Vivo fare siyatik sinir modeli Perineural işgali
Summary
Biz bir vivo içinde fare modeli perineural işgalinin siyatik sinir syngeneic pankreas kanseri hücreleri enjekte edilerek tanımlamak. Model ölçüde sinir işgalinin miktar için sağlar ve araştırma perineural işgalinin hücresel ve moleküler mekanizmaları destekler.
Abstract
Kanser hücrelerinin hangi kanser hücreleri çoğalırlar ve sinir microenvironment göç perineural işgali (PNI) olarak adlandırılan bir süreç sinirleri istila. İstila bu tür kanser türleri çeşitli tarafından sergilenen ve çok sık pankreas kanseri bulundu. Sinir lifleri fare pankreas içinde mikroskobik boyutunu PNI çalışmanın orthotopic fare modellerinde zor işler. Burada, nerede biz syngeneic pankreas kanseri hücre kültürünü Panc02-H7 fare siyatik sinir enjekte PNI, heterotopik vivo içinde modeli açıklar. Bu modelde, siyatik sinir imzalat farelerin maruz ve kanseri hücreleri enjekte. Kanser hücrelerinin sinirler omurilik enjeksiyon noktasından proksimale doğru istila. Baskına siyatik sinirleri sonra ayıklanır ve donmuş kesit için OCT ile işlenebilir. H & E ve bu bölümleri ayirt boyama işgali ve değişiklikleri her iki derece miktar protein ifadede izin verir. Bu model çok yönlü verilen PNI üzerinde çalışmalar çeşitli uygulanabilir. Farklı genetik değişiklikler ve/veya kanser hücrelerinin farklı türleri ile fare kullanarak PNI hücresel ve moleküler mekanizmaları incelenmesi ve farklı kanser türleri sağlar. Ayrıca, tedavi edici ajanların etkileri sinir işgali üzerinde bu farelerde tedavi uygulayarak okudu.
Introduction
Sinirleri uyarır kanser büyüme ve geçiş1,2,3belirli tümör microenvironment oluştururlar. Perineural işgali (PNI) içinde ve çevresinde sinirler hangi kanser hücreleri istila işlemidir. Sinirler boyunca kökenli siteleri uzak kanseri istila genişletir beri metastaz benzersiz bir yol olarak düşünülebilir. PNI % 22’i % 1001,2‘ ye kadar değişen bir insidans ile pankreas, prostat, baş ve boyun, tükürük, servikal ve kolorektal kanserler gibi çeşitli kanser türleri bulunur. PNI ağrı ile ilişkili olan ve kötü prognoz ve kötü hayatta kalma oranları1,2ile karşılıklı olarak ilişkilendirir.
Modelleri perineural işgalinin geliştirmeye, hücresel ve moleküler mekanizmaları bu sürecin aydınlatmak için ve aday terapötik ajanlar PNI azaltmak için test etmek esastır. Kanser hücrelerinin sinir explants4, dorsal kök ganglions5,6,7veya belirli hücreleri ile ortak kültür vitro kanserleri ve sinirler arasındaki etkileşimler eğitim yöntemleri şunlardır sinir7microenvironment gibi Schwann hücreleri. Vivo yaklaşımlar, ancak, daha fizyolojik ilgili, hangi kanser indüklenen nakledilen veya kanser fare modelleri kullanımını içerir ve tüm sinir microenvironment için muhasebe avantajına sahip. Orthotopic pankreas veya Prostat Kanser, PNI modelleri bildirilen8,9,10 olmuştur ve PNI insidansı kaydedilebilir, ancak bu organlar sinirler küçük boyutu nedeniyle, görmek zordur Tüm sinir ve bu nedenle PNI kapsamını ölçmek için. Biz burada tarif hangi kanser hücreleri-basit bir cerrahi prosedür11farelerin siyatik sinir içine enjekte edilir PNI vivo içinde modelin modelidir. Heterotopik transplantasyon sinir omurilik doğru içinde işgal etti. Sinir işgali sitesinden enjeksiyon spinal kord uzunluğu, yanı sıra sinir içinde kanser hacmi ölçülecek. Önemlisi, baskına sinir deneyleri mikroskobik ve moleküler analizleri de dahil olmak üzere çeşitli için toplanabilir. Kanser hücrelerinin çeşitli test ve genetik olarak değiştirilmiş veya belirli bileşikler ile tedavi ana bilgisayar fare de kullanılabilir olur. Bu güçlü tahlil kanser hücreleri ve ana bilgisayar microenvironment için PNI mekanizmaları içine soruşturma için değişiklik yapılmasına izin verir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu protokol için pankreas kanseri hücreleri tarafından siyatik sinir işgalinin miktar sağlar perineural işgalinin bir vivo içinde fare modeli açıklar. Bu model sinir işgalinin moleküler mekanizmaları çalışma sağlar. Bu tekniği kullanarak başarılı deneyler üç kritik adımı sürecinde dikkatli bir yaklaşım gerektirir: 1) enjeksiyon (Adım 2.7, 2.8), kanser hücrelerinin baskına sinirler (Adım 3.4) 2) çıkarımı ve 3) hasat sinirler (Adım 4.1) işlenmesi.
En…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar moleküler Sitoloji tesis ve hayvan tesisin Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi tarafından sağlanan teknik hizmetleri kabul etmiş oluyorsunuz. Bu eser NIH hibe CA157686 (R.J. Wong) ve P30 CA008748 tarafından desteklenmiştir (Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi destek hibe).
Materials
| Mouse | Number and age variable depending on experimental needs | ||
| Cell culture media (PBS, Trypsin, and DMEM+10% FBS) | Any | Steps 1.1, 1.2, 1.3. | |
| Conical centrifuge tube, 50 mL | Falcon | 352098 | Step 1.1 |
| Microcentrifuge tube 1.5 mL | Axygen | MCT-150-C-S | Step 1.2 |
| Electric razor | WAHL | 9962 | Step 2.1. Can be substituted with commercial hair removal agent |
| Isoflurane, 250 mL | Baxter | 1001936060 | Step 2.2 |
| Hypoallergenic surgical tape | 3M Blenderm | 70200419342 | Step 2.3 |
| Betadine Swapsticks | PDI | SKU 41350 | Step 2.4 |
| Webcol Alcohol Preps | Covidien | 5110 | Step 2.4 |
| Sterile surgical tools (scissors and forceps) | Steps 2.4, 2.5, 3.3, 3.4, 3.5 | ||
| 10 μL Hamilton syringe | Hamilton | 80308 | Steps 2.7, 2.8 |
| Steel Micro spatula | Fisher Scientific | S50823 | Step 2.7 |
| Dissecting microscope | Step 2.7 | ||
| Bupivacine, 1 g | Enzo Life Sciences | BML-NA139-0001 | Step 2.9. Reconstitute to 0.5% |
| 5-0 Nylon suture | Ethicon | 698H | Step 2.9 |
| Tissue-Tek O.C.T. Compound | VWR | 25608-930 | Step 4.1 |
| Tissue-Tek Cryomold Molds | VWR | 25608-916 | Step 4.1 |
Referências
- Liebig, C., Ayala, G., Wilks, J. A., Berger, D. H., Albo, D. Perineural invasion in cancer. Cancer. 115 (15), 3379-3391 (2009).
- Bapat, A. A., Hostetter, G., Von Hoff, D. D., Han, H. Perineural invasion and associated pain in pancreatic cancer. Nat Rev Cancer. 11 (10), 695-707 (2011).
- Deborde, S., Wong, R. J. How Schwann cells facilitate cancer progression in nerves. Cell Mol Life Sci. 341 (177-186), 1236361-1236416 (2017).
- Abiatari, I., et al. Consensus transcriptome signature of perineural invasion in pancreatic carcinoma. Mol Cancer Ther. 8 (6), 1494-1504 (2009).
- Ayala, G. E., et al. In vitro dorsal root ganglia and human prostate cell line interaction: redefining perineural invasion in prostate cancer. Prostate. 49 (3), 213-223 (2001).
- Gil, Z., Cavel, O., et al. Paracrine regulation of pancreatic cancer cell invasion by peripheral nerves. J Natl Cancer Inst. 102 (2), 107-118 (2010).
- Deborde, S. T., et al. Schwann cells induce cancer cell dispersion and invasion. J Clin Invest. 126 (4), 1538-1554 (2016).
- Pour, P. M., Egami, H., Takiyama, Y. Patterns of growth and metastases of induced pancreatic cancer in relation to the prognosis and its clinical implications. Gastroenterology. 100 (2), 529-536 (1991).
- Eibl, G., Reber, H. A. A xenograft nude mouse model for perineural invasion and recurrence in pancreatic cancer. Pancreas. 31 (3), 258-262 (2005).
- Stopczynski, R. E., et al. Neuroplastic changes occur early in the development of pancreatic ductal adenocarcinoma. Cancer Res. 74 (6), 1718-1727 (2014).
- Gil, Z., et al. Nerve-sparing therapy with oncolytic herpes virus for cancers with neural invasion. Clin Cancer Res. 13 (21), 6479-6485 (2007).
- Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections. Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), 655-658 (2014).
- Cremer, H., et al. Inactivation of the N-CAM gene in mice results in size reduction of the olfactory bulb and deficits in spatial learning. Nature. 367 (6462), 455-459 (1994).
- He, S., et al. The chemokine (CCL2-CCR2) signaling axis mediates perineural invasion. Mol Cancer Res. 13 (2), 380-390 (2015).
- He, S., et al. GFRα1 released by nerves enhances cancer cell perineural invasion through GDNF-RET signaling. P Natl Acad Sci USA. , 02944 (2014).
