Utilizando o ultra-som de alta resolução para o aparecimento de Tumor de Monitor e crescimento em modelos de câncer pancreático geneticamente modificados
Summary
Este artigo descreve a utilização de ultra-som de alta resolução em camundongos geneticamente modificados câncer pancreático. O objetivo principal é fornecer uma instrução detalhada para detecção e avaliação de tumores pancreáticos endógenas.
Abstract
O LSL-Kras G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre modelo de mouse (KPC) representa um modelo transgênico estabelecido e usado com frequência para avaliar novas terapias em câncer pancreático. Aparecimento de tumor é variável no modelo KPC entre 8 semanas e vários meses. Portanto, ferramentas de imagem não-invasivos são obrigadas a tela para o aparecimento de tumor e monitor para resposta ao tratamento. Para resolver esse problema, diferentes abordagens têm surgido nos últimos anos. Ultra-som de alta resolução tem grandes vantagens como não-invasividade, tempos de sessão rápida e uma alta resolução de imagem sem exposição à radiação. No entanto, ultra-som em ratos não é trivial e suficiente conhecimento anatômico e habilidades práticas são necessárias para executar com êxito o ultra-som de alta resolução em modelos pré-clínicos de câncer pancreático. Com o artigo a seguir, é apresentado um guia detalhado de hands-on para ecografia abdominal em murino modelos com um foco particular em modelos de câncer no pâncreas endógeno. Além disso, é fornecido um resumo dos erros comuns e como evitá-los.
Introduction
Modelos de rato geneticamente ganharam uma importância crescente em pesquisa de câncer, devido à sua capacidade intimamente recapitular a natureza complexa de carcinogênese humana1,2,3. Um dos mais frequentemente usados modelos para estudar o desenvolvimento de câncer no pâncreas, progressão e resposta terapêutica é caracterizada por uma mutação ativando o oncogene Kras combinado com uma inativação do tumor supressor p534. Este LSL-Kras G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre modelo de mouse (KPC) imita a progressão por etapas de lesões pre-invasoras de neoplasia intra-epitelial pancreática (PanIN) para carcinoma invasivo. Fenotipicamente, quase todos os ratos desenvolvem PDAC dentro os primeiros seis meses após o nascimento. No entanto, em comparação com modelos transplantados, o modelo KPC revela um início de tumor altamente variável de 8 semanas a vários meses4. Uma vez que tumores pancreáticos alcança um certo tamanho (5-9 mm de diâmetro), rapidamente acelera o crescimento do tumor e ratos terá que estar matriculado em ensaios pré-clínicos5. Portanto, a detecção exata do aparecimento do tumor e o tamanho do tumor é um pré-requisito essencial para estudos pré-clínicos logística e monitoramento de terapia. Em geral, várias abordagens como ressonância magnética (MRI)6, computadorizada, digitalização7,8,9 ou ultra-som de alta resolução pode ser empregada para realizar triagem de tumor e terapia de10. Cada técnica tem suas vantagens e desvantagens. Apesar de MRI- ou tomografia computadorizada (CT)-imagem permite a aquisição de dados de alta resolução, assim como o cálculo de volumes precisos, tempo prolongado exame sob sedação geral, e um equipamento muito caro é necessário e não permite frequente digitalização por um longo período de tempo. Em contraste, o pequena animal ultra-sonografia é um método estabelecido que pode ser empregado para a tela para patologias abdominais em ratos11. Vantagens deste método de imagem são curtas de digitalização vezes, alta resolução, e a possibilidade de utilizar ultra-som doppler ou contraste aprimorado ultra-som (CEUS) para visualizar a perfusão dos órgãos em paralelo. No entanto, conhecimento anatômico, imaginação 3D e exaustivo treinamento prático são necessários para a interpretação correta da imagem.
No artigo a seguir, é fornecido um protocolo detalhado para a utilização de ultra-som de alta resolução no modelo KPC. Além disso, imagens de ultra-som padrão são retratadas e rotuladas com estruturas do órgão para facilitar a orientação para o investigador.
Protocol
Representative Results
Discussion
Com este protocolo, é fornecida uma descrição detalhada para quantificação dos tumores pancreáticos, utilizando imagens de ultra-som abdominal de alta resolução em modelos do rato geneticamente modificados. Recentemente, Sastra et al . publicaram uma descrição detalhada como quantificar tumores pancreáticos em modelos do rato, mas não visualizadas instruções sobre a preparação e manipulação como pré-requisito para todos os novos passos foram mostrados11. O objetivo gera…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta pesquisa foi apoiada pelo Deutsche Krebshilfe (grupo de Eder Max para AN: 110972), uma bolsa de tese de doutorado de DGVS (para SMB) e uma bolsa de Else Kröner Fresenius-Fundação- (para RGG) na Universidade Medical Center Goettingen. Agradecemos a Jutta Blumberg e Ulrike Wegner para assistência técnica especializada. Agradecemos também a todos os técnicos de animais nas instalações da Universidade Medical Center Goettingen para mouse mantendo animais. Todos os experimentos foram realizados de acordo com normas de bem-estar animal alemão.
Materials
| Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | VS-11945 | |
| Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | VS-11874 | |
| Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | SA-12055 | |
| Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | SA-11982 | |
| electronic pet clippers | Panasonic Marketing Europe, Germany | 5025232484324 | Panasonic ER-PA10-s |
| Labotect Hot plate | Labor tech Göttingen, Germany | 13854 | |
| eye cream (ophthalmic ointment) | Schülke&Mayr, Germany | 9080249 | |
| veterinary isoflurane | Abbvie, Germany | 4831867 | |
| depilatory cream | RB healthcare UK, United Kingdom | 8218535 | |
| 70% ethanol (v/v) in distilled water | TH. Geyer, Germany | 22941000 | |
| ultrasound gel | Asmuth, Germany | 13477 | |
| tissue wipes | Kimberly-Clark Germany, Germany | 7558 | |
| cotton tips | Meditrade, Germany | 75481116 | |
| glass bowl for ultrasound gel | ARC France, France | H1149 | |
| water bowl | W & P Trading Co., USA | B00K2P6PLQ | |
| gauze sponges | Fuhrmann, Germany | 960504 |
Referências
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