Nous décrivons ici l’induction de syndrome néphrotique expérimental chez la souris 129S1/SvImJ par injection rapide rétrooculaire de la doxorubicine. Nous traitons également néphrotiques souris avec des boulettes de libération prolongée contenant aprotinine pour inhiber l’activité de la protéase sérine urinaire et prévenir la rétention sodée.
Syndrome néphrotique est la manifestation la plus extrême de la maladie rénale protéinurie et caractérisée par la forte protéinurie, hypoalbuminémie et œdème dû à une rétention de sodium et l’hyperlipidémie. Afin d’étudier la physiopathologie de ce syndrome, rongeur modèles ont été développés basée sur l’injection de substances toxiques comme la doxorubicine podocyte endommageant. Chez les souris, seulement quelques souches sont sensibles à ce modèle. Chez les souris de type sauvage de 129S1/SvImJ, l’administration de la doxorubicine par une injection intraveineuse rapide pour le sinus rétrooculaire induit un syndrome néphrotique expérimental qui présente tous les symptômes de la maladie humaine, y compris l’oedème et la rétention de sodium. Après l’apparition d’une protéinurie, pièce souris augmenté activité de protéase de sérine urinaire qui aboutit à l’activation du canal sodique épithélial (ENaC) et rétention sodique. Inhibition pharmacologique des protéases à sérine urinaire par le traitement avec LIBERATION PROLONGEE aprotinine abroge l’activation de l’ENaC et empêche la rétention sodée. Ce modèle est idéal pour étudier la physiopathologie de la proteasuria, i.e., l’excrétion des protéases à sérine active qui provoquent l’activation de l’ENaC de la protéolyse de la sous-unité γ. Cela peut être considéré comme le principal mécanisme d’activation de l’ENaC et rétention sodique dans la maladie de rein albuminuriques.
Syndrome néphrotique est caractérisé par l’hyperlipidémie, hypoalbuminémie, œdème et protéinurie lourde et peut être considéré comme la manifestation la plus extrême de la maladie rénale protéinurie. Chez les rongeurs, syndrome néphrotique expérimental peut être induit par une injection unique d’anthracyclines ou puromycine qui entraîne des dommages podocyte et ressemble à la maladie humaine changement minimal et glomérulosclérose segmentaire (FSG)1. Après sa première description en 1955 par Frenk et al. 2, néphrose de nucléosides de puromycine (PAN) chez le rat est devenu un modèle standard pour enquêter sur la pathophysiologie du syndrome néphrotique dans nombreuses études3,4,5,6. Chez la souris, le modèle correspondant peut être induit par les anthracyclines doxorubicine7. Cependant, il y a une forte dépendance-souche génétiquement déterminé par au moins deux loci génétiques8. En outre, il y a des différences dans la réponse de protéinurie et cours du syndrome néphrotique9,10. En utilisant 129S1/SvImJ souris et une injection intraveineuse rapide de la doxorubicine via le sinus rétrooculaire, réponses de protéinurie atteignent des valeurs qui sont suffisants pour induire les caractéristiques typiques du syndrome néphrotique, particulièrement des rétention de volume caractérisée par ascite et presque sans sodium urinaire7. Rétention de sodium dans le syndrome néphrotique expérimental a été présumée être le résultat de l’activation du canal sodium épithélial (ENaC) dans le tubule distal par des protéases de sérine aberrantly filtrée comme la plasmine provoquant la protéolyse de la sous-unité γ4 ,11,12. Récemment, ce concept a été prouvé chez les souris néphrotiques étaient protégés du protéolytique ENaC activation et rétention sodée par traitement avec l’aprotinine d’inhibiteur de protéase sérine qui était tout aussi efficace que l’ENaC bloqueur amiloride13. Afin d’assurer la distribution en continu pour le tubule distal, aprotinine a été administré par l’intermédiaire de granulés à libération prolongée par voie sous-cutanée implantée. Les études à venir sont tenus d’identifier les protéases à sérine qui sont responsables de l’activation protéolytique de ENaC dans le syndrome néphrotique qui semble parallèle à la situation de l’homme. À cette fin, un syndrome néphrotique induite par la doxorubicine est un modèle précieux qui peut être utilisé chez les souris de type sauvage ou élargi à des souris génétiquement modifiées. Ses avantages sont le faible coût du médicament, moins complexe, de gestion et de la bonne reproductibilité14.
Dans cet article, nous démontrons l’induction de syndrome néphrotique expérimental par injection intraveineuse rapide de doxorubicine pour le sinus rétrooculaire et l’implantation de pellets de libération prolongée contenant aprotinine pour inhiber la protéase de sérine urinaire activité mesurée avec un dosage chromogénique.
Ici, nous démontrons que doxorubicine injectable par injection de sinus rétrooculaire induit un syndrome néphrotique expérimental chez la souris 129S1/SvImJ avec protéinurie, rétention sodique, hypoalbumenia et l’hyperlipidémie. Cependant, il y a deux questions cruciales qui doivent être prises en compte lors de l’utilisation de ce modèle. Tout d’abord, la modèle induction est strictement dose-dépendante et déviations de dose doxorubicine aussi petite que 0,3 µg/g affectent la réponse de la souris<sup…
The authors have nothing to disclose.
Cette étude a été financée par une subvention de la Fondation de recherche allemande (DFG, AR 1092/2-1).
supplies | |||
BD Micro FINE + U-40 (0.30 mm x 8 mm) | BD Deutschland GmbH, Heidelberg, Germany | PZN: 07468060 | syring |
ETHILON*II (5/0, 16 mm, 3/8c, 45 cm) | Johnson&Johnson Medical GmbH, Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany) | EH7823H | suture |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
reagents | |||
aprotinin (6000 KIU/mg) | LOXO, Heidelberg, Germany | CAS 9087-70-1 | |
Bepanthen, Augen- und Nasensalbe | Bayer Vital GmbH, Leverkusen, Germany | PZN: 1578681 | ointment |
Chromogenix S-2251 | HAEMOCHROM DIAGNOSTICA GmbH, Essen, Germany | 82 0332 39 | chromogenic substrate |
doxorubicin (2.0 µg/µL) | Cell Pharm, Bad Vilbel, Germany | CAS 25316-40-9 | doxorubicin |
isofluran CP (1 mL/mL) | CP-Pharma, Burgdorf, Germany | CAS 26675-46-7 | isofluran |
pellets with matrix-driven sustained release (custom-made) | Innovative Research of America, Sarasota, FL | X-999 | pellet |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
equipment | |||
ELx808 Absorbance Mikroplate Reader | BioTek, Bad Friedrichshall, Germany | ELx808 | microplate reader |
MICROSTERIL – 436 | B.M.S., Trescore Balneario, Italy | GAL/436 | sterilizer |
Hybridization oven/shaker | GE Healthcare UK Limited, Amersham LIFE SCIENCE, Little Chalfont, UK | RPN 2511 | heat chamber |
Thermo MAT Pro 10 W, 15×25 cm, Lucky Reptile | Import Export Peter Hoch GmbH, Waldkirch, Germany | 61201 | mouse warming device |