O presente protocolo descreve as etapas para obter a trombose venosa, usando um modelo de estase. Além disso, estamos usando um método não-invasivo para medir a formação de trombos e resolução ao longo do tempo.
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Artigo de método
O presente protocolo descreve as etapas para obter a trombose venosa, usando um modelo de estase. Além disso, estamos usando um método não-invasivo para medir a formação de trombos e resolução ao longo do tempo.
Trombose venosa profunda é uma condição comum que afeta 1-2% da população, com uma incidência anual de 1 em 500. Trombose venosa profunda pode levar à morte por embolia pulmonar ou resultados na síndrome pós-trombótica, caracterizada por dor crônica, edema e ulceração, ou em hipertensão pulmonar crônica, resultando em significativa crônica respiratória compromisso. Esta é a mais comum doença cardiovascular após infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral isquêmico e é um desafio clínico para todas as disciplinas médicas, como isso pode complicar o curso de outras doenças como o câncer, doença sistêmica, cirurgia e grande trauma.
Modelos experimentais são necessários para estudar esses mecanismos. O modelo de estase induz o tamanho do trombo consistente e uma quantidade quantificável de trombo. No entanto, é necessário sistematicamente ligate ramos laterais da veia cava inferior para evitar a variabilidade em tamanhos de trombo e qualquer interpretação de dados errôneos. Nós desenvolvemos uma técnica não-invasiva para medir o tamanho do trombo usando a ultra-sonografia. Usando esta técnica, que podemos avaliar o desenvolvimento do trombo e resolução ao longo do tempo, no mesmo animal. Essa abordagem limita o número de ratos necessários para quantificação da trombose venosa consistente com o princípio da substituição, redução e refinamento de animais na investigação. Nós demonstramos que o peso do trombo e análise histológica de trombo tamanho se correlacionam com medição obtidos com ultra-sonografia. Portanto, o presente estudo descreve como induzir trombose venosa profunda em camundongos, usando o modelo de estase de veia cava inferior e como monitorá-lo usando o ultra-som de alta frequência.
Tromboembolismo venoso (TEV), que é composto de trombose venosa profunda (TVP) e embolia pulmonar, é a terceira causa principal de morte cardiovascular após infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral. É uma condição comum que afeta 1-2% da população, com uma incidência anual de 1 em 5001. VTE pode levar a: 1) morte por embolia pulmonar; 2) pós-trombótica síndrome, caracterizada por dor crônica, edema e ulceração; ou 3) hipertensão pulmonar crônica, resultando em significativo compromisso respiratório crônico. TeV é uma doença multi fatorial e pode resultar de estase do fluxo de sangue, danos nas paredes dos vasos, e/ou Estados de hiperco....
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Todos os procedimentos foram aprovados pelo institucional Animal conta Comissão de McGill University Montreal, QC, Canadá. Todos os equipamentos necessários é listado na tabela eu.
1. murino (C57BL/6J) protocolo de estase de veia cava inferior
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Modelo de trombose venosa estase
No modelo de estase, ratos são anestesiados, e é feita uma incisão para expor a veia cava inferior (VCI). A incisão é feita no lado esquerdo ou direito do mouse em vez de uma laparotomia mediana de uma forma que não iria interferir com a sonda de ultra-som. A pele e os músculos abdominais são dobra para expor a veia cava inferior (Figura 1). Primeiro.......
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Existem várias etapas críticas para a formação de trombo venoso bem sucedida usando o modelo de estase. Indução da trombose venosa profunda é mais desafiador em ratos velhos, devido ao acúmulo de gordura em torno da veia cava inferior e a aorta. Idealmente, os ratos submetidos a este procedimento devem ser de 8 - 10 semanas de idade. Deve ter grande cuidado para não induzir dano endotelial na veia cava inferior durante a dissecção romba e ligadura. Além disso, é crucial para manter o animal em uma incubadora de 34 ° C du.......
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Os autores não têm nada para divulgar.
Este trabalho foi financiado por um subsídio do coração e derrame Foundation do Canadá e o Morris e Bella Fainman Family Foundation. Os autores gostaria de agradecer sua ajuda técnica com o sistema de imagens de ultra-som VEVO770 Veronique Michaud.
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 6-0 perma-mão sutura de seda | Ethicon | 706G | |
| Tesoura Cirúrgica | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Sutura amarração fórceps | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| pinça romba (reta e curva) | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Agulha Driver | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Moria Spring Scissors | Fine Science Tools | 15396-00 | |
| seringas de 1 ml | BD Biosciences | ||
| 26G agulhas | Becton Dickinson & Co. | ||
| VEVO 770 Sistema de Imagem de Alta Resolução | Visualsonics | Não é mais vendido | |
| SR Buprenorfina | ZooPharm | Dado à LDI por Microscópio de | |
| Cirurgia | Leica Leica | M651 | |
| Pomada ocular Systan | Alcon | 288/28062-0 | |
| 2x2 gaze estéril | CDMV | # 104148 | |
| ponta de algodão Aplicadores | da | ||
| fita cirúrgica hipoalergênica JGH Transpore | CDMV | #7411 | |
| Gel de ultrassom (Aquasonic-100) | Dufort & Lavigne | #AKEN4061 | |
| Incubadora | dispomada de | ||
| isoflurano | |||
| , mangueiras e equipamentos de administração | Dispomed | ||
| Nair | |||
| Almofada dura aquecida com água | Braintree Scientific, Inc. | #HHP-2 | |
| Bomba de água do aquecedor Gaymar TP500 | MATVET Inc. | #R-500305 | |
| Lâmpada de aquecimento infravermelho | electrimat inc. | #1R175R-PAR | |
| Temperatura retal do rato prope | emkaTECHNOLOGIES | ||
| Água estéril | da JGH |
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