफ के प्रचुर मात्रा में संग्रह के लिए अनुमति देने का वर्णन (औसत पर ~ 10-15 µ …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को चीन की राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (८१६५०११०५२७, ८१३७१४००) और चीन के राष्ट्रीय प्रमुख बुनियादी अनुसंधान कार्यक्रम (2013CB530900) ने समर्थन दिया था.
Materials
| Chloral hydrate (used as anesthetic) | Sinopharm Chemicals Reagen Co. Ltd. | 30037517 | CAS number 302-17-0. |
| Dissecting scissors | 66 vision technology | 54002 | |
| Dissecting curved forceps | 66 vision technology | 53072 | |
| Dissecting straight forceps | 66 vision technology | 53070 | |
| Mouse adapter (with ear bars) | Made in-house. | N/A | Similar equipment available from World Precision Instruments. |
| Dissecting microscope | Meiji Labax | Model 15381 | |
| Micromanipulator | World Precision Instruments | M3301 | |
| Magnetic base for micromanipulator | Kanetec | MB-K | |
| Glass capillaries | World Precision Instruments | 1B100-4 | |
| Micropipette puller | Sutter Instruments | Model P-1000 | |
| Syringes (1ml) | Tansoole | 02024692 | For 1ml. |
| Microtubes (1.5ml) | Axygen | MCT-150-C | |
| Protease inhibitor Cocktail Set III EDTA-free | Calbiochem | 539134 | |
| Human Aβ42 ELISA kit | Invitrogen | KHB3441 | |
| Piping (teflon tubing) | World Precision Instruments | MMP-KIT | Obtained from a microinjection kit and attached to the capillary holder and syringe. |
| Mini centrifuge | Tiangen Biotech | OSE-MC8 | |
| Cotton buds | Obtained from any household store/pharmacy. | N/A |
References
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