Engenharia de tecido renais construções oferecem uma solução para a escassez de órgãos e os efeitos deletérios da diálise. Aqui, descrevemos um protocolo para micro dissecar murino rins para isolamento dos segmentos córtico-medular. Esses segmentos são implantados livre de andaime celular construções, formando organoids renal.
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Artigo de método
Microdissection de segmentos de tecido Renal primária e incorporação com tecnologia de construção romance livre de andaime
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Transplante de rim é agora uma terapia convencional para o estágio final da doença renal. No entanto, com cerca de 96.000 pessoas na lista de espera e apenas um quarto desses pacientes realizar o transplante, há uma grande necessidade de alternativas para aqueles com falência de órgãos. A fim de diminuir as consequências prejudiciais da diálise juntamente com os custos globais de saúde incorre, investigação está em curso em busca de soluções alternativas para a transplantação de órgãos. Implantáveis engenharia de tecido renais celulares construções são uma tal abordagem viável para substituir a funcionalidade renal perdida. Aqui, descrita pela primeira vez, é o microdissection dos rins murino para isolamento de vida córtico segmentos renais. Esses segmentos são capazes de rápida incorporação dentro de construções de andaime-free endotelial-fibroblasto que lhe permitam conexão rápida com a vasculatura hospedeiro uma vez implantada. Os rins do rato adulto foram colhidos em dadores vivos, seguidos pelo estereoscópio microdissection obter segmentos renais 200-300 µm de diâmetro. Várias construções renais foram fabricadas usando segmentos renais primários, colhidos a partir de apenas um rim. Este método demonstra um procedimento que poderia salvar o tecido renal funcional de órgãos que seria caso contrário serão descartados.
Introdução
Doença renal crônica (DRC) é um do atual saúde pública desafios em todo o mundo1. A prevalência de DRC nos Estados Unidos é mais 14% do total da população, com mais de 600.000 americanos sofrem de forma mais severa, estágio final da doença renal (DRT)2. As atuais opções de tratamento disponíveis para aqueles com DRT incluem transplante renal e diálise. Apesar de aproximadamente 25.000 pacientes submetidos a transplante renal a cada ano, um número significativo de pacientes é adicionado anualmente levando a uma grande disparidade entre aqueles que aguardam um órgão de salvamento e aqueles recebendo transplante
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Protocolo
Todos os procedimentos cirúrgicos animais descritos abaixo foram aprovados pelo cuidado institucional do Animal e usar Comité (IACUC) na Medical University of South Carolina, antes de qualquer animais cirurgias ou uso de quaisquer tecidos animais.
1. murino nefrectomia
- Não uma máscara cirúrgica e tampão bouffant para minimizar o risco de contaminação. Manter a esterilidade durante a configuração da área cirúrgica.
- Coloque cortinas cirúrgicas não-fenestrado na mesa de operação.
- Abre a mochila de instrumentos esterilizados para as cortinas estéril. Os instrumentos necessários para nefrectomia incluem 3 hemostatos ....
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Resultados
O protocolo descrito produz aproximadamente 50 segmentos renais por seção de3 mm 2 piramidal do tecido renal. Os segmentos renais que foram processados e fotografados tem componentes tubulares e glomerulares em proporções diferentes (ver Figura 2). Os segmentos intactos foram submetidos a um ensaio para determinar a viabilidade de diferentes segmentos de uma vez a cada 24 horas durante três dias. Verde-fluorescente calceína-AM está presente com ati.......
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Discussão
Métodos usados para projetar o tecido renal vivo construções variam bastante no que se refere o tipo de células e biomateriais utilizados e em muitos casos, estão desatualizados ou não bem caracterizadas na literatura7. Enquanto muitos estão usando células-tronco abordagens ou sintetizando os componentes individuais da arquitetura renal isoladamente, é a perspectiva de recriar artificialmente um órgão inteiro com mais de 26 tipos diferentes de células diferenciadas de suspensões celulares esmagado.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
NIH institucional formação pós-doutoral Grant, NIH-HL-007260
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Descartáveis hospitalares Busse | de campo estéreis não fenestrados | 696 | |
| Descartáveis hospitalares | estéreis Fenestrados | 697 | |
| Pinças de mosquito Halsted 5 Miltex | Mil-7-4 | "Hemostat" curvo no manuscrito | |
| Pinça Graefe extra fina, curvada com dentes | Ferramentas de ciência fina | 11155-10 | Pinça fina com dentes |
| Pinça Graefe Extra Fina, Serrilhada (sem dentes) | Fine Science Tools | 11152-10 | Pinça Fina sem dentes |
| Tesoura Fina - Carboneto de Tungstênio | Fine Science Tools | 14568-09 | Tesoura de Íris |
| Betadine Esfoliante Cirúrgico com Bomba, Povidona-iodo 7.5% | Purdue Products L.P. | 67618-151-17 | |
| Almofada de gaze de algodão estéril (4" x 4") | Fisher Healthcare | 22-415-469 | |
| Solução tamponada com fosfato de Dulbecco | Corning | 21-030-CV | |
| Solução de penicilina/estreptomicina, 100X | Corning | 30-002-Cl | |
| Isoflurano, USP | Fabricante: Piramal, Distribuidor: McKesson | 2254845 | |
| Removedor de Pêlos | Nair | Nair 22600-23307 | Creme de Depilação em texto |
| 200 Prova de Etanol | Decon Laboratories | 2705 | Diluído a 70% Solução |
| de Etanol BioLite 60mm Prato de Cultura de Tecidos | Themo-Scientific | 130181 | |
| Press'n Seal | Glad | 12587-70441 | Aplicado ao Estereoscópio |
| SZX16 Microscópio Estéreo | Olympus | Iluminador de Fibra Óptica SZX16 | |
| Cole Parmer | 41720-20 | ||
| Tubo Autossustentável de Luz Dupla, 23" L Gooseneck | Cole Parmer | EW-41720-60 | |
| Cabo de Bisturi #3 | Estéril Miltex | Mil-4-7 | |
| Tamanho da Lâmina 15 | Bard-Parker | 371115 | |
| Agulha de Calibre 31 1/2 | ThermoFisher Scientific | 14-826F | Becton Dickinson 305106 |
| Dulbecco's Modified Eagle's Medium | Corning | 10-017-CV | |
| Fetal Select 100% Soro Bovino | Atlas Biologicals | FS-0500-AD | |
| Fibroblastos Dérmicos Humanos Normais | Lonza | CC-2511 | |
| Células Endoteliais Microvasculares Adiposas Humanas | Laboratórios de Pesquisa Sciencell | 7200 | |
| Lupas cirúrgicas (2,5x) | Orascoptic | (N / A) Custom Order | |
| FGM-2 (Fibroblasto Basal Medium com FGM-2 SingleQuots Adicionados) | Lonza | CC-3131, CC-4126 | |
| EGM-2 (Endotelial Basal Medium com EGM-2 SingleQuots Adicionados) | Lonza | CC-3156, CC-4176 | |
| Live / Dead Viability / Cytotoxicity Kit para Células de Mamíferos | ThermoFisher Scientific | L3224 | |
| Anticorpo anticitoqueratina-18 | Abcam | ab668 | |
| IgG anti-camundongo de cabra, Alexa Fluor 633 | ThermoFisher Scientific | A-21052 | |
| IgG anti-coelho de cabra, Alexa Fluor 546 | ThermoFisher Scientific | A-11010 | |
| Anticorpo anti-fator de Von Willebrand | Abcam | ab6994 | |
| Albumina, isotiocianato de fluoresceína Conjugado | Sigma Aldrich | A9771-50MG | |
| Hoescht 33342 | BD Pharmingen | 561908 | |
| Antecedentes Buster | Innovex Biosciences | NB306 |
Referências
- Jha, V., et al. Chronic kidney disease: global dimension and perspectives. Lancet. 382 (9888), London, England. 260-272 (2013).
- 2016 USRDS Annual Data Report: Epidemiology of Kidney Disease in the United States. U.S.R.D. , Available from: https://www.usrds.org/2016/download/v2_ESRD_16.pdf (2016).
- Hart, A., et al.
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Reimpressões e permissões
