Induzione della sindrome nefrotica in topi da iniezione Retrobulbar di doxorubicina e prevenzione della ritenzione di Volume di rilascio prolungato aprotinina
Summary
Qui, descriviamo l’induzione della sindrome nefrotica sperimentale nei topi di 129S1/SvImJ di iniezione rapida retrobulbar di doxorubicina. Trattiamo anche topi nefrosica con pellet di rilascio prolungato contenenti aprotinina per inibire l’attività della proteasi della serina urinaria e prevenire la ritenzione di sodio.
Abstract
La sindrome nefrotica è la manifestazione più estrema della malattia renale proteinuric e caratterizzata da proteinuria pesante, ipoalbuminemia ed edema a causa di ritenzione di sodio e l’iperlipidemia. Per studiare la fisiopatologia di questa sindrome, roditore sono stati sviluppati modelli basato sull’iniezione di sostanze tossiche quali doxorubicina provocando danni Podocita. In topi, solo alcuni ceppi sono sensibili a questo modello. Nei topi selvatici 129S1/SvImJ, la somministrazione di doxorubicina tramite iniezione endovenosa rapida al seno retrobulbar induce la sindrome nefrotica sperimentale che caratterizza tutti i sintomi della malattia umana, compreso l’edema e ritenzione di sodio. Dopo l’inizio della proteinuria, topi esposizione aumentata attività della proteasi della serina urinaria che conduce all’attivazione del canale epiteliale del sodio (ENaC) e ritenzione di sodio. L’inibizione farmacologica della proteasi della serina urinaria dal trattamento con rilascio prolungato aprotinina abroga l’attivazione ENaC e previene la ritenzione di sodio. Questo modello è ideale per studiare la fisiopatologia della proteasuria, cioè., l’escrezione delle proteasi della serina attivo che causano l’attivazione di ENaC di proteolisi di sua subunità γ. Questo può essere considerato come il meccanismo principale di attivazione di ENaC e ritenzione di sodio nella malattia renale proteinuric.
Introduction
La sindrome nefrosica è caratterizzata da iperlipidemia, ipoalbuminemia, edema e proteinuria pesante e può essere considerata come la manifestazione più estrema della malattia renale proteinuric. Nei roditori, sindrome nefrotica sperimentale può essere indotta da una singola iniezione di antracicline o con puromicina che conduce a danno del Podocita e somiglia malattia minima del cambiamento umano e glomerulosclerosis segmentale focale (FSGS)1. Dopo la sua prima descrizione nel 1955 da Frenk et al. 2, nefrosi di nucleosidici con puromicina (PAN) in ratti sono diventato un modello standard per studiare la fisiopatologia della sindrome nefrotica in numerosi studi3,4,5,6. Nei topi, il modello corrispondente può essere indotta da antraciclina doxorubicina7. Tuttavia, c’è una forte dipendenza ceppo geneticamente determinato da almeno due loci genetici8. Inoltre, ci sono differenze nella risposta proteinuric e nel corso della sindrome nefrotica9,10. Mediante iniezione endovenosa rapida di doxorubicina e topi 129S1/SvImJ via il seno retrobulbar, risposte a proteinuria raggiungono valori che sono sufficienti per indurre le caratteristiche tipiche della sindrome nefrosica, in particolare ritenzione di volume caratterizzato da ascite e quasi privo di sodio dell’urina7. Ritenzione di sodio nella sindrome nefrosica sperimentale è stata presunta per essere il risultato dell’attivazione del canale epiteliale del sodio (ENaC) nel tubulo distale da proteasi della serina aberrante filtrata come la plasmina causando proteolisi della sua subunità γ4 ,11,12. Recentemente, questo concetto è stato dimostrato in topi nefrotico che erano protetti da attivazione proteolitica di ENaC e ritenzione di sodio dal trattamento con la serina proteasi inibitore aprotinina che era ugualmente efficace come l’ENaC blocker amiloride13. Per assicurare la fornitura continua di tubulo distale, aprotinina è stato amministrato tramite rilascio prolungato impiantato sottocute pellet. Gli studi futuri sono necessarie per identificare le proteasi della serina che sono responsabili per l’attivazione proteolitica di ENaC nella sindrome nefrosica, che è pensata per la situazione umana in parallelo. Per questo scopo, sindrome nefrotica indotta da doxorubicina è un modello prezioso che può essere utilizzato nei topi wild-type o ampliato a topi geneticamente modificati. I vantaggi includono basso costo del farmaco, minore complessità di gestione e buona riproducibilità14.
In questo articolo, dimostriamo l’induzione della sindrome nefrotica sperimentale di iniezione endovenosa rapida di doxorubicina al seno retrobulbar e l’impianto di pellet a rilascio prolungato contenenti aprotinina per inibire la proteasi della serina urinaria attività come misurato con un test cromogenico.
Protocol
Representative Results
Discussion
Qui, dimostriamo che iniezione di doxorubicina tramite iniezione retrobulbar del seno induce la sindrome nefrotica sperimentale nei topi di 129S1/SvImJ con proteinuria, ritenzione di sodio, hypoalbumenia e iperlipidemia. Tuttavia, ci sono due problemi critici che devono essere presi in considerazione quando si utilizza questo modello. In primo luogo, l’induzione del modello è strettamente dipendente dalla dose e deviazioni della dose di doxorubicina piccolo come 0,3 µ g/g di influenzano la risposta dei topi<sup class="…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo studio è stato sostenuto da una sovvenzione della Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, AR 1092/2-1).
Materials
| supplies | |||
| BD Micro FINE + U-40 (0.30 mm x 8 mm) | BD Deutschland GmbH, Heidelberg, Germany | PZN: 07468060 | syring |
| ETHILON*II (5/0, 16 mm, 3/8c, 45 cm) | Johnson&Johnson Medical GmbH, Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany) | EH7823H | suture |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| reagents | |||
| aprotinin (6000 KIU/mg) | LOXO, Heidelberg, Germany | CAS 9087-70-1 | |
| Bepanthen, Augen- und Nasensalbe | Bayer Vital GmbH, Leverkusen, Germany | PZN: 1578681 | ointment |
| Chromogenix S-2251 | HAEMOCHROM DIAGNOSTICA GmbH, Essen, Germany | 82 0332 39 | chromogenic substrate |
| doxorubicin (2.0 µg/µL) | Cell Pharm, Bad Vilbel, Germany | CAS 25316-40-9 | doxorubicin |
| isofluran CP (1 mL/mL) | CP-Pharma, Burgdorf, Germany | CAS 26675-46-7 | isofluran |
| pellets with matrix-driven sustained release (custom-made) | Innovative Research of America, Sarasota, FL | X-999 | pellet |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| equipment | |||
| ELx808 Absorbance Mikroplate Reader | BioTek, Bad Friedrichshall, Germany | ELx808 | microplate reader |
| MICROSTERIL – 436 | B.M.S., Trescore Balneario, Italy | GAL/436 | sterilizer |
| Hybridization oven/shaker | GE Healthcare UK Limited, Amersham LIFE SCIENCE, Little Chalfont, UK | RPN 2511 | heat chamber |
| Thermo MAT Pro 10 W, 15×25 cm, Lucky Reptile | Import Export Peter Hoch GmbH, Waldkirch, Germany | 61201 | mouse warming device |
Referências
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