Avaliação sistemática de bem-estar em camundongos para procedimentos com anestesia geral
Summary
Desenvolvemos um protocolo para avaliar o bem-estar em ratos durante procedimentos com anestesia geral. Uma série de parâmetros comportamentais, indicando níveis de bem-estar, bem como metabólitos de glicocorticoides foram analisados. O protocolo pode servir como uma ajuda geral para estimar o grau de gravidade de forma científica, centrada no animal.
Abstract
De acordo com a 3R princípio (substituição, redução e refinamento) desenvolvido por Russel e Burch, investigação científica deve usar alternativas à experimentação animal, sempre que possível. Quando não há alternativa à experimentação animal, o número total de animais de laboratório usado deve ser o mínimo necessário para obter dados valiosos. Além disso, devem ser aplicadas medidas de refinamento adequado para minimizar a dor, sofrimento e angústia que acompanha o procedimento experimental. As categorias usadas para classificar o grau de dor, sofrimento e angústia são não-cobrança, leve, moderada ou grave (UE Directiva 2010/63). Para determinar quais categorias se aplicam em casos individuais, é crucial usar ferramentas cientificamente.
O protocolo de well-being-avaliação apresentado aqui é projetado para procedimentos durante o qual anestesia geral. O protocolo incide sobre comportamentos de actividade, o rato careta escala e luxo de gaiola em casa como burrowing e ninho edifício comportamento como indicadores de bem-estar. Ele também usa o paradigma exploratório livre de comportamento relacionados à ansiedade do traço. Metabólitos de corticosterona fecais como indicadores de estresse agudo são medidos no período pós-anestésica-24h.
O protocolo fornece informações cientificamente sólidas sobre o bem-estar dos ratos após anestesia geral. Devido à sua simplicidade, o protocolo pode facilmente ser adaptado e integrado em um estudo planejado. Embora ele não fornece uma escala para classificar o perigo em categorias de acordo com a directiva da União Europeia 2010/63, pode ajudar os pesquisadores estimar o grau de gravidade de um procedimento usando dados cientificamente. Ele fornece uma maneira de melhorar a avaliação do bem-estar de uma forma científica, centrada no animal.
Introduction
UE Directiva 2010/631 estipula que o princípio do 3R (substituição, redução, refinamento) desenvolvido por Russel e Burch2 deve ser aplicada sempre que a experimentação animal é necessária. O objetivo final da directiva da UE é para se livrarem de todos os testes em animais, mas a directiva reconhece que, por enquanto, algumas experiências com animais são ainda necessários para conduzir a pesquisa que irá proteger a saúde humana e animal. Assim, se um experimento animal não pode ser substituído por qualquer método alternativo, apenas o número mínimo de animais de laboratório é para ser usado para obter resultados fiáveis. Além disso, a quantidade de dor, sofrimento e angústia que acompanha procedimentos experimentais deve ser minimizada através de medidas adequadas de refinamento. União Europeia Directiva 2010/63 estipula que a gravidade de um procedimento deve ser prospectivamente classificada como letal, leve, moderada ou grave1. Classificação de gravidade é decidido em uma base caso-a-caso, é importante ter ferramentas cientificamente para estimar a gravidade de um determinado procedimento.
Folhas de pontuação, como proposto por Morton e Griffith3 são uma ferramenta essencial na detecção de quaisquer desvios do estado normal, incluindo os efeitos negativos sobre o bem-estar4. Folhas de pontuação são usadas para determinar retrospectivamente a dor, o sofrimento, e o sofrimento causado por uma experiência e foco em mudanças visíveis no estado físico de cada animal (por exemplo, peso de corpo, peles, marcha). Embora, VIII do anexo da Directiva 2010/63 fornece exemplos de cada categoria de severidade, pesquisadores ainda falta ferramentas para estimar o grau de gravidade de um determinado procedimento usando cientificamente com base em dados.
A ausência de indicadores que mostram o bem-estar negativo não é a única maneira de determinar o estado do animal; a presença de indicadores apontando para bem-estar positivo é também importante5,6,7,8. Por exemplo, animais exibir comportamentos de luxo como a construção de galerias e ninho edifício comportamento apenas quando todas as suas necessidades essenciais sejam atendidas. Se o bem-estar é reduzido, comportamentos de luxo são os primeiros a recusar a5,7. Protocolos para ser utilizado na avaliação de bem-estar devem incluir indicadores apontando para o físico, fisiológico/bioquímicos e Estados psicológicos dos animais para avaliar o seu bem-estar em uma forma detalhada e abrangente9.
Dentro do contexto de requinte, um protocolo foi desenvolvido para atender a esses requisitos e avaliar os efeitos de um procedimento envolvendo anestesia geral sobre o bem-estar dos ratos10. Ao mesmo tempo, o objetivo era minimizar qualquer estresse adicional para permitir a fácil integração do protocolo em uma determinada experiência. O protocolo considera a escoar-se comportamento, comportamento de gaiola em casa como atividade, ingestão de alimentos e aninhamento e comportamento relacionados à ansiedade do traço. Além disso, inclui a escala de careta de Mouse (MGS) e a análise não-invasiva de metabólitos de corticosterona em fezes. O protocolo é projetado para facilitar a avaliação do bem-estar de uma forma científica e centrada no animal e para fornecer informações sobre o bem-estar que oferece suporte à classificação do grau de severidade. Além de papéis, pode fornecer informações úteis para a classificação de gravidade de um procedimento. Como o protocolo é fácil de realizar e não requer extenso equipamento, pode ser integrado em um experimento em andamento sem influenciar os resultados de um estudo. Note-se que a pesquisa Animal: relatórios no Vivo experimentos (chegada) directriz11 é para ser observado em todos os estudos que envolvem as experiências com animais, com o objetivo de melhorar a concepção, análise e emissão de relatórios.
Protocol
Representative Results
Discussion
O protocolo foi originalmente desenvolvido para avaliar o bem-estar de camundongos C57BL/6JRj que recebeu uma única anestesia ou anestesia repetida de isoflurano. Os resultados confirmam que testes de comportamentos de luxo, bem como outras medidas (por exemplo, o paradigma exploratório livre, a MGS, ingestão de alimentos Scelotes) eram sensíveis métodos para avaliar o bem-estar. Isoflurano repetidas anestesia causou efeitos a curto prazo no comportamento de relacionados à ansiedade traço, MGS e comportam…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Graças a Sabine Jacobs para ajudar com a coleta de amostra, Edith Klobetz-Rassam para análise da FCM, PD Dr. med. vet. Henrique. Roswitha Merle para auxiliar com análise estatística e Wiebke Gentner para revisão do manuscrito. O estudo é parte da plataforma de pesquisa de Berlim-Brandemburgo BB3R (www.bb3r.de) e foi financiado pelo Ministério Federal alemão de educação e pesquisa (número de concessão: 031A262A) (www.bmbf.de/en/index.html).
Materials
| Isofluran | CP-Pharma Handelsgesellschaft mbH | 1214 | |
| InfraMot – Sensore Units | TSE Systems | 302015-SENS | |
| InfraMot – Control Units | TSE Systems | 302015-C/16 | |
| InfraMot – Software | TSE Systems | 302015-S | |
| Nestlet N | Ancare – Plexx | NES3600 | |
| Camera EOS 350D | Canon |
Referências
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