Isolamento de células humanas primárias do Decidual de membranas fetais de termo placentas

Tali Farine; Michael Parsons; Stephen Lye; Oksana Shynlova

doi:10.3791/57443

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Artigo de método

Isolamento de células humanas primárias do Decidual de membranas fetais de termo placentas

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DOI:

10.3791/57443

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30 de abril de 2018

Tali Farine¹^,² , Michael Parsons² , Stephen Lye¹^,²^,³ , Oksana Shynlova¹^,²^,³

¹Department of Physiology, University of Toronto, ²Lunenfeld-Tanenbaum Research Institute, Sinai Health System, ³Department of Obstetrics and Gynecology, University of Toronto

Neste artigo

Resumo

Este protocolo demonstra um método para o isolamento de células de decidual humanas primários coletados de membranas fetais de placentas de termo que podem ser usadas para uma variedade de aplicações (ou seja, imunocitoquímica, citometria de fluxo, etc.) com o objetivo para estudar o papel das populações de células diferentes em complicações na gravidez.

Resumo

A decídua, também conhecida como o endométrio grávida, é um tecido reprodutivo criticamente importante. Células decidual, compostas principalmente de células do estroma decidualized e células do sistema imunológico, são responsáveis pela secreção de fatores hormonais e inflamatórias que são críticos para a implantação bem-sucedida do blastocisto, desenvolvimento da placenta e desempenhar um papel iniciação de trabalho a termo e prematuros. Muitas complicações na gravidez podem surgir de perturbações de um delicado equilíbrio de populações de células diferentes compreendendo decídua. Alterações na proporção de tipos específicos de célula decidual podem atrapalhar esses processos cruciais e aumentar o risco de desenvolver complicações graves de gravidez, tais como falha de implantação do embrião, restrição de crescimento intra-uterino, pré-eclâmpsia e trabalho de parto prematuro. O protocolo descrito aqui demonstra um custo e tempo método eficaz para o isolamento de células humanas primárias de decidual coletado de membranas fetais de placentas de termo. Combinando a digestão enzimática e gentil ruptura mecânica do tecido decidual, obteve-se um alto rendimento de células decidual com virtualmente nenhuma contaminação do córion. Importante, células isoladas decidual foram caracterizadas (células do estroma (55-60%), leucócitos (35%), epitelial (1%) ou as células do trofoblasto (0,01%)) e mantida alta viabilidade (80%), que foi confirmada por multicolor ensaio de citometria de fluxo de imagem. Este protocolo é específico para o parietalis decídua e pode ser adaptado a placentas de primeiro e segundo trimestre. Uma vez isolado, decidual células podem ser usadas para uma infinidade de aplicações experimentais com o objetivo de compreender o papel das subpopulações diferentes célula decidual em complicações na gravidez.

Introdução

O endométrio, um dos mais ativos tecidos femininos adultos, sofre remodelação dramática cada ciclo menstrual, em resposta à estimulação por hormônios ovarianos, estrógeno (E2) e progesterona (P4). A decídua, também conhecida como o endométrio grávida, é um tecido reprodutivo criticamente importante que é formado no final da fase de postovulatory como resultado de diferenciação P4-conduzidos seguindo a fase proliferativa E2-dominante. Decidual células são responsáveis pela secreção de fatores hormonais para implantação do blastocisto bem-sucedida e para o desenvolvimento da interface do utero-placentário para a manutenção de tolerância materna para a fetal aloenxerto.<....