Um protocolo para adquirir o Tenocyte degenerativa dos humanos

Soo-Hong Han; Hyung Kyung Kim; Jong-Ho Ahn; Dong Hyeon Lee; Minjung Baek; Geunhee Ye; Joong-Myung Lee; Kyunghoon Min; Chihoon Oh; Soonchul Lee

doi:10.3791/57634

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Artigo de método

Um protocolo para adquirir o Tenocyte degenerativa dos humanos

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DOI:

10.3791/57634

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9 de junho de 2018

Soo-Hong Han^*¹ , Hyung Kyung Kim^*² , Jong-Ho Ahn^*¹ , Dong Hyeon Lee³ , Minjung Baek¹ , Geunhee Ye¹ , Joong-Myung Lee¹ , Kyunghoon Min⁴ , Chihoon Oh¹ , Soonchul Lee¹

¹Department of Orthopaedic Surgery, CHA Bundang Medical Center, CHA University School of Medicine, ²Department of Pathology, Kyung Hee University Hospital at Gangdong, Kyung Hee University School of Medicine, ³Department of Physiology, CHA University School of Medicine, ⁴Department of Rehabilitation, CHA Bundang Medical Center, CHA University School of Medicine

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Uso in vitro de tenocytes degenerativa é essencial ao investigar a eficácia do tratamento romance na tendinopatia. No entanto, a maioria dos estudos de investigação usar apenas o modelo animal ou um tenocyte saudável. Propomos o seguinte protocolo para isolar tenocytes degenerativa humana durante a cirurgia.

Resumo

Tendinopatia, uma condição dolorosa que se desenvolve em resposta à degeneração do tendão, está em ascensão no mundo desenvolvido devido ao aumento da atividade física e a esperança de vida. Apesar de sua crescente prevalência, a patogênese subjacente ainda permanece incerto, e o tratamento é geralmente sintomático. Recentemente, várias opções terapêuticas, incluindo fatores de crescimento, as células-tronco e terapia gênica, foram investigadas na esperança de aumentar a potência de cura do tendão degenerativa. No entanto, a maioria destes estudos de investigação foram realizada somente em modelos animais ou tenocytes humana saudável. Apesar de alguns estudos usando tenocytes patológico, para o melhor de nosso conhecimento não há atualmente nenhum protocolo descreve como obter tenocytes degenerativa humana. O objetivo deste estudo é descrever um protocolo padrão para a aquisição de tenocytes degenerativa humana. Inicialmente, o tecido do tendão foi colhido de um paciente com epicondilite lateral durante a cirurgia. Em seguida, foram coletadas amostras de biópsia do extensor carpi radial brevis tendão correspondendo a mudanças estruturais observadas no momento da cirurgia. Todos os tendões colhidos apareceram para ser maçante, cinza, friável, e edematosa, que fez-los visualmente distintos daqueles saudáveis. Tenocytes foram cultivadas e usadas para experimentos. Entretanto, metade dos tecidos colhidos foram analisados histologicamente, e foi mostrado que partilhavam as mesmas características chaves da tendinopatia (angiofibroblástico displasia ou hiperplasia). Uma análise secundária por imunocitoquímica confirmou que as células cultivadas foram tenocytes com a maioria das células ter manchas positivas para proteínas mohawk e tenomodulin. As qualidades da natureza degenerativa de tenocytes foram então determinadas comparando-se as células com o controle saudável usando um ensaio de proliferação ou qRT-PCR. O tenocyte degenerativa exibido uma maior taxa de proliferação e padrões de expressão de gene semelhante de tendinopatia que combinasse os relatórios anteriores. Em geral, este novo protocolo poderá fornecer uma ferramenta útil para futuros estudos de tendinopatia.

Introdução

Tendinopatia é uma condição de músculo-esquelética crônica degenerativa que se desenvolve em várias partes do corpo. Recentemente, o número de casos de tendinopatia aumentou consideravelmente no mundo desenvolvido devido à crescente participação em esportes recreativos e maior expectativa de vida¹^,². A causa da tendinopatia é considerada multifatorial e essas causas incluem isquemia, lesões de radicais livres de oxigênio, um desequilíbrio entre inervações vasoconstritor e vasodilatador, micro-rasga interna e alterações neuro-Regulamento³ ^,⁴^,