Um protocolo para melhorar os sinais de íon de carboidrato em espectrometria de massa MALDI por reformas estruturas cristalinas durante os processos de preparação de amostra é demonstrado.
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Artigo de método
Um método de preparação de amostra eficiente para melhorar os sinais de íon carboidrato em espectrometria de massa de ionização/dessorção de Matrix-assisted Laser
Neste artigo
Resumo
Resumo
Preparação da amostra é um processo crítico na análise de espectrometria de massa (MS) de hidratos de carbono. Apesar de dessorção/ionização de laser assistida por matriz (MALDI) MS é o método de escolha na análise de hidrato de carbono, reprodutibilidade de dados e sinal pobre do íon de amostras de hidrato de carbono continuam a ser problemas graves. Para análise quantitativa de hidratos de carbono, um protocolo eficaz analítico, oferecendo qualidade superior dos dados é necessário. Este vídeo demonstra os protocolos de preparação de amostra para melhorar a intensidade do sinal e minimizar a variação de dados de carboidratos em MALDI-MS. Após a secagem e cristalização de gotas da amostra, a morfologia do cristal é reformada por metanol antes da análise de espectrometria de massa. A melhoria no sinal de hidrato de carbono é examinada com espectrometria de massa MALDI imagem (IMS). Resultados experimentais mostram que a reforma de cristal ajusta estruturas cristalinas e redistribui os analitos de hidrato de carbono. Em comparação com o método de preparação de gotas secas em convencional MALDI-MS, reforma morfologias de cristal de hidrato de carbono com metanol mostra significativamente melhor intensidade de sinal, distribuição de imagem de íon e estabilidade de dados. Desde os protocolos demonstrados neste documento não implicam mudanças na composição da amostra, eles são geralmente aplicáveis aos vários hidratos de carbono e matrizes.
Introdução
Análise de carboidratos é um assunto importante e desafiador. Carboidratos e seus derivados desempenham importantes funções no vivendo organismos1,2,3. Estas moléculas têm complicado estruturas e são propensas a se decompor. Muitos deles não podem ser claramente caracterizados devido às dificuldades de separação e deteção. Apesar do laser assistida por matriz (MALDI) de dessorção/ionização espectrometria (MS) foi aplicada a análise de uma ampla gama de biomoléculas, devido à sua sensibilidade e resultados compreensíveis4, analisar carboidratos usando M....
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Protocolo
1. placa pré-condicionamento da amostra
-
Limpeza da placa de amostra
- Use luvas de nitrilo para evitar a contaminação da placa da amostra durante a limpeza.
- Lave a placa da amostra com 100,0 mL de solução de detergente (1,0 mg/mL).
- Lave a placa da amostra com água destilada-deionizada (DDW).
- Enxague a superfície da placa de amostra com 30,0 mL de MeOH.
- Colocar a placa de amostra em um béquer de 600 mL e preenchimento com DDW até a placa da amostra está totalmente imerso em água.
- Coloque o copo em um ultra-som do banho (ver tabela de materiais) e....
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Resultados
Imagens SEM representante de SLeA misturado com DHB preparado usando DD e métodos de recristalização são mostrados na Figura 1. Uma morfologia típica de DHB como preparado pelo método DD é grandes cristais em forma de agulha na borda e estruturas cristalinas bem no centro dos pontos de amostra. Os comprimentos típicos de tais cristais em forma de agulha são ~ 100 µm. Após a recristalização por MeOH, a amostra tem uma maior área coberta uniformement.......
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Discussão
Heterogeneidade da amostra é que um problema crucial no DD MALDI-MS. é o mais usado método de preparação de amostra, mas os cristais resultantes são altamente heterogêneos. Tais exemplos mostram reprodutibilidade pobre sinal de tiro-ao-shot e amostra-para-amostra. Portanto, procurando por "sweet spots" em áreas de amostra durante a aquisição de dados é um procedimento comum em experimentos MALDI. Tais amostras heterogêneas são impróprias para quantificação em análises de rotina.
No estudo atua.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Os autores têm sem agradecimentos.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Reagente | |||
| Detergente em pó | Alconox | 242985 | |
| Metanol | Merck | 106009 | |
| Acetonitrila | Merck | 100003 | |
| Ácido 2,5-di-hidroxibenzóico (DHB) | Alfa Aesar | A11459 | |
| sialil-lewis A (SLeA) | Sigma-Aldrich | S1782 | |
| Maltoheptaose | Sigma-Aldrich | M7753 | |
| Mettler Toledo | 17005091 | ||
| Tubo de microcentrífuga | Axygen | MCT-150-C | |
| Equipamento | |||
| Milli-Q sistema de purificação de água | Millipore | ZMQS6VFT1 | |
| Luvas de nitrilo sem pó | Microflex | SU-690 | |
| Copo de 600 mL | Duran | 2110648 | |
| Limpador ultrassônico | Delta | DC300H | |
| Higrômetro | Wisewind | 5330 | |
| Medidor de vazão de gás nitrogênio | Dwyer | RMA-6-SSV | |
| Termopares tipo K | Digitron | 311-1670 | |
| Misturador de vórtice | Scientific Industries | SI-0236 | |
| Mini centrífuga | Select BioProducts | Force Mini | |
| Pipeta | Rainin | pipet-lite XLS | |
| Estereomicroscópio | Olympus | SZX16 | |
| Câmara de secagem com temperatura controlável | Este espectrômetro | ||
| Bruker Daltonics | |||
| MTP 384 placa alvo aço polido BC | Bruker Daltonics 8280781 | ||
| Flexcontrol Versão 3.4 | Bruker Daltonics | Software de controle | |
| Fleximaging Versão 2.1 | Bruker Daltonics | Software de imagem | |
| Flexanalysis Versão 3.4 | Bruker Daltonics | Software de análise |
Referências
- Holme, D. J., Peck, H. Analytical Biochemistry. , 3rd edn, Addison Wesley Longman Limited. (1998).
- Costello, C. E. Time, life ... and mass spectrometry - New techniques to address biological questions. Biophysical Chemistry. 68 (1-3), 173-188 (1997).
- Caroff, M., Karibian, D.
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Reimpressões e permissões
