Induite par la ponction de néovascularisation Iris comme un modèle de souris de Rubeosis Iridis
Summary
La néovascularisation IRIS, une complication fréquente de la maladie ischémique de la rétine, peut conduire à vue en danger de glaucome néovasculaire. Nous décrivons ici un protocole murin pour induire la néovascularisation iris expérimentaux qui peut-être être utilisée pour l’évaluation non invasive de substances modulant l’angiogenèse.
Abstract
Nous décrivons un modèle de la néovascularisation iris induite par ponction comme un modèle général pour l’évaluation non invasive de l’angiogenèse. Le modèle est également pertinent pour cibler un glaucome néovasculaire, une complication vue en danger de la rétinopathie diabétique. Cette méthode est basée sur l’induction de la réponse vasculaire iris par une série d’auto-obturant uvées crevaisons sur souris BALB/c et profite de la maturation postnatale du système vasculaire oculaire de souris. Souriceaux subissent uvées crevaisons de jour après la naissance 12.5, quand les chiots naturellement ouvrent leurs yeux, jusqu’au jour après la naissance 24,5. Grâce à la transparence de la cornée, la vascularisation iris peut être analysée facilement à travers le temps par des méthodes non invasives en vivo . En outre, l’iris translucide de souris BALB/c peut être flatmounted pour l’analyse détaillée immunohistologiques minime non-spécifiques fond de coloration. Dans ce modèle, angiogenèse est principalement conduit par l’inflammation et le plasminogène activation de systèmes. Le modèle induite par la ponction est le premier à induire la néovascularisation iris chez les petits rongeurs et a l’avantage de permettre de direct non invasif en vivo analyse du processus angiogénique. En outre, le modèle peut être associé angiogénique substances modulant, qui met en évidence son potentiel dans l’étude de l’angiogenèse dans une perspective in vivo .
Introduction
L’iris, ainsi que le corps ciliaire et la choroïde, compose de l’uvée, qui est un tissu plus vascularisé de le œil. Système vasculaire Iris est essentiel pour maintenir l’homéostasie dans la chambre antérieure de le œil. Par suite de l’abondantes connexions anastomose entre les artères et les veines, vaisseaux sanguins iris fournissent nutriments et alimentation en oxygène non seulement à l’iris elle-même, mais à l’ensemble du segment antérieur de l’ oeil1.
La formation de nouveaux vaisseaux, ou angiogenèse de celles existantes, est fondamentale dans les processus physiologiques, tels que le développement et la guérison2. L’angiogenèse est finement régulée par une multitude de facteurs canoniques comme facteur de croissance endothélial vasculaire (VEGF) et inhibiteur de l’activateur du plasminogène (PAI), ainsi que plusieurs facteurs inflammatoires, et un déséquilibre de ces facteurs peut mener à pathologiques 3de l’angiogenèse.
Dans le œil, une néovascularisation est la cause de maladies mortelles vue, telles que la rétinopathie diabétique proliférante (PDR) et le glaucome néovasculaire (NVG). Dans ces maladies oculaires, la néovascularisation focale est couramment située dans les tissus rétiniens, encore le déséquilibre inflammatoires et de facteurs angiogéniques dans les deux postérieures et antérieures chambres oculaires de le œil a été associée par rubeosis iridis, le terme clinique pour iris néoangiogenèse pathologique4. Ces pathologies indiquent la capacité de l’iris adulte pour subir l’angiogenèse. Chez les souris, système vasculaire oculaire est immature après la naissance et poursuit après l’accouchement de la maturation. Cette particularité du développement est exploitée dans le modèle murin de la rétinopathie induite par l’oxygène, un modèle qui imite étroitement l’état clinique de la rétinopathie de la prématurité5. En outre, l’angiogenèse et l’inflammation jouent un rôle essentiel dans la guérison des mécanismes6, et la guérison elle-même a été associée à l’angiogenèse modèles7.
Dans cette étude, nous décrivons un modèle de la néovascularisation iris induite par la ponction. Uvée crevaisons sont effectués près de la limite extérieure de la limbe, qui induisent une néovascularisation iris en déclenchant la système de cicatrisation. Grâce à la transparence de la cornée, la vascularisation de l’iris peut être analysé facilement in vivo par des méthodes non invasives. Les yeux crevés présentent une augmentation du lit vasculaire dans l’iris, qui a été associée à une augmentation de l’activation du plasminogène et marqueurs inflammatoires8. Le modèle présenté possède un grand potentiel comme un nouvel outil pour étudier l’angiogenèse et criblage de composés angiogénique et permet direct en vivo visualisation des processus angiogénique.
Protocol
Representative Results
Discussion
Dans le présent protocole, une nouvelle méthode pour l’induction de la réponse vasculaire iris par ponction uvée est présentée. La piqûre déclenche les mécanismes de guérison de blessure et favorise des réponses vasculaires dans l’iris10,11. C’est en accord avec les pathologies oculaires, tels que le PDR et les lunettes de vision nocturne, où réponses angiogénique exacerbée de la rétine dans le segment postérieur de le œil son point culmin…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs remercient Linnea Tankred et Diana Rydholm pour l’élevage.
Materials
| Bonn eye scissors | Bausch & Lomb | 23060 | |
| Clayman-Vannas curved scissors | Bausch & Lomb | E3383 C | |
| Clayman-Vannas straight scissors | Bausch & Lomb | E3383 S | |
| Objective adapter for camera | Handcrafted | N/A | Or any system that allows adapting a camera to the microscope |
| Heating Pad 100-110 watts | Non Applicable | N/A | Available in pet/veterinarian stores |
| Hypodermic 30g beveled needle | KDM GmBH germany | 911914 | |
| Iphone 4S | Apple | Non Applicable | Or other high resolution image acquistion device |
| Isoflurane | Baxter | KDG 9623 | |
| McPherson tying forceps | Bausch & Lomb | E1815 S | |
| Micro tying forceps | Bausch & Lomb | 63140 | |
| Minims tetracaine hydrochloride | Bausch & Lomb | N/A | 1 % (w/v) Eye Drops |
| Neutral-buffered formalin | Bioreagens | 0018-40 | |
| Normal saline solution | Fresenius Kabi | 210352 | 0.9 % (w/v) NaCl in injectable water |
| Phosphate-buffered saline | ThermoFisher Scientific | 10010023 | Balanced and buffered PBS pH 7.4 |
| Petri dish 10 cm | Starstedt | 83.3902 | |
| Petri dish 3 cm | Starstedt | 83.3900 | |
| Safe Seal Tube 2.0 mL | Starstedt | 72.685.200 | Or any eppendorf style tubes |
| TC plate 96-well | Starstedt | 83.3924 | |
| Transfer pipette 3.5 mL | Starstedt | 86.1171 | Or any other Pasteur pipette style |
| Univentor 400 anesthesia unit | Univentor Limited | N/A | Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia |
| Wild M650 surgical microscope | Wild Heerbrugg | N/A | Or other surgical or magnifying stereoscope |
Referências
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