Neovascularization del diafragma como un modelo de ratón de iridis del rubeosis inducida por la punción
Summary
Neovascularization del diafragma, una complicación común de la enfermedad de retina isquémica, puede llevar a glaucoma neovascular avistar-que amenaza. Aquí, describimos un protocolo murino para inducir neovascularización de iris experimental que puede utilizarse para la evaluación no invasiva de las sustancias de modulación de angiogénesis.
Abstract
Describimos un modelo del neovascularization del diafragma inducida por la punción como un modelo general para la evaluación no invasiva de la angiogénesis. El modelo también es relevante para dirigidos a glaucoma neovascular, una complicación peligrosa para la vista de la retinopatía diabética. Este método se basa en la inducción de la respuesta vascular del iris por una serie de pinchazos uveales autoadhesivos en ratones BALB/c y se aprovecha de la maduración postparto de vasculatura ocular de ratón. Crías de ratón son sometidos a pinchazos uveales de día postnatal 12.5, cuando los cachorros abran los ojos, naturalmente hasta día postnatal 24.5. Debido a la transparencia de la córnea, vasculatura iris puede analizarse fácilmente a través del tiempo por métodos no invasivos en vivo . Además, el diafragma semitransparente de ratones BALB/c puede ser flatmounted para el análisis detallado immunohistologic con tinción de fondo inespecífica mínimo. En este modelo, la angiogénesis es impulsada principalmente por las inflamatorias y sistemas de activación del plasminógeno. El modelo inducida por punción es el primero en inducir neovascularización de iris en pequeños roedores y tiene la ventaja de permitir la directa no invasiva en vivo análisis del proceso angiogénico. Por otra parte, el modelo puede combinarse con sustancias modulación angiogenic, que destaca su potencial en el estudio de la angiogénesis con perspectiva en vivo .
Introduction
El iris, junto con el cuerpo ciliar y la coroides, compone de la úvea, que es el tejido más vascularizado del ojo. Vasculatura del diafragma es esencial para mantener la homeostasis en la cámara anterior del ojo. Como resultado de abundantes conexiones anastomóticas entre arterias y venas, los vasos sanguíneos de iris proporcionan nutrientes y suministro de oxígeno no sólo el diafragma sí mismo, sino a todo segmento anterior del ojo1.
La formación de nuevos vasos sanguíneos, o angiogénesis de las ya existentes, es fundamental en los procesos fisiológicos, tales como desarrollo y2de cicatrización. Angiogénesis está finamente reglamentada por multitud de factores canónicos, como factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y el inhibidor del activador del plasminógeno (PAI), así como múltiples factores inflamatorios, y un desequilibrio de estos factores puede llevar a patológica 3de la angiogénesis.
En el ojo, la neovascularización es la causa de enfermedades peligrosas para la vista, como la retinopatía diabética proliferativa (PDR) y el glaucoma neovascular (GNV). En estas enfermedades oculares, la neovascularización focal se encuentra comúnmente en los tejidos de la retinales, sin embargo, el desequilibrio en inflamatorias y factores angiogénicos en ambas las posteriores y anteriores oculares cámaras del ojo se ha asociado con rubeosis iridiana, la término clínico para iris neoangiogenesis patológica4. Estas patologías indican la capacidad del diafragma adulto a angiogénesis. En ratones, vasculatura ocular es inmaduro después del nacimiento y maduración postparto. Esta peculiaridad del desarrollo se explota en el modelo de ratón de la retinopatía inducida por el oxígeno, un modelo que imita muy de cerca la condición clínica de retinopatía de la prematuridad5. Además, Angiogénesis e inflamación juegan un papel fundamental en los mecanismos6de heridas y cicatrización se ha asociado con angiogénesis modelos7.
En este estudio, describimos un modelo del neovascularization del diafragma inducida por la punción. Uveales punciones se realizan cerca del límite exterior del limbus, que inducen neovascularización del iris mediante la activación del sistema de cicatrización. Debido a la transparencia de la córnea, vasculatura del iris puede ser analizado fácilmente en vivo por métodos no invasivos. Pinchado los ojos presentan un aumento del lecho vascular en el iris, que se ha asociado con un aumento de la activación de plasminógeno y marcadores inflamatorios8. El modelo presentado tiene un gran potencial como una nueva herramienta para estudiar la angiogenesis y angiogénicos compuestos de detección y permite la visualización directa en vivo de los procesos angiogénicos.
Protocol
Representative Results
Discussion
En el presente Protocolo, se presenta un método novedoso para la inducción de la respuesta vascular del iris por punción uveal. La punción desencadena mecanismos curativos de la herida y promueve las respuestas vasculares en el iris10,11. Esto está de acuerdo con las patologías oculares, como el PDR y NVG, donde culminan angiogénicos exacerbado las respuestas de la retina en el segmento posterior del ojo en la condición clínica de rubeosis iridiana, una …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores agradecen a Linnea Tankred y Diana Rydholm para la ganadería.
Materials
| Bonn eye scissors | Bausch & Lomb | 23060 | |
| Clayman-Vannas curved scissors | Bausch & Lomb | E3383 C | |
| Clayman-Vannas straight scissors | Bausch & Lomb | E3383 S | |
| Objective adapter for camera | Handcrafted | N/A | Or any system that allows adapting a camera to the microscope |
| Heating Pad 100-110 watts | Non Applicable | N/A | Available in pet/veterinarian stores |
| Hypodermic 30g beveled needle | KDM GmBH germany | 911914 | |
| Iphone 4S | Apple | Non Applicable | Or other high resolution image acquistion device |
| Isoflurane | Baxter | KDG 9623 | |
| McPherson tying forceps | Bausch & Lomb | E1815 S | |
| Micro tying forceps | Bausch & Lomb | 63140 | |
| Minims tetracaine hydrochloride | Bausch & Lomb | N/A | 1 % (w/v) Eye Drops |
| Neutral-buffered formalin | Bioreagens | 0018-40 | |
| Normal saline solution | Fresenius Kabi | 210352 | 0.9 % (w/v) NaCl in injectable water |
| Phosphate-buffered saline | ThermoFisher Scientific | 10010023 | Balanced and buffered PBS pH 7.4 |
| Petri dish 10 cm | Starstedt | 83.3902 | |
| Petri dish 3 cm | Starstedt | 83.3900 | |
| Safe Seal Tube 2.0 mL | Starstedt | 72.685.200 | Or any eppendorf style tubes |
| TC plate 96-well | Starstedt | 83.3924 | |
| Transfer pipette 3.5 mL | Starstedt | 86.1171 | Or any other Pasteur pipette style |
| Univentor 400 anesthesia unit | Univentor Limited | N/A | Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia |
| Wild M650 surgical microscope | Wild Heerbrugg | N/A | Or other surgical or magnifying stereoscope |
Referências
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