Использование УЗИ высоким разрешением монитор опухоль начала и роста в модели генно-инженерных рака поджелудочной железы
Summary
Эта статья описывает использование высокого разрешения УЗИ в генной инженерии рака поджелудочной железы мышей. Главной целью является предоставить подробную инструкцию для обнаружения и оценки эндогенного опухоли поджелудочной железы.
Abstract
LSL-крас G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre модель мыши (КЗК) представляет установленные и часто используемые трансгенные модели для оценки Роман терапии рака поджелудочной железы. Опухоль начала является переменной в модели КЗК 8 недель до нескольких месяцев. Таким образом неинвазивная изображений инструменты необходимы для экрана для начала опухоли и монитор для реакции на лечение. Для решения этой проблемы, за последние годы появились разные подходы. Высокое разрешение УЗИ имеет основные преимущества, такие как номера инвазивность, быстро сессии раз и высокое разрешение без облучения. Однако УЗИ у мышей не является тривиальным и достаточно анатомические знания и практические навыки требуются для успешного выполнения УЗИ высокого разрешения в модели доклинические рака поджелудочной железы. Вместе со следующей статьей представлено подробное практическое руководство для УЗИ брюшной полости в мышиных моделях с особым упором на модели эндогенного рака поджелудочной железы. Кроме того предоставляется краткое изложение общих ошибок и как их избежать.
Introduction
Генетически модифицированные мыши модели получили все большее значение в исследовании рака из-за их способности тесно пилки сложный характер человека канцерогенеза1,2,3. Один из наиболее часто используемых моделей для изучения развития рака поджелудочной железы, прогрессирование и лечебных ответ характеризуется активация мутации в онкоген крас, в сочетании с инактивации p53 усмирителя тумора4. Этот -LSL-красG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre (КЗК) модель мыши имитирует поэтапный переход от неинвазивного интраэпителиальная неоплазия поджелудочной железы (Панин) поражений в инвазивной карциномы. Фенотипически почти всех мышей развиваются PDAC в течение первых шести месяцев после рождения. Однако по сравнению с пересаженной моделей, модель КЗК показывает высоко вариабельные опухоль начала от 8 недель до нескольких месяцев4. После опухолях поджелудочной железы достигает определенного размера (5-9 мм в диаметре), рост опухоли ускоряет быстро и должны быть зачислены в доклинических испытаний5мышей. Таким образом точное обнаружение опухоли начала и размера опухоли является необходимым условием для логистики доклинические исследования и мониторинг терапии. В целом, несколько подходов, как магнитно-резонансная томография (МРТ)-6, КТ сканирования7,8,9 или УЗИ высокого разрешения могут быть использованы для проводить скрининг опухоли и терапия10. Каждый метод имеет свои преимущества и недостатки. Хотя МРТ- или компьютерная томография (КТ)-изображения позволяет сбора данных высокого разрешения, а также точный объем вычислений, время длительного обследования под общего седативного эффекта, и очень дорогое оборудование требуется и позволяют не частой Сканирование в течение долгого времени. В отличие от мелких животных УЗИ является установленным метод, который может быть использован для экрана для брюшной патологий у мышей11. Преимущества этого метода визуализации короткие сканирование раз, высокое разрешение, и возможность использования ультразвуковая допплерография или контраст расширения УЗИ (CEUS) для визуализации перфузии органов параллельно. Однако анатомические знания, 3D воображение и тщательное практической подготовки необходимы для правильного образа интерпретации.
В следующей статье предоставляется подробный протокол для использования УЗИ высокого разрешения в модели КПК. Кроме того стандартные УЗИ изображения изображены и помечены структуры органа для облегчения ориентации для следователя.
Protocol
Representative Results
Discussion
Этот протокол предоставляется подробное описание для количественной оценки опухолях поджелудочной железы с помощью изображений с высоким разрешением УЗИ брюшной полости в генетически модифицированные мыши модели. Недавно Састра et al. опубликовал подробное описание как количест…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это исследование было поддержано Deutsche Krebshilfe (Max Eder группы: 110972), DGVS докторской диссертации стипендию (SMB) и Else-Kröner-Fresenius-фонд стипендию (RGG) в Университет Goettingen медицинский центр. Мы благодарим Jutta Blumberg и Ульрике Wegner за экспертной технической помощи. Мы также благодарим всех животных техников на объекте животных Университет Goettingen медицинский центр для мыши держать. Все эксперименты проводились согласно правилам немецкого животных.
Materials
| Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | VS-11945 | |
| Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | VS-11874 | |
| Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | SA-12055 | |
| Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | SA-11982 | |
| electronic pet clippers | Panasonic Marketing Europe, Germany | 5025232484324 | Panasonic ER-PA10-s |
| Labotect Hot plate | Labor tech Göttingen, Germany | 13854 | |
| eye cream (ophthalmic ointment) | Schülke&Mayr, Germany | 9080249 | |
| veterinary isoflurane | Abbvie, Germany | 4831867 | |
| depilatory cream | RB healthcare UK, United Kingdom | 8218535 | |
| 70% ethanol (v/v) in distilled water | TH. Geyer, Germany | 22941000 | |
| ultrasound gel | Asmuth, Germany | 13477 | |
| tissue wipes | Kimberly-Clark Germany, Germany | 7558 | |
| cotton tips | Meditrade, Germany | 75481116 | |
| glass bowl for ultrasound gel | ARC France, France | H1149 | |
| water bowl | W & P Trading Co., USA | B00K2P6PLQ | |
| gauze sponges | Fuhrmann, Germany | 960504 |
Referências
- Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine. EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).
- Olive, K. P., Politi, K. . Translational therapeutics in genetically engineered mouse models of cancer. (2), 131-143 (2014).
- Westphalen, C. B., Olive, K. P. Genetically engineered mouse models of pancreatic cancer. The Cancer Journal. 18 (6), 502-510 (2012).
- Hingorani, S. R., et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).
- Frese, K. K., et al. nab-Paclitaxel potentiates gemcitabine activity by reducing cytidine deaminase levels in a mouse model of pancreatic cancer. Cancer Discovery. 2 (3), 260-269 (2012).
- Paredes, J. L., et al. A non-invasive method of quantifying pancreatic volume in mice using micro-MRI. PLoS One. 9 (3), e92263 (2014).
- Boj, S. F., et al. Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer. Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).
- Aung, W., et al. Immunotargeting of Integrin alpha6beta4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model. Molecular Imaging. 15, (2016).
- Akladios, C. Y., et al. Contribution of microCT structural imaging to preclinical evaluation of hepatocellular carcinoma chemotherapeutics on orthotopic graft in ACI rats. Bulletin du Cancer. 98 (2), 120-132 (2011).
- Neesse, A., et al. CTGF antagonism with mAb FG-3019 enhances chemotherapy response without increasing drug delivery in murine ductal pancreas cancer. Proceedings of the National Academy of Science USA. 110 (30), 12325-12330 (2013).
- Sastra, S. A., Olive, K. P. Quantification of murine pancreatic tumors by high-resolution ultrasound. Methods in Molecular Biology. 980, 249-266 (2013).
