Retroductal 나노 Murine Submandibular 동맥에 주입
Summary
Submandibular 동맥을 지역 약물 전달 및 새로운 치료제의 개발에 대 한 이해 침 샘 생물학에서입니다. 선물이 배달 정확성과 실험의 재현성을 향상 시키는 업데이트 및 상세한 retroductal 주입 프로토콜. 여기에 소개 하는 응용 프로그램은 고분자 나노 입자의 배달.
Abstract
침 샘 치료의 두 가지 일반적인 목표는 조직 장애 중 다음의 예방 및 치료 면역 또는 방사선 상해. 로컬 침 샘에 생리 활성 화합물을 함으로써, 큰 조직 농도 조직의 관리 대 안전 하 게 구현할 수 있습니다. 또한, 대상 조직에서 물자의 여분 선 축적 효과 수 극적으로 감소 될. 이와 관련, retroductal 주사 침 샘 생물학과 이상 조사를 위해 널리 사용 되는 방법입니다. Retroductal 관리 성장 요인, 일차 전지, adenoviral 벡터, 그리고 작은 분자 약물의 상해의 설정에서 기능을 지원 하기 위해 표시 되었습니다. 우리는 이전 조사를 다음과 같은 기능을 유지 하기 위해 주입 retroductally 나노 siRNA 전략의 효능을 보여주었다. 여기, 왓슨의 덕트를 통해 murine submandibular 동맥에 나노 소재를 관리 하는 매우 효과적이 고 재현 방법에 대 한 자세한 (그림 1). 우리 구강 접근을 설명 하 고 더 관측 절차에 걸쳐 품질 검사로 재직 cannulate와 튼의 덕트, 하는 데 필요한 단계를 개요.
Introduction
침 샘 기능 장애는 많은 etiologies, Sjögren의 증후군, 기능성 분 비 조직, 그리고 방사선 유발 hyposalivation (RIH), 머리와 목 암 방사선 치료1의 일반적인 sequella의 자기 면역 중재 손실을 포함 하 여 있다. 어느 조건 때문에 침 기능 손실 구두 및 조직의 감염, 충 치, 소화 하 고 삼 키는 기능 장애, 언어 장애, 그리고 주요 우울증1,2,3에 개인을 걸리기. 결과적으로, 삶의 질 크게 겪고 있다, 중재 치료4보다는 증상의 일시적 완화에 국한. Vivo에서새로운 치료 조사, 침 샘에 직접 생리 활성 화합물을 관리 하는 관심입니다.
Retroductal 주사 침 샘에 직접 생리 활성 화합물을 제공 하 고 질병, 부상, 또는 정상 조직의 항상성에서 효능을 테스트 하는 귀중 한 방법입니다. 3 개의 주요 침 샘은 귀 밑 (PG), submandibular (서울시), 그리고 삶의 (SLG), 배설 덕트를 통해 구강에는 빈의 모든. murine의 해부학 SMG cannulation 혀5아래 입의 바닥에 있는 왓슨의 덕트를 통해 직접 액세스를 허용 합니다. Cannulation, solvated 마약 SMG에 직접 관리할 수 있습니다. Retroductal 배달, 다음 외 선의 확산 구조6주위 물자의 교류를 통제 하는 주변 조직 캡슐에 의해 제한 됩니다. SMG와 그 덕트 마찬가지로 인간에서는, 구조는 SMG 수술 및 sialoendoscopy7중에 정기적으로 액세스. 인간과 쥐에서 PG는 마찬가지로 볼 점 막8에서 Stensen의 덕트를 통해 액세스할 수 있습니다.
RIH murine 모델, SMG retroductal 주입 치료제 등 성장 요인, 일차 전지, adenoviral 벡터, cytokines, 부상, 세포질 응답을 조절 하 고 그 결과 감소 하는 항 산화 화합물을 제공 하는 데 사용 되었습니다. 조직 손상5,9,10,11,12,13,14,,1516. Retroductal 주입의 가장 주목할 만한 임상 성공이 이다 (Aquaporin 1; 물 채널의 표현을 직접 adenoviral vector의 관리 AQP1) 머리와 목 암17방사선 환자에.
이전에 우리는 개발과 RIH11,18,,1920에서 침 샘 기능을 보호 하기 위해 retroductally 주입 고분자 나노-siRNA 시스템의 효능 표시. 우리의 과거 작품의 확장, 여기, 우리 우리의 프로토콜 로드 하 고 그렇지 않으면 가난 하 게 녹는 제공 붙일 레이블된 나노 (NP)를 사용 하 여 retroductal 서울시 주입 약21,22, 설명 23.
우리 diblock 공중 합체 폴 리 (스 티 렌-alt-maleic anhydride)-b-poly(styrene) 가역 추가 체인 조각화 (뗏목) 중 합, 앞에서 설명한21통해 (PSMA)의 구성에서 NP를 합성 할. 솔벤트 교류를 통해 이러한 고분자 자발적으로 자기 조립 micelle NP 구조는 소수 성 내부와 친수성 외부21에. NPs는 동물을 희생 하지 않고도 동맥에 NP 배달의 확인을 허용 하도록 텍사스 레드 fluorophore와 함께 표시 됩니다. 동물 영상 라이브와 SMG immunohistochemistry 1 시간 그리고 1 일 주사를 다음에 표시 됩니다.
이 업데이트 하 고 재현할 수 cannulation 프로토콜 retroductal 주입을 달성 하기 위해 다른 사람을 사용 해야 합니다. 우리는이 세련 된 기술을 vivo에서 연구 및 치료 개발24,25에 대 한 중요 한 될 것입니다 기대 합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
Retroductal 주사 침 샘에 지역화 된 약물 전달에 대 한 중요 하다. 이 기술은 응용 프로그램 Sjogren 증후군 및 RIH9,,1028를 포함 하 여 조건에 대 한 치료제를 심사에 있다. Retroductal 주입을 통해 서울시에 직접 약물 전달 주요 이점이 그것의 잠재력을 줄이기 위해 오프 대상 효과, 면역 활성화11를 포함 하 여 조직의 ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 간행물에 보고 된 연구는 국립 연구소의 치과 Craniofacial 연구 (NIDCR)와 보너스 번호 R56 DE025098, UG3 DE027695, 및 CA206296 F30 국립 보건원의 국립 암 연구소 (NCI)에 의해 지원 되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임 이며 반드시 국립 보건원의 공식 의견을 대표 하지 않는다. 이 작품 또한 NSF DMR 1206219와 IADR 혁신 구강 케어 상 (2016)에 의해 지원 되었다.
우리는 제인 Gavrity IVIS 실험 수행에 그녀의 도움에 감사 하 고 싶습니다. 우리는 그들에 그녀의 지원과 입력 카 렌 벤틀리 감사 하 고 싶습니다. 우리는 페이 Lun Weng IHC와 그의 지원에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리는 매튜 잉 그림 준비에 그의 원조에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리는이 논문의 중요 한 읽기 박사 Elaine Smolock, 에밀리 우 감사 하 고 싶습니다.
Materials
| Pilocarpine hydrochloride | Sigma Aldrich | P6503 | Pilocarpine |
| Student Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 91500-9 | Spring Scissors for Tracheostomy |
| Sterile Saline Solution | Medline | RDI30296H | Saline |
| Dumont #7 Forceps | Fine Science Tools | 11274-20 | Curved Forceps |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | Straight Forceps |
| Standard Pattern Forceps | Fine Science Tools | 11000-12 | Blunt Forceps |
| Fine Scissors- Tungsten Carbide | Fine Science Tools | 14568-09 | Dissection Scissors |
| Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes | Fisher Scientific | 22362566 | Capillary tubes |
| Lubricant Eye Ointment | Refresh | N/A | Refresh Lacri-Lube |
| Goat polyclonal anti-Nkcc1 | Santa Cruz Biotech | SC-21545 | Nkcc1 Antibody |
| DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI |
| GraphPad Prism | GraphPad | ver6.0 | Statistical Software |
| Cotton tipped applicator | Medline | MDS202000 | Applicator for eye ointment |
| 0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2" | BD | 7629 | Syringe for intraperitoneal injection |
Referências
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