アルコール中毒のための Pharmacotherapies の開発のモデルを飲むマウス: 暗く、2 ボトルの選択で飲む
Summary
アルコール使用障害 (AUD) は主要な国民の健康上の問題、この患者集団のニーズを相殺するためにより効果的な治療法の開発が必要です。この目的のためには、次のプロトコルは、鉛抗アルコール化合物の臨床効果を評価するために 2 つの単純な齧歯動物飲酒モデルを利用しています。
Abstract
アルコール使用障害 (AUD) は大きな問題よりも、推定 7600 万の世界的な診断基準を満たす人します。現在の治療法は、介入と高によって明らかにされる再発率で心理と組み合わせる場合でもほとんど効果がない 3 つの FDA 承認薬に限定されます。そのためより新しい治療法の検索は重要な公衆衛生の目標を表します。このためには、次のプロトコルを利用鉛抗アルコール化合物の臨床効果を評価するために 2 つの単純な齧歯動物飲酒モデル: 2 本選択 (TBC) と闇 (DID) で飲みます。前者は自発的にマウスを誘導する後者間適度に自主的な飲み物をマウス酒盛りを模した短い期間でアルコールの大量に消費することができます。これらのパラダイムの両方のシンプルかつ高いスループット自然許可薬理学的エージェントの急速なスクリーニングのためまたはある特定の自主的な飲酒行動を示すマウスの系統を識別するため。
Introduction
過去の 25 年、プラス、アルコール使用障害 (AUD)1の治療のため薬の開発に向けて多大な労力を置かれています。AUD はまだ以上 1800 万のアメリカ人に影響を与えると、$ 2200 億をかけて主要な公衆衛生問題を残っている多くの進歩がなされたが毎年2,3。現在、唯一の 3 つの FDA 承認薬、ジスルフィラム、ナルトレキソン、アカンプロセート、臨床試験および限られた成功クリニック設定における心理社会的介入と組み合わせるとも矛盾する結果が得られているすべて4,5,6,7。
現在の豪ドルの治療の失敗の主な理由は、AUD8の異種の性質にリンクされます。環境および遺伝的要因は、豪ドルの開発に貢献する一方遺伝は発症9のリスクの推定の 50-60% を占めています。うつ病の治療と同様に、それは広く受け入れられている AUD から患者がさまざまな10の各患者のニーズに合った医薬品を必要があります。
明らかに、創の既に困難で時間のかかるプロセスが合理化された3場合、促進されるだろうより効果的な治療のための緊急の必要性があります。この目的のためには、次のプロトコルは、前臨床モデルへの適用 2 齧歯類飲酒広く AUD11の神経生物学の基礎を確認するために使用を示します。具体的には、本書で紹介するメソッドは、アルコールを減らすことで候補化合物の有効性を評価することが「中程度」、「飲み騒ぎ」シナリオ 2 本選択 (TBC) を利用した、暗い (DID) パラダイムの中で飲む消費それぞれ。両方のパラダイムを調べる非オペラント エタノール自己管理、というマウス経口と意志で、エタノールを摂取したがって例示高顔し人間のアルコール依存症11のモデルとしての妥当性を構築します。
TBC 飲んで、またとして知られている飲料、嗜好飲料、自由に選択または社会の飲酒で、ソリューションの 2 つのボトルが家のケージで継続的に利用できます。1 ボトルは、水を含むし、薄めたエタノール、エタノールの濃度を変えることができるというを格納 (e.g。、5-30% v/v)11,12。マウスは両方のボトルに常時アクセスを持って、したがって、どのくらい各ボトルから飲むことを選択できます。
このモデルは、エタノール好み比 (エタノール消費 ÷ 総容積液消費量) だけでなく、各マウス (g/kg) のエタノールを評価します。それはマウス、または特定の遺伝子操作後の異なる系統間で飲酒レベルを比較する使用 (e.g、遺伝子ノックアウトまたはノックダウン) と血中エタノール濃度 (Bec) 人間で見られるものと同様の結果と。モデレート13,14で飲みます。
DID の手順、暗いサイクルの開始後 3 時間でホーム ケージのボトル入り飲料水は飲んでセッション アクセスが制限の 20% (v/v) エタノールのボトルと交換されます。飲み会は、4 日目に連続した 4 日間のサイクル、1 ~ 3 日の永続的な 2 h と 4 h として発生します。1-3 日は、4 日目にテストする前にアルコール habituation 期間として機能します。その結果、マウスは確実に Bec を達成するために十分なエタノールを消費する > 100 mg/dL とその結果、どんちゃん騒ぎ飲むことは13、14,15は、人間の中毒の行動への影響を展示します。水、飲み会以外のすべての回で利用できます。
制限付きアクセスを飲んでのいくつかのバリエーションがあります。たとえば、断続的にアクセス モデルで平日と週末には、それぞれ1624 時間および 48 時間の休薬期間でマウスは月曜日、水曜日、および金曜日にのみ (1 つの含んでいる水と他の含まれている 20% (v/v) エタノール) 2 つのボトルを受け取る。断続的にアクセスの数週間後、マウスは徐々 し、最終的に BEC DID モデルで観察されるものと同様の達成レベルを飲んで自らエスカレートします。DID、ただし、どんちゃん騒ぎのような飲酒行動を評価するために最も一般的に使用されるモデルであることが表示されます。断続的な飲酒の他のモデルが存在するが、彼らは食糧へのアクセス制限に依存や自主的な人間のアルコール消費量16以下の代表になる自主的な自己管理の商工会議所による増加を水蒸気します。
Protocol
Representative Results
Discussion
世界中の概算では、7600 万人がアルコール使用障害 (AUD) の診断を正当化する条件を満たしています。残念ながら、現在利用可能な医薬の治療法はほとんど効果がないとさらなる発展この臨床人口20のニーズを相殺する必要があります。この目的のために次のプロトコル 2 つのパラダイムを飲む最も基本的な齧歯動物のチームパワーがこの努力を促進することを目的: 2 つのボ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
一部、研究によって付与 SC CTSI/NIH/NCRR にこの作業はサポートされている/NCATS – UL1TR000130 (D.L.D.)、AA022448 (D.L.D.)、南カリフォルニア大学薬学部。
Materials
| 1 L graduated cylinder | VWR | https://us.vwr.com/store/product/20935285/marisco-single-scale-cylinder-graduates-john-m-maris-co | To prepare ethanol solution. |
| 1 L glass bottle | Pyrex (Fisher Scientific) | https://www.fishersci.com/shop/products/pyrex-reusable-media-storage-bottles-12/p-42752 | To prepare ethanol solution. |
| 100 mL graduated cylinder | Fisher Scientific | https://www.fishersci.com/shop/products/kimble-chase-kimax-class-a-to-contain-graduated-cylinders-8/p-4369311 | To prepare ethanol solution. |
| Analox | One potential method of analyzing DID blood samples is by using the analox machine | ||
| ball-bearing sipper tubes | Ancare Corp. | http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point | Length: 2.5 inches, Diameter: 5/16 inches, Model: TD100 |
| C57BL/6J Mice | Jackson lab | https://www.jax.org/strain/000664 | May also come from internal breeding colony |
| disposable serological pipets | VWR International (VWR) | https://us.vwr.com/store/product/4760455/vwr-disposable-serological-pipets-polystyrene-sterile-plugged | 10 mL, 18 mL, or 25 mL |
| ethanol, pure, 190 proof (95%), USP, KOPTEC | Decon Labs (VWR) | https://us.vwr.com/store/product/4542412/ethanol-pure-190-proof-95-usp-koptec | — |
| heat gun | Master Appliances Corp. | http://www.masterappliance.com/master-heat-guns-kits/ | |
| heat shrink tubing | — | — | Diameter: 3/8 inches |
| industrial knife/blade | — | — | — |
| metal cage plate | — | — | Should be available through the university/institutional vivarium |
| mouse RO water | — | — | Should be available through the university/institutional vivarium |
| portable electronic scale | Ohaus (VWR) | https://us.vwr.com/store/product/4789377/portable-electronic-cs-series-scales-ohaus | — |
| red light headlamp | nyteBright (Amazon) | https://www.amazon.com/LED-Headlamp-Flashlight-Red-Light/dp/B00R0LMMF8/ref=sr_1_1?ie=UTF8&qid=1499591137&sr=8-1-spons&keywords=red+lamp+headlamp&psc=1 | — |
| silicone stoppers | Fisher | — | — |
| thermometer | Fisher Scientific | https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-scientific-hygro-thermometer-clock-large-display-2/p-4077232 | — |
| weigh boat | VWR International (VWR) | https://us.vwr.com/store/product/16773534/vwr-pour-boat-weighing-dishes | The lid from a pipete tip box is an appropriate alternative |
Referências
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