Доставка местных лекарств в подчелюстной желез представляет интерес в понимании слюнных желез биологии и для развития новых терапевтических средств. Мы представляем обновленную и подробную retroductal инъекции протокол, призванных повысить точность доставки и экспериментальной воспроизводимость. Представленное здесь приложение является поставка полимерных наночастиц.
Две общие цели терапии слюнной железы являются профилактика и лечение дисфункции ткани после либо аутоиммунных или радиационной травмы. Локально поставляя биологически активных соединений в слюнных желез, большей концентрации в тканях можно безопасно достичь против системного администрирования. Кроме того от ткани-мишени эффекты от экстра железистой накопление материала могут быть значительно сокращены. В этой связи retroductal инъекции является широко используемый метод для исследования слюнных желез биологии и патофизиологии. Администрация Retroductal факторов роста, Главные ячейки, аденовирусных векторов и малые молекулы наркотиков было показано для поддержки функции железы в месте травмы. Ранее мы показали эффективность стратегии наночастиц siRNA retroductally вводят для поддержания функции железы после облучения. Здесь, подробно высокоэффективным и воспроизводимый метод для администрирования наноматериалов в мышиных подчелюстной железы через проток Wharton (рис. 1). Мы опишем доступ к ротовой полости и наметить шаги, необходимые для cannulate Wharton протока, с дальнейших наблюдений, выступающей в качестве проверки качества на протяжении всей процедуры.
Слюнные железы дисфункция имеет много этиологии, включая Шёгрен синдром, аутоиммунных опосредованной потери функциональных секреторной ткани, и индуцированного излучения гипосаливация (Рог), общей sequella лучевой терапии рака головы и шеи1. Потеря функции слюнных вследствие либо условие предрасполагает лица устные и системные инфекции, кариес, пищеварения и глотанием дисфункция, нарушение речи и депрессия1,2,3. В результате качество жизни значительно страдает, с мероприятиями, ограничиваясь временное облегчение симптомов, а не лечения4. Расследовать Роман терапии в естественных условиях, она представляет интерес для администрирования биоактивных соединений непосредственно на слюнные железы.
Retroductal инъекции является ценным методом доставить биологически активных соединений непосредственно в слюнных желез и проверить эффективность в болезни, травмы, или под нормальной ткани гомеостаза. Три основных слюнных желез являются околоушной (PG), подчелюстной (SMG) и сублингвально (SLG), все из которых пустым в полости через выделительную воздуховодов. Анатомия мышиных SMG разрешает прямой доступ через катетеризации Wharton протока, расположенный в полу рот под язык5. После катетеризации, сольватированного препараты можно применять непосредственно SMG. После родов retroductal, экстра железистой диффузии ограничивается окружающие ткани капсулу, которая регулирует обмен материала с окружающими структуры6. SMG и ее протоков аналогичным образом структурированы в организме человека и регулярно осуществляется во время SMG хирургии и sialoendoscopy7. В организме человека и мышей PG также доступен через Stensen в воздуховод в слизистой8.
В мышиных моделях Рог SMG retroductal инъекции был использован для доставки терапии, включая факторы роста, Главные ячейки, аденовирусных векторов, цитокинов и Антиоксидантная соединений модулировать клеточный ответ на травмы, и уменьшить полученный ткани ущерб5,9,10,11,12,13,14,,1516. Наиболее заметным клинический успех retroductal инъекции является администрация аденовирусных вектора прямого выражения воды канала (Аквапорин 1; AQP1) у больных после радиации для головы и шеи рак17.
Ранее мы разработали и показана эффективность retroductally вводят полимерные наночастиц siRNA системы защиты слюнной железы от Рог-11,–18,–19,–20. Как расширение нашей прошлой работы здесь, мы демонстрируем, что наш протокол для retroductal SMG инъекций с использованием дневно обозначенные наночастиц (NP), способный погрузки и доставки иначе слаборастворимых лекарств21,22, 23.
Мы синтезированных NP из сополимера диблок состоит из поли (alt Стиролмалеиновый anhydride)-b-poly(styrene) (КСМК) путем полимеризации реверсивные добавлением цепи фрагментации (РАФТ), как описано ранее,21. Через обмен растворителей эти полимеры спонтанно самостоятельно собрать в структуры NP мицеллы с гидрофобным интерьера и гидрофильные наружных21. NPs помечены Техас-красный Флюорофор разрешить проверку NP доставки в желез без ущерба для животного. Живут животных изображений и SMG иммуногистохимия показано на 1 час и 1 день после инъекции.
Это обновление и воспроизводимые катетеризации протокол должен позволить другим для достижения retroductal инъекции. Мы ожидаем, что эта изысканная техника станет критическим в vivo исследований и лечебных развития24,25.
Retroductal инъекций имеет решающее значение для локализованных лекарств в слюнные железы. Эта техника имеет применения в скрининг терапевтических агентов для условий, включая Шегрена и Рог9,10,28. Прямая лекарств в SMG через retroductal инъекция об?…
The authors have nothing to disclose.
Исследования в этой публикации было поддержано Национального Института стоматологии и челюстно-лицевой исследований (NIDCR) и национального института рака (NCI) национальных институтов здравоохранения под награду номер R56 DE025098, UG3 DE027695 и F30 CA206296. Содержание является исключительно ответственности авторов и не обязательно отражают официальную точку зрения национальных институтов здоровья. Эта работа была также поддержана NSF DMR 1206219 и получила инновации в устной Уход награды (2016).
Мы хотели бы поблагодарить за помощь в выполнении экспериментов ИВИС Джейн Gavrity. Мы хотели бы поблагодарить Карен Bentley за ее вклад и помощь в выполнении EM. Мы хотели бы поблагодарить за его помощь в ИХС Weng Пей-Lun. Мы хотели бы поблагодарить Мэтью Ingalls за его помощь в подготовке рис. Мы хотели бы поблагодарить д-ра Элейн Smolock и Эмили Ву для критических чтении этой рукописи.
Pilocarpine hydrochloride | Sigma Aldrich | P6503 | Pilocarpine |
Student Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 91500-9 | Spring Scissors for Tracheostomy |
Sterile Saline Solution | Medline | RDI30296H | Saline |
Dumont #7 Forceps | Fine Science Tools | 11274-20 | Curved Forceps |
Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | Straight Forceps |
Standard Pattern Forceps | Fine Science Tools | 11000-12 | Blunt Forceps |
Fine Scissors- Tungsten Carbide | Fine Science Tools | 14568-09 | Dissection Scissors |
Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes | Fisher Scientific | 22362566 | Capillary tubes |
Lubricant Eye Ointment | Refresh | N/A | Refresh Lacri-Lube |
Goat polyclonal anti-Nkcc1 | Santa Cruz Biotech | SC-21545 | Nkcc1 Antibody |
DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI |
GraphPad Prism | GraphPad | ver6.0 | Statistical Software |
Cotton tipped applicator | Medline | MDS202000 | Applicator for eye ointment |
0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2" | BD | 7629 | Syringe for intraperitoneal injection |