Derin Dermal enjeksiyon olarak bir Model Candida albicans deri enfeksiyonu histolojik analizler için
Summary
Burada tarif biz Candida albicans intradermal enjeksiyon sonra deri örnekleri histolojik ve moleküler analizi sağlayan bir protokol. Bu iletişim kuralı cilt yapısal bütünlüğünü korur ve doku-ikamet veya yeni alınan bağışıklık hücreleri gibi patojen dağıtım yerelleştirme için sağlar.
Abstract
Deri vücudun son derece genişletilmiş bir organdır ve bu geniş yüzeyi nedeniyle sürekli mikroorganizmalar için maruz kalmaktadır. Deri Hasari kolayca da buna karşılık, patojenler yayılması kan dolaşımına yol açabilir dermiste enfeksiyonlara yol açabilir. Anlama nasıl bağışıklık sistemi enfeksiyonları çok erken aşamada savaşır ve nasıl ev sahibi Patojenler ortadan kaldırabilir gelecekteki tedavi müdahaleler temelini ayarlamak için önemli bir adımdır. Burada biz bir model sırasında erken enfeksiyon patojen epitel bariyer yanı sıra bağışıklık yanıtı C. albicans tarafından elde edildi geçti zaman da dahil olmak üzere, meydana süreçleri görselleştirebilirsiniz Candida albicans enfeksiyon tarif işgali. Bu enfeksiyon model deri yanı sıra varlığı ve yerelleştirme patojenin sızmak bağışıklık hücreleri gösteren histolojik analizleri gerçekleştirmek için kullanılır. Enfeksiyon RNA çıkarma için işlenen sonra örnekleri topladı.
Introduction
İnsan vücudu mikroorganizmaların son derece yüksek bir numarası ile kaplıdır. Cilt yüzeyi neredeyse bir milyon bakteri başına santimetre kare1yaşam alanıdır. Bu sayı, ancak, cilt colonizes tam mikroorganizmaların çeşitli yansıtmak zorunda değildir. Bakteri ek olarak, insan vücudu hem mukozal ve cilt düzey2hayatta yapabiliyor C. albicans, dahil olmak üzere birçok mantar türü tarafından kolonize.
Son yıllarda, mantar enfeksiyonları ile tanısı insanların yüzdesi çok artmıştır. Bu çok immün kişi, yani, HIV-pozitif hasta ve kemoterapi ya da immünsupresif ilaçlar ile nakli3sonra gitti hasta sayısı yükseldikçe kaynaklanmaktadır. Amerika Birleşik Devletleri’nde yapılan bir gözetim çalışmada, Wisplinghoff ve ark. %9,5 nozokomiyal kan dolaşımına enfeksiyonların Candida türleri4tarafından kaynaklandığını gösterdi. Artan mantar enfeksiyonları ve kan dolaşımına enfeksiyonlar sırasında bulunan Candida türlerinin yükseltilmiş yüzde nedeniyle özellikle nedeniyle, nasıl bu patojen bağışıklık sisteminin kontrolü kaçar anlamak son derece olaydır önemli.
C. albicans Maya, blastospores, pseudohyphae ve5çevre koşullarına bağlı olarak hif gibi farklı morfolojik biçimlerde büyür şekilli bir mantar var. Hyphal haliyle C. albicans en yüksek invasiveness kapasitesini gösterir ve epitel6nüfuz yeteneği vardır.
C. albicans enfeksiyonlar birkaç deneysel yaklaşımlar kullanarak incelenmiştir. En yaygın enfeksiyon C. albicans Maya7İntravenöz enjeksiyon modelidir. Kan dolaşımına yaymak mantar yönetir önce ancak, bu model tüm işlemler bu olmasına göz önünde değil. Başka bir model C. albicans epiteli istila yeteneği yararlanır. Bu yöntem, olarak da bilinir zımpara kağıdı modeli8, Gaspari ve ark. 19989tarafından geliştirilmiş ve böylece stratum korneum C. albicansuygulamadan önce ortadan kaldırarak cildi aşındırmak için zımpara kağıdı kullanmayı oluşur. Bu yordam, böylece bu patojen invaziv yeteneklerini analizini etkinleştirme epitel, nüfuz mantar verir. Son olarak, diğer modelleri enfeksiyonlar gastrointestinal10 ve solunum yolları11 farklı çalışmalarda kullanılmaya başlandı.
(Olduğu gibi zımpara kağıdı modeli) bir yara oluşumu bağışıklık hücre işe alım ve harekete geçirmek, iyileşme süreci12teşvik etmek de dahil olmak üzere çeşitli yollar aktivasyonu neden olur. Bu alter veya maske bağışıklık yanıtı özellikle böylece sonuçları semptomlarıdır için önde gelen patojen karşı elde edildi.
Burada bir yöntemin ilk yara oluşumunu önler deri enfeksiyonu ve indüksiyon bazal inflamatuar ortamı açıklanmaktadır. Sağlam epitel yapısını korumak için biz doğrudan C. albicans hyphal haliyle derin derma enjekte et. Tek bir enjeksiyon hafif inflamasyon temin rağmen iltihap miktarı sınırlı ve sınırlı olduğu gibi kum kağıt modeli açık bir yara oluşumu ile karşılaştırıldığında. Biz burada tarif yaklaşım mantar enfeksiyonu ve mekanik zarar tarafından aşırı ve önceden varolan inflamatuar çevre kaçınırken yaymak için bağışıklık yanıtının çalışma sağlar.
Protocol
Representative Results
Discussion
Burada biz bir yöntem C. albicans enfeksiyon mantar derin derma girişte üzerine başlatılan enflamatuar süreç çalışmaya nitelendirdi.
Cilt apse oluşumu üzerine C. albicans enfeksiyon15nispeten nadir bir olay olsa bile, enjeksiyon doğrudan içinde derin derma mantar mantar tahrik apse oluşumu çalışma, hem de belirli bağışıklık analizini sağlar mantar içerecek şekilde katılmak hücreleri yayıldı. Burada açıklanan yöntemle, b…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
FG la Ricerca sul Cancro (IG 2016Id.18842) başına Associazione Italiana, Cariplo Vakfı (Grant 2014-0655) ve Fondazione Regionale la Ricerca Biomedica (Ferroburak) başına tarafından desteklenmektedir.
Iz NIH grant 1R01AI121066-01A1, 1R01DK115217, HDDC P30 DK034854 grant, Harvard Tıp Okulu Milton bulduğunu, CCFA üst düzey Araştırma Ödülü (412708), Eleanor ve mil Shore tarafından desteklenmektedir 50 yıldönümü Bursları ve Cariplo Vakfı ( 2014-0859).
Materials
| Reagents | |||
| PBS | Euroclone | ECB4053L | warm in 37 °C bath before use |
| H-OCT compound | histo-line laboratories | R0030 | |
| Gill's Hematoxilyn | histo-line laboratories | 09-178-2 | |
| Eosin Y solution, alcoholic | histo-line laboratories | 09-209-05 | |
| Ethanol absolute | scharlau | ET00232500 | |
| Citro-HISTOCLEAR | histo-line laboratories | R0050 | |
| Eukitt, mounting medium | bio-optica | ||
| Acetone | sigma-aldrich | 179124 | |
| PAS staining system | sigma-aldrich | 395B-1KT | |
| Bacto Peptone | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | BD | 212750 | |
| D(+)-Glucose anhydrous for molecular biology | Applichem PanReac | 50-99-7 | |
| Uridine | Merck Millipore | 8451 | |
| HEPES | Applichem PanReac | A1070,0500 | |
| Safe-Lock tubes 2 mL | eppendorf | 30121597 | |
| TRIzol Reagent | Life Technologies | 15596018 | Toxic, corrosive and mutagen. Use all precaution needed |
| Rneasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 | |
| liquid nitrogen | Wear eye protection | ||
| Instrument | |||
| Coulter Counter-Particle Count | Beckman Coulter | ||
| Centrifuge 5415 R | eppendorf | ||
| MC 3000 Microtome Cryostat | histo-line laboratories | ||
| TissueLiser | QIAGEN | ||
| Materials | |||
| 0.3 ml Insulin Syringe with a 30G x 8mm needle | BD | 324826 | |
| Surgical forceps | |||
| Surgical scissors | |||
| Base mould disposable | histo-line laboratories | 2781 | |
| Positively charged bio microscope slides | bio-optica | 09-2000 | |
| Cover slips 24 x 50 mm | thermo scientific | 11911998 |
Referências
- Belkaid, Y., Segre, J. A. Dialogue between skin microbiota and immunity. Science. 346 (6212), 954-959 (2014).
- Kashem, S. W., Kaplan, D. H. Skin Immunity to Candida albicans. Trends Immunol. 37 (7), 440-450 (2016).
- Havlickova, B., Czaika, V. A., Friedrich, M. Epidemiological trends in skin mycoses worldwide. Mycoses. 51, 2-15 (2008).
- Wisplinghoff, H., Bischoff, T., Tallent, S. M., Seifert, H., Wenzel, R. P., Edmond, M. B. Nosocomial Bloodstream Infections in US Hospitals: Analysis of 24,179 Cases from a Prospective Nationwide Surveillance Study. Clin Infect Dis. 39 (3), 309-317 (2004).
- Romani, L. Immunity to fungal infections. Nat Rev Immunol. 4 (1), 11-24 (2004).
- Odds, F. C. Pathogenesis of Candida infections. J Am Acad Dermatol. 31 (3), S2-S5 (1994).
- MacCallum, D. M., Odds, F. C. Temporal events in the intravenous challenge model for experimental Candida albicans infections in female mice. Mycoses. 48 (3), 151-161 (2005).
- Dai, T., Kharkwal, G. B., Tanaka, M., Huang, Y. -. Y., Bil de Arce, V. J., Hamblin, M. R. Animal models of external traumatic wound infections. Virulence. 2 (4), 296-315 (2018).
- Gaspari, A. A., Burns, R., Nasir, A., Ramirez, D., Barth, R. K., Haidaris, C. G. CD86 (B7-2), but not CD80 (B7-1), expression in the epidermis of transgenic mice enhances the immunogenicity of primary cutaneous Candida albicans infections. Infect Immun. 66 (9), 4440-4449 (1998).
- Koh, A. Y. Murine models of Candida gastrointestinal colonization and dissemination. Eukaryot Cell. 12 (11), 1416-1422 (2013).
- Mear, J. B., et al. Candida albicans Airway Exposure Primes the Lung Innate Immune Response against Pseudomonas aeruginosa Infection through Innate Lymphoid Cell Recruitment and Interleukin-22-Associated Mucosal Response. Infect Immun. 82 (1), 306-315 (2014).
- Leoni, G., Neumann, P. -. A., Sumagin, R., Denning, T. L., Nusrat, A. Wound repair: role of immune-epithelial interactions. Mucosal Immunol. 8 (5), 959-968 (2015).
- Fonzi, W. A., Irwin, M. Y. Isogenic strain construction and gene mapping in Candida albicans. Genética. 134 (3), 717-728 (1993).
- Santus, W., et al. Skin infections are eliminated by cooperation of the fibrinolytic and innate immune systems. Sci Immunol. 2 (15), (2017).
- Florescu, D. F., Brostrom, S. E., Dumitru, I., Kalil, A. C. Candida albicans Skin Abscess in a Heart Transplant Recipient. Infect Dis Clin Pract. 18 (4), 243-246 (2010).
- Pradeu, T., Cooper, E. L. The danger theory: 20 years later. Front Immunol. 3, 287 (2012).
- Cheng, A. G., DeDent, A. C., Schneewind, O., Missiakas, D. A play in four acts: Staphylococcus aureus abscess formation. Trends Microbiol. 19 (5), 225-232 (2011).
