수프라스피날 영역에서 일시적인 수용체 잠재적 인 바닐라 노이드 유형 1 (TRPV1)은 뇌 기능에 있는 몇몇 역할을 하기 위하여 건의되었습니다. 여기에 설명된 마우스에서 수지 척추 TRPV1 둔감화를 위한 수지성 관절 의 주입을 위한 프로토콜이 설명되어 있다. 일부 통증 검사에 대한 절차도 제시됩니다.
과도 수용체 잠재적 인 바닐라노이드 유형 1 (TRPV1), 열민감성 양이온 채널, 말초 신경에 통증을 트리거하는 것으로 알려져있다. 주변 기능 외에도 뇌 기능에 대한 참여도 제안되었습니다. 수지압창신(RTX)은 TRPV1의 장기 둔감화를 유도하는 것으로 알려져 있으며, 이러한 둔감은 TRPV1 표현 세포의 생리적 관련성을 조사하기 위한 대안적인 접근법이었다. 여기에서 우리는 마우스에 있는 RTX를 가진 intracerebroventricular (i.c.v.) 처리를 위한 프로토콜을 기술합니다. 절차는 주변 TRPV1 자극 (RTX 테스트) 및 기계적 자극 (꼬리 압력 테스트)에 고드름을 테스트하기 위해 설명된 다음 다음과 같습니다. RTX i.c.v.를 투여한 마우스의 단각 반응은 대조군의 반응과 비교할 수 있었지만, RTX-i.c.v.-투여된 마우스는 아세트아미노펜의 진통 효과에 민감하지 않았으며, i.c.v. RTX 치료가 수척추 선택적 TRPV1 desensit화를 유도할 수 있음을 시사한다. 이 마우스 모델은 뇌/수피척추 기능에서 TRPV1의 역할을 연구하기 위한 편리한 실험 시스템으로 사용할 수 있습니다. 이러한 기술은 또한 다른 약물의 중심 행동의 연구에 적용 될 수 있습니다.
동물은 말초 신경에 센서를 통해 자신의 환경에서 다양한 물리적 및 화학 자극을받습니다. 과도 수용체 전위 바노이드 타입 1(TRPV1)은 열 센서1,2,2및 TRPV1의 활성화 및/또는 변조역할을 하는 열민감성 비선택적 양이온 채널 중 하나이며 정상 및 염증성 문맥3모두에서 노치프션을 위한 핵심 단계로 알려져 있다. 전반적인 발현 패턴은 논란의 여지가 있지만, TRPV1의 발현은 또한 다양한 뇌 활동(nociception4,온도 조절5,불안6,주의력 결핍 과잉 행동 장애7및 간질8)에관여하는 등 다양한 뇌 활동에 관여하는 등 초라척추 지역에서도 제안되고 있다. 더욱이, 최근에는 널리 사용되는 진통제인 아세트아미노펜이 중앙 TRPV1의 활성화를 중재하여 진통 작용9,,10을유도하는 것이 제안되고 있다.
동물에 대한 캡사이신 및 수지독소(RTX)를 포함한 과잉 TRPV1 작용제의 투여는 TRPV1 양성 뉴런의 죽음과 TRPV1 작용제에 대한 장기간 둔감화를 초래한다11,,12. 국소 적용(인트라더칼13,,14,인종 차별성15,,16, 17,및 및 대간절내18)과결합된 이 화학 절제 접근법은 TRPV1의 생리적 기능을 조사하는 대안을 제공하고 있다.17 우리는 최근에 RTX의 intracerebroventricular (즉, v.) 주사가 마우스에서 아세트아미노펜의 진통 효과를 억제한다는 것을 보고했으며, 이는 수프라스피날 선택적 TRPV1 둔감화19를시사한다. 이 원고에서는 i.c.v. 주입 및 후속 통증 검사를 위한 정확한 프로토콜을 제시합니다.
뇌의 심실로 약물을 직접 주입하면 주변 효과를 최소화하면서 중앙 효과를 연구 할 수 있습니다. 여기에 제시된 i.c.v. 주입 절차는 헤일리와맥코믹(20)에의해 보고된 방법의 수정이다. 이 방법은 관상 봉합사를 통해 측면 심실에 주입 바늘을 삽입하는 것을 포함하고 수통을 위한 특별한 장비 또는 외과 적 절차를 필요로하지 않습니다.
TRPV1 작용제의 주변 지역 응용 프로그램은 불타는 통증 감각과 신경 유발 염증을 불러 일으킵니다. RTX및 TRPV1-KO 마우스로 체계적으로 처리되는 마우스는, 이자극(13)에민감하지 않습니다. 우리는 RTX-i.c.v에서 주변 TRPV1의 보존을 확인하기 위해 RTX (RTX 테스트)의 인트라 플라네타르 주입을 수행했습니다. 마우스. 이 방법은 종래의 포르말린시험(21)을수정하는 것이다.
RTX와 TRPV1-KO 마우스로 체계적으로 처리된 마우스가 기계적자극(11,13,22)에대한 정상임계값을나타낸다는것이 보고되었다. 여기서 우리는 아세트 아미노펜의 진통 효과의 변화를 테스트하기위한 꼬리 압력 테스트 절차를 제시한다.
이러한 절차의 모든 정통 하 고 다양 한, 그리고 다른 약물의 연구에 적용할 수 있습니다.
이러한 실험에서 가장 중요한 단계는 i.c.v. 주입의 성공입니다. 여기에 사용되는 i.c.v. 주입 기술은 매우 간단하지만 몇 가지 연습이 필요합니다. 실험 전에염료(예: 식염수의 0.5% 트라이팬 블루)를 사용해 보세요. 주사가 올바르게 수행되는 경우, 바늘 마크는 관상 봉합사에 분명해야하며 주입 된 염료는 금방 심실및 세 번째 심실에 존재해야합니다. 또한 주입 중에 강제 삽입을 피해야합니다. 바늘…
The authors have nothing to disclose.
없음.
Resiniferatoxin | LKT Laboratories | R1774 | used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test |
Acetaminophen | IWAKI SEIYAKU | gifted from IWAKI SEIYAKU | |
Pentobarbital sodium salt | Tokyo Chemical Industry | P0776 | used for anesthesia |
Ethanol (99.5) | Wako Pure Chemical Industries | 057-00456 | used for dissolving RTX |
Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate | Wako Pure Chemical Industries | 161-21621 | used for dissolving RTX |
25 mL microsyringe | Hamilton | 1702LT | used for i.c.v. injection |
100 mL microsyringe | Hamilton | 1710LT | used for intraplantar injection |
26-gauge disposable needle | TERUMO | NN-2613S | used for i.c.v. injection |
30-gauge disposable needle | NIPRO | 01134 | used for intraplantar injection |
Pressure meter | Ugo Basile | Analgesy-Meter Type 7200 | used for tail pressure test |