Summary
Tarm forhindringer er en delvis eller fuldstændig blokering af tarmen, der kan forårsage svære mavesmerter, kvalme, opkastning, og at forhindre passagen af afføring. Denne procedure til at oprette intestinal delvis obsructions i mus er pålidelige i at studere de underliggende patologiske cellevækst og død i tarmen mekanismer.
Abstract
Tarm blokeringer, der hindrer eller blokere peristaltiske bevægelser, kan være forårsaget af abdominal sammenvoksninger og mest gastrointestinale (GI) sygdomme herunder tumorous vækster. Men den cellulære remodeling mekanismer involveret i, og forårsaget af intestinal forhindringer er dårligt forstået. Flere dyremodeller for intestinal forhindringer er blevet udviklet, men musen model er det mest pris/tid effektiv. Modellens musen bruger kirurgisk implantation af en delvis tarmobstruktion (PO), har en høj dødelighed, hvis det ikke er udført korrekt. Desuden, undlader musene modtager PO kirurgi at udvikle hypertrofi, hvis en passende blokade ikke anvendes eller ikke korrekt placeret. Her beskriver vi en detaljeret protokol til PO operation, som giver pålidelig og reproducerbar intestinal forhindringer med en meget lav dødelighed. Denne protokol udnytter en kirurgisk indsatte silikone ring, der omgiver ileum, som delvis blokerer mave bevægelse i tyndtarmen. Den delvise blokering gør tarmen blive dilaterede på grund af standsning af fordøjelsessystemet bevægelse. Dilatation af tarmen inducerer glat muskel hypertrofi på den mundtlige side af ringen, der gradvist udvikler over 2 uger indtil det forårsager død. Den kirurgiske PO musemodel tilbyder en i vivo model hypertrofisk tarmens væv nyttigt for at studere patologiske ændringer i tarmcellerne herunder glatte muskelceller (SMC), interstitielle celler af Cajal (ICC), PDGFRα+, og neuronal celler under udviklingen af intestinal obstruktion.
Introduction
Tarm forhindringer er en delvis eller fuldstændig blokering i små eller store tarmen, som forhindrer fordøjet mad, væske og gas, bevæger sig gennem tarmene1. På grund af obstruktion inducerer blokeringen intestinal væggene til at blive fortykket, forsnævring af lumen2. Intestinal obstruktion kan forekomme som følge af abdominal eller bækken kirurgi, der forårsager abdominal vedhæftning væv dannelse eller fra GI lidelser såsom inflammatoriske tarmsygdomme (Crohns sygdom), diverticulitis, Brok, Tarmslyng, forsnævring, intussusception, forstoppelse, fækulit, pseudo-obstruktion, kræft og tumorer3,4,5. Tarm forhindringer i disse sager føre ofte til hypertrofi af tunica muscularis af tarmen6.
PO af lumen inducerer tarm udspilning, og øger glatte muskulatur lagtykkelse omkring obstruktion som reaktion på behovet for at fortsætte funktionelle peristaltik7,8,9,10, 11,12,13. Dyremodeller for intestinal PO er blevet udviklet for at studere glat muskel hypertrofi i mus7, rotter10, marsvin11, hunde12og katte13 der konsekvent udvikler lignende hypertrofi inden for den intestinal muskel lag.
En musemodel af intestinal PO er den mest omkostningseffektive måde at generere og studere intestinal forhindringer i vivo. Tyndtarmen forhindringer er udført i mus ved at bruge en silikone ring kirurgisk placeres omkring ileum. PO mus viste en tidlig stigning i antallet af celler (hyperplasi), og en stigning i muskel lagtykkelse (hypertrofi) efter PO kirurgi8,15. SMC er den primære plast celler, der vokser i glat muskel lag i svar til hypertrofisk betingelser14, men andre celler såsom ICC og PDGFRα+ celler, der er tæt forbundet med SMC, er også genbefolket. Vi har tidligere rapporteret at PO-mus udvikler hypertrofi i tyndtarmen, i hvilke SMC er dedifferentiated til PDGFRα+ celler, der er meget proliferativ7,15,16. Omvendt, ICC er degenereret og tabt inden for hypertrofisk glat muskel lag under udviklingen af intestinal obsruction7. En anden stor fordel ved PO model er dets evne til at fremkalde ændringer i det enteriske nervesystem og formeringsmateriale neurogen motor mønstre. Den store formerings neurogen motor mønster i mus tyndtarmen er overflytter motoren komplekse (MMC), som er neurogen og kræver ikke ICC eller elektriske langsom bølger17. PO model kan give klart indblik i hvordan MMCs og enterisk nerver er ombygget af delvis obstruktion.
Her foreslår vi en murine protokol for intestinal PO operation ved hjælp af et silikone ring. Mus modtage PO kirurgi pålideligt producere hypertrofi i tunica muscularis af tyndtarmen. Inden for hypertrofisk muskel, er SMC, ICC, PDGFRα+og neuronale celler dramatisk ombygget.
Protocol
Representative Results
Discussion
Vi viste, at mus får den intestinale PO kirurgi, konsekvent og reproducerbar udvikle tarm glat muskel hypertrofi, som efterligner humane tarmobstruktion. Intestinal obstruktion operationer er blevet udviklet til forskellige dyr herunder mus7, rotter10, marsvin11, hund12 og katte13. Musemodel af intestinal obstruktion har tid, omkostninger, størrelse og fænotypiske fordele i forhold til andre større …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forfatterne vil gerne takke Benjamin J Weigler, D.VM, Ph.D. og Walt Mandeville, D.VM (dyr ressourcer & Campus at deltage i dyrlæge, University of Nevada, Reno) for deres fremragende animalske tjenester ydes til såvel mus som deres advokat på kirurgiske procedurer.
Materials
| Surgical drape | Medical and veterinary supplies | SMS40 | 40”X100 yards |
| Underpad, econ, pro plus | Medical and veterinary supplies | MSC281224 | 17×24” |
| Iris scissors | Braintree scientific, Inc | SC-i-130 | |
| Iris scissors | Vantage | V95-304 | |
| Dumont electronic & jeweler tweezers | Dumont | 98-180-3 | |
| Braided absorbable suture | Covidien polysorb | SL-5687G | 5-0, polyglactin |
| Nylon non-absorbable mono filament | AD surgical | S-N618R13 | 6-0, nylon |
| Surgical blade | Dynarex | No.15 | |
| Needle holder | Jacobson microvascular | 36-1342TC | 8.5 inch |
| Scalpel handle | Flinn scientific | AB1049 | |
| Microsurgical scissor | WPI | 503305 | |
| Petrolatum ophthalmic ointment | Puralube VET | 3.5 g | |
| Fluriso (isoflurane) | Vetone | V1 502017 | 250 ml |
| Steri-strip reinforced skin closure | 3M | R1547 | |
| Surgical gloves | Medline | MSG2270 | |
| Ear loop face mask | The safety zone | RS700 | |
| Avant gauze non-woven sponges | Caring | PRM25444 | |
| Surgical cup | Admiral craft OYC-2 | 725-A42 | 2.5 oz |
| Swabstick | ChloraPrep | 260103 | 2% w/v Chlorhexidine Gluconate (CHG) and 70% v/v Isopropyl Alcohol (IPA) |
| Cotton tipped applicator | Puritan | 806-WC | |
| Buprenorphine | Zoo pharm | BZ8069317 | 1 mg/ml |
| Gentamycin sulfate | Vetone | G-6336-04 | 100 mg/ml |
| Fast acting gel cream remover | Veet | 8111002 | |
| Syringe | AHS | AH01T2516 | 1 ml with needle |
| Silicon ring | VWR | 60985-720 | 6 mm in length, 4 mm exterior diameter, 3.5 mm interior diameter |
| C57BL/6 mice | The Jackson Laboratory | 4-6 weeks old |
Referências
- Millat, B., Guillon, F. Physiopathology and principles of intensive care in intestinal obstructions. Rev Prat. 43, 667-672 (1993).
- Tonelli, P. New developments in Crohn’s disease: solution of doctrinal mysteries and reinstatement as a surgically treatable disease. 1. The process is not a form of enteritis but lymphedema contaminated by intestinal contents. Chir Ital. 52, 109-121 (2000).
- Limsrivilai, J. Meta-analytic Bayesian model for differentiating intestinal tuberculosis from Crohn’s disease. Am J Gastroenterol. 112, 415-427 (2017).
- Dvorak, D., Adamova, Z., Bar, T., Slovacek, R. Internal hernia as a cause of small bowel obstruction. Rozhl Chir. 96, 34-36 (2017).
- Massani, M., Capovilla, G., Ruffolo, C., Bassi, N. Gastrointestinal stromal tumour (GIST) presenting as a strangulated inguinal hernia with small bowel obstruction. BMJ Case Rep. , (2007).
- Chen, J., Chen, H., Sanders, M., Perrino, B. A. Regulation of SRF/CArG-dependent gene transcription during chronic partial obstruction of murine small intestine. Neurogastroenterol Motil. 20, 829-842 (2008).
- Chang, I. Y., et al. Loss of interstitial cells of Cajal and development of electrical dysfunction in murine small bowel obstruction. J Physiol. 536 (Pt 2), 555-568 (2001).
- Liu, D. H., et al. Voltage dependent potassium channel remodeling in murine intestinal smooth muscle hypertrophy induced by partial obstruction. PLoS One. 9 (2), e86109 (2014).
- Guo, X., et al. Down-regulation of hydrogen sulfide biosynthesis accompanies murine interstitial cells of Cajal dysfunction in partial ileal obstruction. PLoS One. 7, e48249 (2012).
- Yang, J., Zhao, J., Chen, P., Nakaguchi, T., Grundy, D., Gregersen, H. Interdependency between mechanical parameters and afferent nerve discharge in hypertrophic intestine of rats. Am J Physiol-Gastr L. 310, G376-G386 (2016).
- Zhao, J., Liao, D., Yang, J., Gregersen, H. Biomechanical remodeling of obstructed guinea pig jejunum. J Biomech. 43, 1322-1329 (2010).
- Bowen, E. J., et al. Duodenal Brunner’s glade adenoma causing chronic small intestinal obstruction in a dog. J Small Anim Pract. 53, 136-139 (2012).
- Bettini, G., et al. Hypertrophy of intestinal smooth muscle in cats. Res Vet Sci. 75, 43-53 (2003).
- Macdonald, J. A. Smooth muscle phenotypic plasticity in mechanical obstruction of the small intestine. J Neurogastroenterol Motil. 20, 737-740 (2008).
- Ha, S. E., et al. Transcriptome analysis of PDGFRα+ Cells identifies T-types Ca2+ channel CACNA1G as a new pathological marker for PDGFRα+ cell hyperplasia. PLoS One. 12, e0182265 (2017).
- Park, C., et al. Serum response factor is essential for prenatal gastrointestinal smooth muscle development and maintenance of differentiated phenotype. J Neurogastroenterol Motil. 21, 589-602 (2015).
- Spencer, N. J., Sanders, K. M., Smith, T. K. Migrating motor complexes do not require electrical slow waves in the mouse small intestine. J Physiol. 553, 881-893 (2003).
- Langford, D. J., et al. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nat Methods. 7, 447-449 (2010).
- Terez, S. D., Notari, L., Sun, R., Zhao, A. Mechanisms of smooth muscle responses to inflammation. Neurogastroenterol Motil. 24, 802-811 (2012).
- Chen, W., et al. Smooth muscle hyperplasia/hypertrophy is the most prominent histological change in Crohn’s fibrostenosing bowel strictures: A semiquantitative analysis by using a novel histological grading scheme. J Crohns Colitis. 11, 92-104 (2017).
- Huizinga, J. D., Chen, J. H. Interstitial Cells of Cajal: Update on Basic and Clinical Science. Curr Gastroenterol Rep. 16, 363 (2014).
- Jirkof, P., Touvieille, A., Cinelli, P., Arras, M. Buprenorphine for pain relief in mice: repeated injections vs sustained-release depot formulation. Lab Animal. 49, 177-187 (2015).
- Spencer, N. J., Dinning, P. J., Brookes, S. J., Costa, M. Insights into the mechanisms underlying colonic motor patterns. J Physiol. 594, 4099-4116 (2016).
