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Artigo de método

Trombose venosa profunda induzida por estase em camundongos monitorado por ultra-sonografia de alta frequência

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DOI:

10.3791/57392

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13 de abril de 2018

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Neste artigo

Resumo

O presente protocolo descreve as etapas para obter a trombose venosa, usando um modelo de estase. Além disso, estamos usando um método não-invasivo para medir a formação de trombos e resolução ao longo do tempo.

Resumo

Trombose venosa profunda é uma condição comum que afeta 1-2% da população, com uma incidência anual de 1 em 500. Trombose venosa profunda pode levar à morte por embolia pulmonar ou resultados na síndrome pós-trombótica, caracterizada por dor crônica, edema e ulceração, ou em hipertensão pulmonar crônica, resultando em significativa crônica respiratória compromisso. Esta é a mais comum doença cardiovascular após infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral isquêmico e é um desafio clínico para todas as disciplinas médicas, como isso pode complicar o curso de outras doenças como o câncer, doença sistêmica, cirurgia e grande trauma.

Modelos experimentais são necessários para estudar esses mecanismos. O modelo de estase induz o tamanho do trombo consistente e uma quantidade quantificável de trombo. No entanto, é necessário sistematicamente ligate ramos laterais da veia cava inferior para evitar a variabilidade em tamanhos de trombo e qualquer interpretação de dados errôneos. Nós desenvolvemos uma técnica não-invasiva para medir o tamanho do trombo usando a ultra-sonografia. Usando esta técnica, que podemos avaliar o desenvolvimento do trombo e resolução ao longo do tempo, no mesmo animal. Essa abordagem limita o número de ratos necessários para quantificação da trombose venosa consistente com o princípio da substituição, redução e refinamento de animais na investigação. Nós demonstramos que o peso do trombo e análise histológica de trombo tamanho se correlacionam com medição obtidos com ultra-sonografia. Portanto, o presente estudo descreve como induzir trombose venosa profunda em camundongos, usando o modelo de estase de veia cava inferior e como monitorá-lo usando o ultra-som de alta frequência.

Introdução

Tromboembolismo venoso (TEV), que é composto de trombose venosa profunda (TVP) e embolia pulmonar, é a terceira causa principal de morte cardiovascular após infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral. É uma condição comum que afeta 1-2% da população, com uma incidência anual de 1 em 5001. VTE pode levar a: 1) morte por embolia pulmonar; 2) pós-trombótica síndrome, caracterizada por dor crônica, edema e ulceração; ou 3) hipertensão pulmonar crônica, resultando em significativo compromisso respiratório crônico. TeV é uma doença multi fatorial e pode resultar de estase do fluxo de sangue, danos nas paredes dos vasos, e/ou Estados de hiperco....

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Protocolo

Todos os procedimentos foram aprovados pelo institucional Animal conta Comissão de McGill University Montreal, QC, Canadá. Todos os equipamentos necessários é listado na tabela eu.

1. murino (C57BL/6J) protocolo de estase de veia cava inferior

  1. Preparação da cirurgia
    Nota: Esta é uma cirurgia de sobrevivência e, portanto, uma técnica asséptica adequada precisa ser seguido em todos os momentos. Isso inclui certificando-se de todos os materiais estão na mão, limpeza e esterilização de instrumentos antes e entre uso e designando uma área estéril na superfície de trabalho para todo o material estéril.
    1. Esteri....

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Resultados

Modelo de trombose venosa estase

No modelo de estase, ratos são anestesiados, e é feita uma incisão para expor a veia cava inferior (VCI). A incisão é feita no lado esquerdo ou direito do mouse em vez de uma laparotomia mediana de uma forma que não iria interferir com a sonda de ultra-som. A pele e os músculos abdominais são dobra para expor a veia cava inferior (Figura 1). Primeiro.......

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Discussão

Existem várias etapas críticas para a formação de trombo venoso bem sucedida usando o modelo de estase. Indução da trombose venosa profunda é mais desafiador em ratos velhos, devido ao acúmulo de gordura em torno da veia cava inferior e a aorta. Idealmente, os ratos submetidos a este procedimento devem ser de 8 - 10 semanas de idade. Deve ter grande cuidado para não induzir dano endotelial na veia cava inferior durante a dissecção romba e ligadura. Além disso, é crucial para manter o animal em uma incubadora de 34 ° C du.......

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Divulgações

Os autores não têm nada para divulgar.

Agradecimentos

Este trabalho foi financiado por um subsídio do coração e derrame Foundation do Canadá e o Morris e Bella Fainman Family Foundation. Os autores gostaria de agradecer sua ajuda técnica com o sistema de imagens de ultra-som VEVO770 Veronique Michaud.

....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
6-0 perma-mão sutura de sedaEthicon706G
Tesoura CirúrgicaFine Science Tools20830-00
Sutura amarração fórcepsFine Science Tools20830-00
pinça romba (reta e curva)Fine Science Tools20830-00
Agulha DriverFine Science Tools13002-10
Moria Spring ScissorsFine Science Tools15396-00
seringas de 1 mlBD Biosciences
26G agulhasBecton Dickinson & Co.
VEVO 770 Sistema de Imagem de Alta ResoluçãoVisualsonicsNão é mais vendido
SR BuprenorfinaZooPharmDado à LDI por Microscópio de
CirurgiaLeica LeicaM651
Pomada ocular SystanAlcon288/28062-0
2x2 gaze estérilCDMV# 104148
ponta de algodão Aplicadoresda
fita cirúrgica hipoalergênica JGH TransporeCDMV#7411
Gel de ultrassom (Aquasonic-100)Dufort & Lavigne#AKEN4061
Incubadoradispomada de
isoflurano
, mangueiras e equipamentos de administraçãoDispomed
Nair
Almofada dura aquecida com águaBraintree Scientific, Inc.#HHP-2
Bomba de água do aquecedor Gaymar TP500MATVET Inc.#R-500305
Lâmpada de aquecimento infravermelhoelectrimat inc.#1R175R-PAR
Temperatura retal do rato propeemkaTECHNOLOGIES
Água estérilda JGH
Veterinária da câmara anestésica JGH Removedor de pêlos

Referências

  1. Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).
  2. McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes b....

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Reimpressões e permissões

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