ניצול אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה על צג תחילת גידול וצמיחה מודלים מהונדס גנטית לסרטן הלבלב
Summary
מאמר זה מתאר את הניצול של אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה בעכברים מהונדסים גנטית לסרטן הלבלב. המטרה העיקרית היא לספק הדרכה מפורטת של זיהוי, הערכה של הלבלב גידולים אנדוגני.
Abstract
LSL-קראס G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; Pdx-1-Cre (KPC) העכבר מודל מייצג מודל הטרנסגניים הוקמה ומשמש לעתים קרובות כדי להעריך טיפולים בסרטן הלבלב. תחילת הגידול הוא משתנה במודל KPC בין 8 שבועות מספר חודשים. לכן, כלי הדמיה לא פולשנית נדרשים מסך עבור תחילת הגידול ולפקח על התגובה לטיפול. כדי לטפל בבעיה זו, גישות שונות הופיעו במהלך השנים האחרונות. אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה יש יתרונות חשובים כגון אי-invasiveness, הפעלה מהירה פעמים רזולוציה תמונה גבוהה ללא חשיפה לקרינה. עם זאת, אולטרסאונד בעכברים אינו טריוויאלי ומספיק ידע אנטומי, מיומנויות מעשיות נדרשים לבצע בהצלחה אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה במודלים פרה סרטן הלבלב. במאמר שלהלן מוצג מדריך מעשי מפורט עבור אולטרסאונד בטן במודלים מאתר עם דגש מיוחד בדגמים סרטן הלבלב אנדוגני. יתר על כן, סיכום של טעויות נפוצות, וכיצד להימנע מהם מסופק.
Introduction
מודלים מהונדס גנטית עכבר השיגו חשיבות הולך וגדל בחקר הסרטן, בשל היכולת שלהם מקרוב לסכם את המורכבות האנושית carcinogenesis1,2,3. ביותר בשימוש תכוף מודלים ללמוד סרטן הלבלב התפתחות, התקדמות, תגובה טיפולית מאופיין של הפעלת מוטציה ב- אונקוגן קראס בשילוב של איון של הגידול p53 משתיק קול, או4. קראס-LSL הזה G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; Pdx-1-Cre דגם העכבר (KPC) מחקה את התקדמות צעד חכם של נגעים טרום פולשנית neoplasia intraepithelial הנרתיק הלבלב (הייתה) כדי קרצינומה פולשנית. . Phenotypically, כמעט כל העכברים לפתח PDAC בתוך ששת החודשים הראשונים לאחר הלידה. עם זאת, לעומת מודלים המושתלים, המודל KPC מגלה של תחילת גידול משתנה מאוד מ- 8 שבועות חודשים מספר4. ברגע הלבלב גידולים מגיע בגודל מסוים (5-9 מ מ קוטר), הגידול מאיץ במהירות, עכברים יהיה חייב להיות רשום ניסויים פרה5. לכן, זיהוי מדויק של תחילת גידול וגודל הגידול הוא תנאי חיוני מחקר קליני הלוגיסטי וניטור הטיפול. באופן כללי, מספר גישות אוהב תהודה מגנטית (MRI)6, טומוגרפיה סריקה7,8,9 או אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה יכול להיות מועסק לערוך הקרנת הגידול, טיפול10. בכל שיטה יש את החסרונות והיתרונות שלה. למרות MRI- או טומוגרפיה ממוחשבת (CT)-הדמיה מאפשר רכישת נתונים ברזולוציה גבוהה כמו גם חישוב נפח מדויק, זמן ממושך הבדיקה תחת הרדמה כללית, וכן ציוד יקר מאוד נדרש, אינו מתיר בתדירות גבוהה סריקה על פני תקופה ארוכה של זמן. לעומת זאת, בדיקת אולטרה סאונד בעלי חיים קטנים היא שיטה ותיקה זה יכול להיות מועסק על המסך עבור פתולוגיות בטן עכברים11. היתרונות של שיטת ההדמיה הם קצרים סריקה פעמים, ברזולוציה גבוהה, ואם האפשרות להשתמש אולטרסאונד דופלר או חדות משופרת אולטרסאונד (CEUS) כדי להמחיש זלוף איברים במקביל. עם זאת, ידע אנטומי דמיון תלת-ממד, הכשרה מעשית מקיפה נדרשים לפרשנויות התמונה הנכונה.
במאמר הבא, פרוטוקול מפורט עבור ניצול אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה במודל KPC מסופק. יתר על כן, תמונות אולטרסאונד רגיל מתואר, בלוחיות איברים מבנים כדי להקל על התמצאות עם החוקר.
Protocol
Representative Results
Discussion
עם פרוטוקול זה, תיאור מפורט עבור לכימות הלבלב גידולים באמצעות דימות ברזולוציה גבוהה אולטרסאונד בטן במודלים של העכבר מהונדסים הינו מסופק. לאחרונה, Sastra. et al. לאור תיאור מפורט כיצד ניתן לכמת הלבלב גידולים העכבר דגמים, אבל אין הוראות מטמיעים אודות ההכנה וטיפול כמוצג תנאי מוקדם לקבלת צעדי?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
מחקר זה נתמך על ידי דויטשה Krebshilfe (מקס Eder לקבוצה AN: 110972), DGVS עבודת הדוקטורט מלגה (SMB), מלגת אחרת-Kröner-Fresenius-קרן (כדי המדור) ב גטינגן במרכז הרפואי אוניברסיטת. אנו מודים יוטה בלומברג, אולריקה Wegner לסיוע טכני מומחה. אנו מודים גם טכנאים בעלי חיים כל במתקן בעלי חיים של אוניברסיטת רפואי גטינגן מרכז עבור העכבר שמירה. כל הניסויים בוצעו לפי תקנות רווחת גרמני.
Materials
| Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | VS-11945 | |
| Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | VS-11874 | |
| Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | SA-12055 | |
| Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | SA-11982 | |
| electronic pet clippers | Panasonic Marketing Europe, Germany | 5025232484324 | Panasonic ER-PA10-s |
| Labotect Hot plate | Labor tech Göttingen, Germany | 13854 | |
| eye cream (ophthalmic ointment) | Schülke&Mayr, Germany | 9080249 | |
| veterinary isoflurane | Abbvie, Germany | 4831867 | |
| depilatory cream | RB healthcare UK, United Kingdom | 8218535 | |
| 70% ethanol (v/v) in distilled water | TH. Geyer, Germany | 22941000 | |
| ultrasound gel | Asmuth, Germany | 13477 | |
| tissue wipes | Kimberly-Clark Germany, Germany | 7558 | |
| cotton tips | Meditrade, Germany | 75481116 | |
| glass bowl for ultrasound gel | ARC France, France | H1149 | |
| water bowl | W & P Trading Co., USA | B00K2P6PLQ | |
| gauze sponges | Fuhrmann, Germany | 960504 |
Referências
- Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine. EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).
- Olive, K. P., Politi, K. . Translational therapeutics in genetically engineered mouse models of cancer. (2), 131-143 (2014).
- Westphalen, C. B., Olive, K. P. Genetically engineered mouse models of pancreatic cancer. The Cancer Journal. 18 (6), 502-510 (2012).
- Hingorani, S. R., et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).
- Frese, K. K., et al. nab-Paclitaxel potentiates gemcitabine activity by reducing cytidine deaminase levels in a mouse model of pancreatic cancer. Cancer Discovery. 2 (3), 260-269 (2012).
- Paredes, J. L., et al. A non-invasive method of quantifying pancreatic volume in mice using micro-MRI. PLoS One. 9 (3), e92263 (2014).
- Boj, S. F., et al. Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer. Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).
- Aung, W., et al. Immunotargeting of Integrin alpha6beta4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model. Molecular Imaging. 15, (2016).
- Akladios, C. Y., et al. Contribution of microCT structural imaging to preclinical evaluation of hepatocellular carcinoma chemotherapeutics on orthotopic graft in ACI rats. Bulletin du Cancer. 98 (2), 120-132 (2011).
- Neesse, A., et al. CTGF antagonism with mAb FG-3019 enhances chemotherapy response without increasing drug delivery in murine ductal pancreas cancer. Proceedings of the National Academy of Science USA. 110 (30), 12325-12330 (2013).
- Sastra, S. A., Olive, K. P. Quantification of murine pancreatic tumors by high-resolution ultrasound. Methods in Molecular Biology. 980, 249-266 (2013).
